代谢性谷氨酸受体配体参与大鼠海马脑缺血耐受诱导机制的研究

背景：代谢型谷氨酸受体是G蛋白偶联的膜受体，参与脑内多种生理、病理过程，但其参与脑缺血耐受的诱导机制尚不清楚。目的：探讨代谢型谷氨酸受体2／3、代谢型谷氨酸受体1／5在脑缺血耐受诱导中的作用。设计：以动物为研究对象，随机对照实验。单位：一所省级医院的神经科和一所大学的基础研究所病理生理学研究室。材料：实验于2002-05／2003-05在河北医科大学基础医学研究所病理生理研究室完成。健康雄性SpragueDawley大鼠64只由河北医科大学实验动物中心提供。试剂胶质纤维酸性蛋白抗体、MTPG和(s)-4C3HPG均购自Sigma公司。干预：采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型，应用硫堇染色和胶质纤维酸性蛋白免疫组化法。64只大鼠椎动脉凝闭后分为假手术组、单纯预处理组、单纯缺血组、脑缺血耐受组，MTPG+假手术组、MTPG+脑缺血耐受组、MTPG+缺血组和(S)-4C3HPG+脑缺血耐受组，所有动物均在手术后或末次缺血后7d处死取材，行脑组织切片，硫堇染色和胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色。主要观察指标：观察海马锥体细胞形态学变化及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达的变化。结果：①单纯8min缺血可使海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低和胶质纤维酸性蛋白阳性表达增加(P<0．05)。②脑缺血耐受组未见单纯缺血组的上述变化，表明脑缺血预处理可防止后续8min缺血造成的神经元损伤。③脑缺血预处理的这种保护作用可被MTPG或(s)-4C3HPG阻断，表现为海马CAl区组织学分级升高和锥体神经元密度降低(P<0．05)。结论：MTPG或(s)-4C3HPG可阻断脑缺血预处理诱导脑缺血耐受的作用，提示代谢型谷氨酸受体2／3，代谢型谷氨酸受体1／5参与脑缺血耐受的诱导，揭示了其对神经损伤保护作用的机制。

代谢型谷氨酸受体亚型在成年猕猴腰骶段脊髓中的分布

目的:为探讨代谢型谷氨酸受体亚型在猕猴脊髓 中可能的功能提供形态学依据.方法:采用免疫组织化学技 术,在光学显微镜下观察代谢型谷氨酸受体亚型(mGluR1α, 2/3,5,7)在大鼠腰骶段脊髓内的分布.结果:mGluR1α在 脊髓全层中均有分布.在后角浅层中,免疫染色阳性产物主要 见于神经毡和少量中间神经元的胞体及突起.在后角深层、中 间带外侧核以及脊髓前角中则分布有较多数量的免疫染色阳 性的神经元胞体和突起,其中前角运动神经元呈免疫染色强 阳性;mGluR5样免疫染色阳性结构在后角浅层中也主要分布 于神经毡和中间神经元的胞体及突起,而在脊髓的其他区域 则分布有大量的免疫染色强阳性神经元及突起;mGluR2/3和 mGluR7亚型主要分布在脊髓后角浅层神经毡,未见免疫染色 阳性神经元.结论:代谢型谷氨酸受体可能对成年哺乳动物 脊髓局部环路的信息传递与整合发挥?

代谢性谷氨酸受体1在单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮质17区的表达及超微结构观察

目的探讨视觉形成关键期内单眼形觉剥夺弱视大鼠初级视皮质17区中代谢性谷氨酸受体1（mGluR1）的表达规律及神经元超微结构变化，为临床上揭示弱视的病理机制及防治提供依据。方法随机对照同期动物实验。方法是建立大鼠单眼形觉剥夺弱视模型，经图形视觉诱发电位检测证实造模成功后，与正常对照组大鼠一起灌注、固定、取材、做石蜡切片，进行免疫组织化学染色和电镜观察，摄像显微镜分层照相，计算机图像分析系统进行图像分析，SPSS11．5统计学软件进行方差分析。结果弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层与正常对照组大脑视皮质17区Ⅳ层和弱视眼同侧大脑视皮质17区Ⅳ层相比，mGluR1阳性着色神经元面积减少，差异有统计学意义（P〈0．01）。其他各层之间3组分别对比差异均无统计学意义。电镜结果显示：弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层可见部分神经元胞质轻度水肿，线粒体嵴和膜融合或消失，排列紊乱，粗面内质网脱颗粒显像明显，核膜皱缩。正常对照组大脑视皮质17区Ⅳ层和弱视眼同侧大脑视皮质17区Ⅳ层神经元胞核正常，核膜完整，线粒体嵴规则，高尔基体发达，粗面内质网发达。结论单眼形觉剥夺弱视大脑视皮质17区Ⅳ层mGluR，的表达与正常相比减少。弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层部分神经元发生形态改变，可能与视觉神经冲动传入减少致神经元萎缩所致。形觉剥夺致神经冲动传入减少，视皮质17区Ⅳ层mGluR，表达减少，突触可塑性变化，致神经元发生萎缩可能是弱视发病机制之一。（中华眼科杂志，2008，44：67—71）

药物阻断mGlu3受体通路对脑胶质瘤干细胞增殖与分化的影响

目的探讨应用亲代谢性谷氨酸受体亚型3(mGlu3)特异性拮抗剂LY341495阻断受体通路后对脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)生物学特性的作用及相关机制。方法将培养人脑胶质瘤干细胞以及裸鼠移植瘤动物模型分为对照组、激动剂组,拮抗剂组,采用CCK-8法测定细胞增殖率,流式细胞术观察细胞周期变化,免疫组织化学染色激光共聚焦显微镜观察细胞CD133表达情况,RT-PCR和Western blot分别检测β-catenin、c-myc等mRNA和蛋白表达,观察裸鼠移植瘤生长变化。结果与对照组比较,拮抗剂组GSCs增殖率和进入S期的比例均显著降低(P<0.05),且呈时间依赖性;在分化培养基条件下,拮抗剂组GSCs向星形胶质细胞分化明显,Nestin阳性细胞减少而GFAP阳性细胞增多(P<0.05);mGlu3拮抗剂干预后,诱导β-catenin、c-myc等mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05);与对照组比较,拮抗剂组裸鼠移植瘤生长速度及肿瘤体积明显降低(P<0.05)。结论药物阻断mGlu3受体通路可显著抑制体外培养的GSCs以及裸鼠体内移植瘤的生长,并促使GSCs由去分化状态转向分化状态,此过程可能经由Wnt/β-catenin通路发挥作用。

腺苷A2A受体拮抗剂对左旋多巴诱发异动症大鼠行为、纹状体A2A受体和代谢型谷氨酸受体5亚型蛋白表达的影响

目的 评价腺苷A2A受体拮抗剂（CSC）对左旋多巴（L-DOPA）诱发异动症大鼠行为、纹状体A2A受体和代谢型谷氨酸受体5亚型（mGluR5）蛋白表达的影响.方法 6-羟多巴胺（6-OHDA）立体定向损毁大鼠右内侧前脑束,建立单侧损毁帕金森病（PD）大鼠模型.采用随机数字表法将40只成功PD大鼠随机分为4组（每组10只）：生理盐水组;L-DOPA 25 mg/kg＋苄丝肼6.25 mg/kg组;CSC 2.5 mg/kg组;L-DOPA 25 mg/kg＋苄丝肼6.25 mg/kg联合CSC 2.5 mg/kg组.给予大鼠每日2次腹腔注射,持续21 d.在治疗第2、9、11、18、21天观察大鼠行为学变化,Western blot检测纹状体区腺苷A2A受体和mGluR5的蛋白表达水平.结果 L-DOPA联合CSC组PD大鼠损毁对侧前肢跨步数显著增加,与治疗前比较差异有统计学意义,与L-DOPA组相比,前肢功能改善程度不随时间延长而减弱.单独CSC组治疗后对侧前肢跨步数明显增加,与治疗前比较差异有统计学意义,有疗效逐渐增加至稳定趋势.L-DOPA联合CSC组[（11±5）分]部分口颌及肢体异常不自主运动评分较L-DOPA组[（17±4）分]显著减少,差异有统计学意义（t=2.44,P＜0.05）.L-DOPA联合CSC治疗逆转了L-DOPA诱导的对侧旋转反应时间缩短和腺苷A2A受体、mGluR5蛋白表达的上调,差异均有统计学意义.结论 腺苷A2A受体与mGluR5均参与了L-DOPA诱发的异动症的发生发展,A2A受体拮抗剂能够改善PD运动症状,增强L-DOPA的抗PD效应且部分减轻异常不自主运动,对L-DOPA诱发的异动症的治疗有着较好的应用前景.

激动mGluR8可缓解母婴分离模型大鼠的内脏高敏感

背景:激动亲代谢型谷氨酸受体8(mGluR8)在中枢神经系统中有抗痛觉过敏的作用,但在胃肠道的研究甚少。内脏高敏感为肠易激综合征(IBS)的病因之一。目的:探讨mGluR8对母婴分离(NMS)模型大鼠内脏高敏感的影响及其可能的机制。方法:24只SD雄性新生大鼠随机分为正常对照(NC)组、NMS组和mGluR8特异性激动剂(S)-3,4-DCPG组(3、10 mg/kg)。新生大鼠出生后第2~14 d每天与母鼠分离3 h构建NMS模型,(S)-3,4-DCPG组中NMS大鼠检测内脏敏感性1 h前腹腔注射(S)-3,4-DCPG(3、10 mg/kg)。应用腹壁回撤反射(AWR)评分和腹壁肌电图(EMG)活动评估大鼠内脏敏感性,分别应用RT-PCR、蛋白质印迹法检测大鼠结肠组织中mGluR8 mRNA和蛋白表达,RT-PCR法检测大鼠结肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,免疫组化法检测大鼠结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)蛋白表达。结果:在不同结直肠扩张(CRD)压力下,NMS组大鼠AWR评分和腹壁EMG活动较NC组明显升高;给予(S)-3,4-DCPG后,AWR评分和腹壁EMG活动均明显降低。NMS组大鼠结肠中mGluR8 mRNA和蛋白表达均显著高于NC组(P<0.05)。与NMS组相比,3 mg/kg(S)-3,4-DCPG组TNF-αmRNA表达显著降低(P<0.05)。10 mg/kg(S)-3,4-DCPG组MPO蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:激动mGluR8可缓解NMS模型大鼠内脏高敏感,其机制可能与降低促炎因子TNF-α的表达有一定相关性。