亲吻素在青藏高原牦牛睾丸组织中的表达及定位研究

亲吻素(Kisspeptin)通过下丘脑-垂体-性腺轴对动物繁殖起重要的调控作用.为了探讨亲吻素在牦牛精子发生中的生理功能及其对高原环境的适应机制,文中对比研究了牦牛和黄牛睾丸的组织学特征及其亲吻素的表达情况.结果表明,与黄牛相比,牦牛的曲细精管不饱满,除精原细胞外,牦牛初级精母细胞、次级精母细胞、早期/晚期精子细胞以及精子的数量都显著少于黄牛(P<0.01).免疫组织化学结果显示,在牦牛的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、早期精细胞及基质细胞中都可见Kisspeptin免疫阳性产物的表达,这与黄牛表达位置一致,但是牦牛睾丸中阳性产物光密度值(IOD)却显著高于黄牛;牦牛睾丸组织中Kisspeptin蛋白的表达显著高于黄牛(P<0.01).该结果暗示Kisspeptin可能作为负调控因子,参与维持牦牛精子发生和精子成熟过程中的正常组织结构及其微环境生理状态.

亲吻素-1基因对雄性哺乳动物生殖调控的研究进展

亲吻素-1(Kiss-1)基因参与哺乳动物性腺轴的调节,同时也参与其他生殖功能的调控,作者综述了Kiss-1基因在雄性哺乳动物生殖系统的研究进展,并对该领域今后的研究方向进行了分析。

电子垃圾污染区双酚A暴露水平评估以及双酚A暴露对亲吻素基因KiSS-1表达水平的影响

目的:探讨双酚A(BPA)暴露水平以及BPA产生生殖毒性的潜在机制。方法:采用气相色谱质谱联用法检测新生儿(贵屿区153例为暴露组,濠江区47例为对照组)脐带血BPA浓度;实时定量RT-PCR法检测新生儿胎盘组织KiSS-1基因表达量。结果:暴露组脐带血BPA浓度(中位数6.4μg/L)显著高于对照组(2.8μg/L),暴露组胎盘组织KiSS-1基因相对表达量(中位数0.5)同样显著高于对照组(0.2),BPA浓度与KiSS-1表达量正相关(P<0.05);男性组该相关性更为显著(P<0.01)。结论:贵屿区人群已处于较高的BPA暴露水平,BPA有可能通过影响亲吻素的正常表达而干扰生殖内分泌系统。

血清微小核糖核酸-34a、亲吻素-1水平与胰腺癌患者化疗耐药性的相关性

目的分析血清微小核糖核酸(miR)-34a、亲吻素-1(KISS-1)水平与胰腺癌患者化疗耐药性的关系。方法前瞻选择2018年3月至2019年3月信阳市中心医院95例胰腺癌化疗患者,化疗前测定血清miR-34a、KISS-1水平,全部患者均接受化疗,连续化疗4个周期后,随访1个月,统计化疗疗效并据此评估化疗耐药性分为耐药和敏感组,统计两组基线资料及血清miR-34a、KISS-1水平,分析化疗前血清miR-34a、KISS-1水平与胰腺癌患者化疗耐药性的关系。结果化疗4个周期,95例胰腺癌患者中耐药患者有70例,占73.68%,其中疾病稳定(SD)患者38例,疾病进展(PD)患者32例;耐药组血清miR-34a、KISS-1水平低于敏感组(P<0.05);经Logistic回归分析,血清miR-34a、KISS-1水平与胰腺癌患者化疗耐药有关,二者高表达可能是胰腺癌患者化疗耐药的保护因素(O^R<1,P<0.05);绘制ROC曲线图,结果显示,化疗前血清miR-34a、KISS-1水平单独及联合预测胰腺癌患者化疗耐药的曲线下面积分别为0.753、0.770、0.775,均有一定预测价值。结论血清miR-34a、KISS-1低表达与胰腺癌患者化疗耐药有关,可用于胰腺癌患者化疗耐药的预测。

妊娠期糖尿病患者血清Kisspeptin表达水平及其影响因素研究

目的评估妊娠期糖尿病(GDM)患者血清Kisspeptin表达水平及其影响因素。方法选取2016年4—7月在安徽医科大学第一附属医院内分泌实验室行75 g葡萄糖耐量试验(OGTT)的孕妇120例,根据75 g OGTT结果将其分为GDM组(61例)和正常糖耐量(NGT)组(59例);根据体质指数(BMI)将GDM组和NGT组进行分组,BMI≤24 kg/m^2作为GDM-A亚组(31例)和NGT-A亚组(30例),BMI>24 kg/m^2作为GDM-B亚组(30例)和NGT-B亚组(29例)。收集受试者年龄、妊娠期体质量、体质量差等资料,测定空腹血糖(FBG)、1 h血糖(PG)、2 hPG、空腹胰岛素(FINS)、1 h胰岛素(INS)、2 hINS、空腹C肽、1 h C肽、2 h C肽及血清Kisspeptin水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)。结果 GDM组FBG、1 hPG、2 hPG、FINS、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR均高于NGT组,HOMA-β低于NGT组(P<0.05)。NGT-A亚组FINS、1 hINS、2 hINS、空腹C肽、HOMA-IR、HOMA-β均低于NGT-B亚组(P<0.05)。GDM-A亚组的HOMA-IR低于GDM-B亚组(P<0.05)。GDM组血清Kisspeptin水平高于NGT组(P<0.01)。GDM-A亚组血清Kisspeptin水平高于NGT-A亚组(P<0.05)。GDM-B亚组血清Kisspeptin水平高于NGT-B亚组(P<0.05)。所有受试者血清Kisspeptin水平与FBG、1 hPG、2 hPG、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR呈正相关,与HOMA-β呈负相关(P<0.05)。NGT组血清Kisspeptin水平与FBG、2 hPG呈正相关(P<0.05)。结论 GDM组血清Kisspeptin水平较NGT组明显升高;Kisspeptin水平与FBG、1 hPG、2 hPG、2 hINS、空腹C肽、2 h C肽、HOMA-IR呈正相关,与HOMA-β呈负相关。

二甲地黄汤合达英-35治疗肾虚肝郁型PCOS的临床疗效

目的观察二甲地黄汤联合达英-35对肾虚肝郁型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵泡发育、子宫内膜厚度及促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)和促卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、亲吻素(kisspeptin,Kp)的影响。方法选取2020年4月至2022年4月丽水市中医院收治的肾虚肝郁型PCOS患者60例,采用随机数字表法分为分为观察组和对照组,每组30例。对照组给予达英-35口服治疗,观察组在对照组的基础上加服二甲地黄汤,观察两组患者治疗前后血清FSH、LH、T、Kp水平,并于治疗前后采用B超监测优势卵泡直径、排卵及子宫内膜厚度。结果两组患者治疗后中医症状积分、LH、T、Kp均显著降低(P<0.05),成熟卵泡直径显著增大(P<0.01),子宫内膜显著增厚(P<0.05);与对照组比较,观察组中医症状积分、血清LH水平下降均更加明显(P<0.05),而成熟卵泡增大及子宫内膜增厚更加明显(P<0.05),且排卵率显著优于对照组(P<0.05)。结论二甲地黄汤联合达英-35可降低肾虚肝郁型PCOS患者血清LH、T、Kp水平,最终改善肾虚肝郁型PCOS患者生殖激素水平、卵泡发育、排卵以及子宫内膜厚度。

高尿酸血症对雌性大鼠生殖功能的影响

目的探讨高尿酸血症(HUA)对雌性大鼠生殖功能的影响。方法利用腺嘌呤、高酵母饲料和氧嗪酸钾(尿酸酶抑制剂)进行9个周的HUA模型建立。通过阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期;留取完整子宫、卵巢称质量,计算器官系数;采用苏木精-伊红(HE)染色观察卵巢的病理变化;采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测卵巢组织中吻素1(KISS1)和吻素1受体(KISS1R)mRNA表达。结果HUA雌性大鼠模型构建成功。与正常大鼠相比,HUA雌性大鼠动情间期明显缩短(F=14.000,P<0.01),卵巢系数显著下降(t=2.377,P<0.05),卵巢组织中KISS1和KISS1R mRNA表达显著增高(t=3.456、5.408,P<0.05)。结论HUA可造成雌性大鼠KISS1系统紊乱,引起动情间期缩短和卵巢系数降低。

非小细胞肺癌组织中KISS-1和CBX8的表达及相关性研究

目的研究肿瘤转移抑制基因亲吻素1(KISS-1)和色素框同源蛋白8(CBX8)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与NSCLC临床特征的关系,以及二者之间的相关性。方法选取海口市人民医院(中南大学湘雅医学院附属海口医院)胸部外科2018~2020年间行肺部手术切除的存档病理标本蜡块108例,其中NSCLC组织84例,良性肺组织24例。运用免疫组织化学(IHC)方法检查NSCLC组织、良性肺组织中KISS-1和CBX8的表达,分析其与肿瘤的临床病理特征之间的关系,并研究两者之间有无相关性。结果KISS-1在良性肺组织中的阳性率明显高于NSCLC组织,有淋巴结转移患者NSCLC组织中的阳性率明显低于无淋巴结转移者,临床Ⅰ~Ⅱ期患者NSCLC组织中的阳性率明显高于临床Ⅲ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。CBX8在NSCLC组织中的阳性率明显高于良性肺组织,有淋巴结转移患者NSCLC组织中的阳性率明显低于无淋巴结转移者,临床Ⅰ~Ⅱ期患者NSCLC组织中的阳性率明显高于临床Ⅲ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。KISS-1与CBX8表达呈负相关(r=-0.341,P<0.05)。结论KISS-1和CBX8与NSCLC的发生、进展密切相关,二者在NSCLC中的表达呈负相关。

非小细胞肺癌中KiSS-1、MMP-2和MVD的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因亲吻素-1(Kisspeptin 1,KiSS-1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和微血管密度(microvessel density,MVD)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测KiSS-1、MMP-2、MVD在NSCLC组织中的表达;应用ELISA法检测MMP-2在血清中的表达;并探讨三者与患者术后5年生存期的关系。结果97例NSCLC组织中KiSS-1在Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移组中的表达与Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移组相比,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2在肿瘤直径>3 cm、腺癌组、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移组中的表达与肿瘤直径≤3 cm、鳞癌组、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移组相比,差异有统计学意义(P<0.05);MVD在Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移组中的表达分别高于Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移组(P<0.05)。NSCLC患者5年生存期与KiSS-1的高表达、MMP-2低表达和MVD低表达呈正相关(P<0.05)。结论KiSS-1、MMP-2和CD34在NSCLC的发生、浸润和转移过程中发挥重要作用,三者可作为肿瘤恶性程度的评判指标。

Kisspeptin调控鱼类生殖内分泌的研究进展

Kisspeptin是近10年新发现的调控动物生殖内分泌的关键因子,是kiss基因所编码的多肽产物,属神经内分泌肽类激素,为G蛋白偶联受体54(GPR54)的内源性配体。Kisspeptin具多个功能性的分子结构形态,在鱼类中,主要结构形式为Kisspeptin-10肽。Kisspeptin/GPR54系统在生殖中具重要功能。该文综合现有研究资料,就Kisspeptin在鱼类生殖内分泌调控中的概况、Kisspeptin神经元在鱼脑中的分布和定位、鱼类Kisspeptin分子的多态性、Kisspeptin调控鱼生殖内分泌的功能多样性、Kisspeptin调控鱼类生殖内分泌的机制、Kisspeptin的分子进化以及Kisspeptin和其他功能分子对鱼类生殖内分泌的协同调控进行了初步阐述,同时对Kisspeptin在鱼类生殖内分泌调控中的研究进行了展望。

益肾安胎方治疗黄体功能不全性先兆流产30例疗效观察

笔者自拟益肾安胎方治疗肾虚型黄体功能不全（LPD）先兆流产患者30例，通过观察症状的改善及血清孕激素（P）、β-绒毛膜激素激素（β—hCG）、亲吻素（kis—speptin）水平的变化以了解其疗效。报道如下。

Kiss-1、Kiss-1R蛋白在胃腺癌中的表达及临床意义

目的探讨亲吻素(kisspeptin 1,Kiss-1)、亲吻素受体(kisspeptin 1receptor,Kiss-1R)2种蛋白在胃腺癌浸润、转移过程中的作用及其临床意义。方法收集胃腺癌组织40例,癌旁胃正常黏膜组织28例,采用免疫组织化学SP方法检测Kiss-1、Kiss-1R2种蛋白在2组中的表达情况,分析其与临床病理特征之间的关系。结果Kiss-1及Kiss-1R蛋白在胃腺癌组织的阳性表达率均显著低于癌旁胃正常黏膜组织(P<0.01);低分化、有淋巴结转移、TNMⅢ+Ⅳ期胃腺癌组织Kiss-1蛋白阳性表达率低于中高分化、无淋巴结转移、Ⅰ+Ⅱ期胃腺癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、肿瘤大小和肿瘤浸润深度胃腺癌组织Kiss-1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。不同性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期胃腺癌组织中Kiss-1R蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。Kiss-1与Kiss-1R蛋白在胃腺癌组织中表达呈正相关(P<0.05)。结论 Kiss-1在胃腺癌进展过程中发挥抑制肿瘤转移的作用,其有潜力成为判断胃腺癌转移和预后的生物学指标;Kiss-1/Kiss-1R信号通路有望成为胃腺癌治疗的有效干预靶点。

Kisspeptin与妊娠及其相关疾病关系的研究进展

Kisspeptin是由kiss-1基因编码的一种神经肽,早期被认为具有抑制肿瘤转移、调控生殖内分泌等作用。Kisspeptin及其受体广泛分布于脑、垂体、卵巢、子宫和胎盘等多种组织,在子宫内膜中的表达呈周期性变化,分泌晚期的子宫内膜间质细胞中kisspeptin的表达显著升高,在妊娠早期胎盘和母体血浆中kisspeptin的浓度也急剧增加。近年研究表明,kisspeptin在蜕膜化、胎盘形成和胚胎植入等妊娠生理过程中起重要的调控作用,并可参与妊娠期葡萄糖稳态的维持,kisspeptin水平的变化与复发性流产、子痫前期、妊娠期糖尿病等妊娠相关疾病有关。综述kisspeptin在生理妊娠过程中的作用机制及其与妊娠相关疾病关系的研究进展。

沉默Ttf1对神经元细胞及雌性大鼠弓状核内Kiss1和Gn RH基因表达的影响

目的·探讨抑制神经元细胞和雌性大鼠下丘脑弓状核中甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,Ttf1)基因的表达对亲吻素(Kiss1)和促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)基因表达的影响。方法·针对大鼠Ttf1基因的mRNA序列分别设计3对特异性的干扰序列(TTF1-shRNA1、TTF1-shRNA2、TTF1-shRNA3),包装成慢病毒质粒。以神经元细胞ND7-23为体外模型,采用real-time PCR及Western blotting技术筛选干扰效率最高的慢病毒质粒(LV-TTF1-shRNA),转染72 h后检测Kiss1和GnRH基因的表达。将LV-TTF1-shRNA和空载质粒注射到21日龄雌性大鼠的下丘脑弓状核内,分别在幼年期(25日龄)、青春发育早期(35日龄)、成年期(42日龄)检测弓状核内Kiss1和GnRH基因的表达变化并观察雌鼠的阴门开放时间。结果·慢病毒质粒转染ND7-23细胞72 h后,LV-TTF1-shRNA2组、LV-TTF1-shRNA3组的Ttf1 mRNA及蛋白表达均显著减少(均P<0.05),其中LV-TTF1-shRNA3干扰效果最佳。采用LV-TTF1-shRNA3抑制ND7-23细胞中Ttf1表达后,Kiss1和GnRH基因的mRNA表达均显著降低(均P<0.05)。雌鼠弓状核内双侧显微注射LV-TTF1-shRNA3后,25日龄、35日龄、42日龄大鼠弓状核Kiss1和GnRH的mRNA均显著降低(均P<0.05),35日龄和42日龄时KISS1蛋白水平明显降低,且雌鼠阴门开放时间延迟。结论·在细胞水平和雌性大鼠弓状核内抑制Ttf1基因表达均使得Kiss1和GnRH基因表达显著下调,也导致雌鼠阴门开放时间明显延迟。

KiSS-1基因在黄牛精子发生中的表达

为探讨亲吻素在黄牛精子发生中的生理功能,并为家畜生殖生理学研究提供参考,运用免疫组织化学SABC染色法并采用Image Pro-Plus 6.0软件,对成年黄牛睾丸中KiSS-1的表达及分布特征进行了研究。结果显示,在成年黄牛睾丸的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、早期精子细胞及间质细胞中均发现KiSS-1阳性反应产物,其各阳性细胞积分光密度(IOD)值的大小顺序为IOD初级精母细胞>IOD间质细胞>IOD次级精母细胞>IOD精原细胞>IOD早期精子细胞,而阳性产物在晚期精子细胞、精子和支持细胞及睾丸间质血管上未被发现;在部分间质细胞周围可见大量的KiSS-1免疫阳性反应产物,而在其他阳性细胞周围未见此现象。结果证实,KiSS-1基因在黄牛精子发生中发挥着重要作用,尤其在精原细胞的有丝分裂和精母细胞的减数分裂中可能发挥着非常重要的作用,而且间质细胞具有向睾丸微环境中分泌KiSS-1的功能。

KiSS-1/GPR54系统的生殖内分泌功能研究进展

亲吻素(kisspeptins)是由KiSS-1基因编码的一组多肽激素,与其受体GPR54一起组成KiSS-1/GPR54系统,参与下丘脑-垂体-性腺轴功能的调节,并在青春期启动和促性腺素释放过程中发挥非常重要的作用。在人和许多动物中研究显示:KiSS-1基因在下丘脑的特定部位表达,并受到性激素的调节。由此人们推测,性激素,特别是雌激素,可能是通过KiSS-1/GPR54系统将其反馈信号传递到GnRH神经元,导致排卵前GnRH/LH峰的形成。本文主要对KiSS-1基因及其编码蛋白的分子结构,KiSS-1/GPR54系统的信号转导途径及其对性腺轴功能的调节机制进行介绍,以期为从事生殖基础医学研究的科研人员提供有益的参考。

知柏地黄丸加减治疗特发性性早熟的疗效观察

目的:评价知柏地黄丸加减治疗特发性性早熟(ICPP)女性患儿的临床疗效及探讨其可能的作用机制。方法:收集河南省儿童医院自2019年7月至2020年7月收治的ICPP女性患儿共78例,按随机信封法分为观察组和对照组,各39例。观察组给予知柏地黄丸加减治疗(1剂/d,分2次口服),对照组给予知柏地黄汤治疗(1剂/d,分2次口服),治疗周期3月。观察两组治疗前后乳核长径、最大卵泡直径、子宫、卵巢容积的变化情况及检测两组血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)、雌激素(E_(2))水平;在细胞水平上,检测知柏地黄丸加减与传统知柏地黄汤2种不同方药处理后下丘脑GT1-7细胞促性腺激素释放激素(GnRH)的分泌量及性早熟相关基因亲吻素-1(Kiss-1)、G蛋白偶联受体54(GPR54)mRNA的表达水平。结果:与本组治疗前比较,两组患儿治疗后血清性激素水平均显著下降(P<0.01);治疗后,与对照组比较,观察组患儿乳核长径、最大卵泡直径明显缩小(P<0.01);观察组临床有效率优于对照组(P<0.01);细胞水平上,与传统知柏地黄汤组比较,知柏地黄丸加减组GT1-7细胞GnRH、Kiss-1、GPR54 mRNA表达水平明显降低。结论:知柏地黄丸加减能有效抑制ICPP患儿血清性激素水平,延缓性早熟患儿乳核及卵巢发育,较传统知柏地黄汤效果更明显,值得临床推广;抑制Kiss-1和GPR54 mRNA的表达水平可能是其治疗性早熟的作用机制之一。