β2M-绿色荧光蛋白在MHC-Ⅰ肽亲和力实验中的应用

目的构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法。方法构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与T2细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位。结果构建了β2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定。结论β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定。

血清多项肿瘤标记物联合检测对非小细胞肺癌的诊断价值

目的 探讨血清多项肿瘤标记物联合检测诊断肺癌的临床价值。方法 对 75例非小细胞肺癌 (NSCLC)采用ELISA法、同位素法和电化学发光法分别测量血管内皮生长因子 (VEGF)、细胞角质蛋白 19片段 (CYFRA2 1 1)、α1微球蛋白(α1MG)、癌胚抗原 (CEA)和糖类抗原 (CA12 5)。结果 VEGF、CYFRA2 1 1、α1MG阳性率显著高于CEA和CA12 5(P <0 .0 1)。腺癌CEA阳性率显著高于鳞癌 (P <0 .0 5 ) ,另 4项标记物在腺癌与鳞癌间阳性率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。VEGF、CYFRA2 1 1、CA12 5阳性率肺癌Ⅲ、Ⅳ期显著高于Ⅰ、Ⅱ期 (P <0 .0 1、P <0 .0 5 ) ,α1MG和CEA阳性率差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。 1～ 5项标记物联合检测的阳性率分别为 10 0 %、93.3%、 6 4 .0 %、 30 .7%和 9.3%。结论 VEGF、CYFRA2 1 1和CA12 5可作为NSCLC是否转移和预后是否良好的预测指标 ,α1MG和CEA不能预测肺癌的转移和预后 ,对肺癌的诊断具有一定的参考价值。

超顺磁性氧化铁作为细胞标记试剂的可行性研究

目的:评价目前临床使用的磁共振对比增强剂超顺磁性氧化铁颗粒(SPIO)进行骨髓间充质干细胞(MSCs)标记的安全性、有效性。方法:从中华小型猪髂骨处抽取骨髓,体外培养扩增MSCs。将SPIO和MSCs共同孵育培养36h。普鲁士蓝染色评价细胞的标记效率;通过MTT比色实验评价SPIO对细胞生长能力的影响;台盼蓝染色检测标记后细胞的活性;使用Costar Transwell方法评价铁离子对细胞迁移能力的影响;用细胞分化诱导液培养标记后的细胞评价其向成脂肪细胞和成骨细胞的分化能力。结果:①MSCs经SPIO标记后普鲁士蓝染色阳性率在95%以上,电镜切片观察可见高密度铁颗粒位于细胞浆内。②MSCs经SPIO标记后,MTT比色实验发现随着培养液中SPIO浓度的增加细胞增殖能力没有明显改变;台盼蓝染色显示98%的细胞保持活性;仍可保持原有的细胞形态,可继续培养、传代;细胞迁移试验发现MSCs对SDF-1和VEGF诱导的迁移能力没有明显的减弱;细胞仍可向成脂肪细胞和成骨细胞分化。结论:SPIO可以安全、有效地标记MSCs。

血清NGAL浓度对急性失代偿性心衰患者合并肾功能恶化的预测价值

目的:探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)浓度对急性失代偿性心衰(ADHF)患者合并肾功能恶化(WRF)的预测价值。方法:ADHF患者81例,根据是否发生WRF,分为WRF组和非WRF组。所有患者分别在入院时测定左心室射血分数、血肌酐浓度、血尿素氮浓度和肾小球滤过率(GFR)。入院时和入院第3日测定血清NGAL的浓度。结果:在为期5d的随访中,有30例患者发生了WRF。入院时和入院后3dWRF组血清NGAL浓度均显著高于非WRF组(P<0.05)。NGAL浓度与WRF的发生呈相关性联系。而入院时的血肌酐水平与WRF之间不具相关性联系。根据ROC曲线分析,收治时血清NGAL浓度≥140ng/ml时,对WRF发生预测的敏感性和特异性,分别为86%和54%。结论:在因ADHF而收治的患者中,血清NGAL水平升高可以预测后续的WRF发生的危险因素及肾小管损伤的存在,并呈相关性联系。