木瓜蛋白酶在PEG/PEG-IDA-Fe^(3+)/(NH_4)_2SO_4亲和双水相中的分配系数模型

为预测木瓜蛋白酶在PEG/PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相中的分配行为,在298.15K条件下利用浊点法测定并比较了PEG/(NH4)2SO4和PEG/PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4的三角相图,建立了木瓜蛋白酶在无亲和配基双水相和含亲和配基双水相中分配模型。考察双水相各组分浓度与木瓜蛋白酶在该体系中分配系数的相关度,基于酶分配系数与双水相中上下相组分浓度差之间较高相关度,提出了木瓜蛋白酶在PEG/(NH4)2SO4双水相中分配系数与上下相组分浓度差的关联模型,模型相对偏差为7.02%。引入亲和配基浓度对酶分配系数的影响因子η,提出了木瓜蛋白酶在PEG/PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相中分配系数模型,试验验证,预测值和试验值之间相对误差均在15%以内,能实现亲和双水相中酶的准确预测。研究结果为木瓜蛋白酶在双水相中分配系数的工程计算提供参考。

木瓜蛋白酶在亲和双水相系统中的分配行为及机制研究进展

本文查阅相关文献,对木瓜蛋白酶传统提取方法(超滤法、盐析法、有机溶剂法、亲和层析法)及一些新兴的提取方法如双水相萃取法、亲和双水相法作了简要综述。利用金属螯合亲和双水相分配系统,能有效获得高纯度木瓜蛋白酶,但木瓜蛋白酶与亲和成相剂的相互作用及其分配行为与机制尚不清楚。研究木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的相互作用和吸附动力学模型;对酶的亲和结合物进行物理表征和分子模拟。阐明木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的亲和作用原理。将双水相萃取技术和亲和分配技术相融合,提出基于木瓜蛋白酶的金属螯合亲和双水相分配技术,该技术有望大力推动木瓜蛋白酶工业化高效制备的发展。

天花粉蛋白的盐析工艺和亲和双水相分离工艺

近年,随着天花粉蛋白(TCS)在抗癌细胞和HIV病毒方面的临床性研究进展,天花粉蛋白生产工艺也需在保证效益的前提下精细化。本实验利用硫酸铵分级沉淀、硫酸铵粗提后亲和双水相进一步纯化,得到精制的天花粉蛋白。并对提取工艺进行了优化,最后利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对其纯度进行了鉴定以及相对分子质量的测定,并对比了盐析法和亲和双水相分离法,研究结果表明:硫酸铵沉淀法最佳分离条件为固液比为1∶12、浸泡时间为24h、pH在5左右,最终得率0.8mg/g;亲和萃取最佳条件:染料CibacronBlue F3GA-吐温80在成相吐温80中的含量8%,成相吐温80的占双水相含量为4.0%,(NH4)2SO4的含量2.0mol/L,充分混合的时间9h,反萃取氯化钠的含量为0.5mol/L,反萃取的时间为8h,得率0.6mg/g,但凝胶电泳显示其纯度较高。

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe^(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。

双水相亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶

采用双水相金属螯合亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶,考察了豆壳过氧化物酶在不同类型双水相系统中金属螯合亲和配基聚乙二醇(PEG)-亚氨基二乙酸(IDA)-Cu(Ⅱ)对亲和分配的影响,发现PEG/羟丙基淀粉(PES)系统适合于金属螯合亲和分配豆壳过氧化物酶。进一步考察亲和配基加入量、成相聚合物分子量、系统组成、pH等因素对PEG/PES系统亲和分配的影响,优化分离条件为:PEG20009%,PES20014%,PEG-IDA-Cu(Ⅱ)1%,豆壳过氧化物酶的分配系数达40,纯化因子为2.8,回收率达到93%。

一种双水相亲和分配配基的制备过程优化——亚氨基二乙酸-聚乙二醇

考察了不同亚氨基二乙酸(IDA)取代度的亚氨基二乙酸-聚乙二醇(IDA-PEG)的制备,并进行了条件优化(BF3浓度,NaOH浓度,反应时间,IDA结合条件等)。通过控制环氧氯丙烷与聚乙二醇的摩尔配比,得到了不同Cu( )含量的固定化金属亲和配基:Cu( )-IDA-PEG(A)(0.24molCu2+/molPEG)、Cu( )-IDA-PEG(B)(0.51molCu2+/molPEG)、Cu( )-IDA-PEG(C)(0.75molCu2+/molPEG),并初步探讨了固定化金属亲和配基的添加对PEG4000-(NH4)2SO4-H2O双水相系统相图的影响。

辛巴蓝F3GA-羟丙基淀粉的制备及其对蛋白质的亲和分离特性

为了开发新型的淀粉基生物分离材料,制备了适用于亲和双水相萃取技术的辛巴蓝F3GA-羟丙基淀粉,并考察了其对蛋白的亲和分离特性。将三嗪类染料辛巴蓝F3GA分别偶联于不同取代度的羟丙基淀粉上,对其反应时间、温度以及pH进行考察,根据亲和配基密度,得到制备亲和分离材料的优化工艺条件为:反应温度60℃,反应时间6 h,pH 9.5。进一步考察了亲水性基团、亲和配基对羟丙基淀粉亲和材料/聚乙二醇双水相体系液液平衡的影响,表明,亲和配基的引入对系统的相平衡影响很小,系统结线都基本重合,斜率变化很小;随着羟丙基淀粉取代度的增大,双水相呈相区域向右移。牛血清白蛋白被分配到羟丙基淀粉亲和材料相中,当亲和配基密度达到1.25μmol/g时,分配效率从30%提高到80%以上。

番木瓜蛋白酶研究与应用综述

木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶,广泛存在于番木瓜的茎叶和果实中。本文主要对木瓜蛋白酶的组成及结构、特性、制备以及在食品、医药、工业中的用途进行了综述。由于木瓜蛋白酶的产率、活性及应用性与其分离方法相关,提出今后需深入进行木瓜蛋白酶的亲和双水相萃取等新型分离方法的研究。

木瓜蛋白酶的分离方法及其应用进展

对亲和层析法、超滤膜分离法、沉淀分离法、溶剂萃取法、双水相萃取法等分离提取木瓜蛋白酶的方法进行了评述;综述了木瓜蛋白酶在食品、化工、纺织、医药等行业的应用进展。木瓜蛋白酶的产率、活性及应用性与其分离方法相关,指出今后需深入进行木瓜蛋白酶的亲和双水相萃取等新型分离方法的研究。