木瓜蛋白酶在亲和双水相系统中的分配行为及机制研究进展

本文查阅相关文献,对木瓜蛋白酶传统提取方法(超滤法、盐析法、有机溶剂法、亲和层析法)及一些新兴的提取方法如双水相萃取法、亲和双水相法作了简要综述。利用金属螯合亲和双水相分配系统,能有效获得高纯度木瓜蛋白酶,但木瓜蛋白酶与亲和成相剂的相互作用及其分配行为与机制尚不清楚。研究木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的相互作用和吸附动力学模型;对酶的亲和结合物进行物理表征和分子模拟。阐明木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的亲和作用原理。将双水相萃取技术和亲和分配技术相融合,提出基于木瓜蛋白酶的金属螯合亲和双水相分配技术,该技术有望大力推动木瓜蛋白酶工业化高效制备的发展。

辛巴蓝F3GA-羟丙基淀粉的制备及其对蛋白质的亲和分离特性

为了开发新型的淀粉基生物分离材料,制备了适用于亲和双水相萃取技术的辛巴蓝F3GA-羟丙基淀粉,并考察了其对蛋白的亲和分离特性。将三嗪类染料辛巴蓝F3GA分别偶联于不同取代度的羟丙基淀粉上,对其反应时间、温度以及pH进行考察,根据亲和配基密度,得到制备亲和分离材料的优化工艺条件为:反应温度60℃,反应时间6 h,pH 9.5。进一步考察了亲水性基团、亲和配基对羟丙基淀粉亲和材料/聚乙二醇双水相体系液液平衡的影响,表明,亲和配基的引入对系统的相平衡影响很小,系统结线都基本重合,斜率变化很小;随着羟丙基淀粉取代度的增大,双水相呈相区域向右移。牛血清白蛋白被分配到羟丙基淀粉亲和材料相中,当亲和配基密度达到1.25μmol/g时,分配效率从30%提高到80%以上。