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家蚕丝素蛋白亲和多肽的筛选及验证
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作者 郑胜男 雷芳 +2 位作者 张青 毛传斌 杨明英 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期415-420,共6页
家蚕丝素蛋白因其良好的生物相容性被广泛以修饰或基底材料的形式用于生物医用复合材料或器件,但与其他材料的结合性和相容性有待提高。通过噬菌体多肽库淘选技术筛选出家蚕丝素蛋白亲和肽有望解决这个问题。用噬菌体随机多肽库对家蚕... 家蚕丝素蛋白因其良好的生物相容性被广泛以修饰或基底材料的形式用于生物医用复合材料或器件,但与其他材料的结合性和相容性有待提高。通过噬菌体多肽库淘选技术筛选出家蚕丝素蛋白亲和肽有望解决这个问题。用噬菌体随机多肽库对家蚕丝素蛋白进行亲和筛选,获得多个家蚕丝素蛋白亲和多肽,其中亲和性最好的多肽序列为HVAWSWSWNNST,其出现的频率为42%。通过生物信息学软件RELIC/info验证了筛选过程的有效性。HVAWSWSWNNST多肽组在噬菌体捕获实验中的噬菌体回收数量最多且在噬菌体-酶联免疫吸附实验中具有最高的吸光度值,证明该多肽与丝素蛋白的结合力最强。该多肽的成功筛选,有望改善家蚕丝素蛋白与其他材料的结合性和相容性,并拓宽丝素蛋白在生物医学领域的应用。 展开更多
关键词 噬菌体多肽库筛选 家蚕丝素蛋白 亲和多肽 特异性结合
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胸苷酸合成酶mRNA亲和多肽的鉴定及其对翻译过程的抑制作用
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作者 阎松 牛荣丽 +1 位作者 王征 林秀坤 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2007年第4期410-415,共6页
胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是催化生物体内胸苷酸合成所必需的酶,多年来一直作为肿瘤化疗的靶点.研究表明,TS是一种RNA结合蛋白,可以与其自身mRNA的2个位点结合,使mRNA翻译受阻.本文以mRNA体外展示技术进行了由大容量多肽库... 胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)是催化生物体内胸苷酸合成所必需的酶,多年来一直作为肿瘤化疗的靶点.研究表明,TS是一种RNA结合蛋白,可以与其自身mRNA的2个位点结合,使mRNA翻译受阻.本文以mRNA体外展示技术进行了由大容量多肽库(>1013)中筛选胸苷酸合成酶mRNA亲和多肽的研究,对随机库进行了12轮循环的选择及扩增.结果表明,与初始库相比,经选择循环之后,碱性氨基酸及芳香族的苯丙氨酸含量明显增加,它们在TS RNA与蛋白质的相互作用中扮演着重要角色.按其理化特性对每一随机位点的氨基酸进行分类,并与初始库比较,发现位点1,12,17和18具有明显的带正电荷的特性,表明碱性侧链参与了与RNA的结合.二级结构预测表明,随着筛选的进行,与TS mRNA亲和的多肽显示出明显的螺旋倾向,而且形成螺旋的区域富含碱性氨基酸.凝胶迁移及体外翻译实验证实,选择循环之后的多肽能够与TS mRNA高度亲和,并能抑制TS mRNA的翻译.本研究表明mRNA体外展示方法得到的亲和多肽可以用作新的TS RNA的翻译抑制剂,并有可能成为一类新型的抗肿瘤药物. 展开更多
关键词 胸苷酸合成酶(thymidylate synthase TS) mRNA体外展示 筛选 亲和多肽
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多肽亲和配基的固相合成及其亲和作用 被引量:1
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作者 董晓燕 曹俊 俞海青 《天津大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期29-33,共5页
为了促使多肽亲和配基在实际分离研究中得到广泛应用,利用Fmoc固相合成法对从噬菌体展示肽库中筛选得到的与胰岛素具有高特异性亲和的七肽片段(HWWWPAS)进行了合成.在合成中发现,肽段序列中脯氨酸的存在会严重影响合成结果.去除脯氨酸... 为了促使多肽亲和配基在实际分离研究中得到广泛应用,利用Fmoc固相合成法对从噬菌体展示肽库中筛选得到的与胰岛素具有高特异性亲和的七肽片段(HWWWPAS)进行了合成.在合成中发现,肽段序列中脯氨酸的存在会严重影响合成结果.去除脯氨酸后,目标产物的收率从0%提高到11.6%;同时,七肽序列中丙氨酸的存在也会影响合成效果.若将丙氨酸除去,合成收率会明显提高(达到76%),特别是将丙氨酸更换为谷氨酸产物的收率和纯度均可达到70%以上.利用固定化六肽片段(HWWWES)进行亲和吸附实验的结果表明,改造后的六肽配基与原先的七肽配基具有相似的亲和吸附效果. 展开更多
关键词 多肽亲和配基 Fmoc固相合成 氨基酸序列 亲和吸附
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肽配基仿生亲和介质的制备和抗体纯化性能研究
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作者 史清洪 贾立霞 《天津大学学报(自然科学与工程技术版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1159-1165,共7页
寻找选择性高、稳定性强、价格低廉的蛋白A替代配基是抗体分离纯化领域的研究热点.针对L型氨基酸组成的线性多肽配基易被酶降解的问题,以D型非天然氨基酸为原料合成了配基D-FYWHCLDE,通过将游离的多肽配基与α-糜蛋白酶共同孵育研究了... 寻找选择性高、稳定性强、价格低廉的蛋白A替代配基是抗体分离纯化领域的研究热点.针对L型氨基酸组成的线性多肽配基易被酶降解的问题,以D型非天然氨基酸为原料合成了配基D-FYWHCLDE,通过将游离的多肽配基与α-糜蛋白酶共同孵育研究了多肽配基的酶稳定性.通过将多肽配基偶联到Sepharose 6FF基质上制备了用以分离纯化抗体的多肽亲和介质,以细胞培养上清液和人血清为实际分离体系,考察了仿生多肽亲和介质的分离效果,通过测定多次从人血清中纯化hIgG及用0.1 mol/L NaOH长时间原位清洗后多肽亲和介质的动态吸附容量(DBC)变化来考察多肽亲和介质的可重复利用性和稳定性.结果表明,与酶共同孵育8 h后,D型多肽配基的降解率(8%)远低于L型多肽配基(55%),说明D型多肽配基具有更高的酶稳定性.使用D型多肽亲和介质从细胞培养上清液中纯化的单克隆抗体(mAb)的纯度高达98%,从人血清中纯化hIgG纯度为91.37%,说明多肽亲和介质具有从复杂的实际体系中分离抗体的能力,但不具备分离抗体不同亚型的能力.经0.1 mol/L NaOH原位清洗12 h后,两种多肽亲和介质对抗体的吸附量下降均小于8%,以人血清为原料,经过40次上样后,L型多肽亲和介质DBC下降14.51%,而D型多肽亲和介质仅下降5.92%,表明D型多肽亲和介质具有更高的操作稳定性. 展开更多
关键词 抗体 纯化 多肽亲和介质
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植物生物矿化研究进展综述
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作者 陈礼丽 徐意诚 温海虹 《安徽农学通报》 2023年第2期14-18,共5页
植物生物矿化主要是自身新陈代谢作用的结果。矿化产物的类型多样,矿化产物主要以硅亲和多肽介导的二氧化硅为主,二氧化硅在各个领域内应用广泛,并具有生物相容性好、导电性好、耐腐蚀性、化学惰性和光学透明性等特点。本文通过对生物... 植物生物矿化主要是自身新陈代谢作用的结果。矿化产物的类型多样,矿化产物主要以硅亲和多肽介导的二氧化硅为主,二氧化硅在各个领域内应用广泛,并具有生物相容性好、导电性好、耐腐蚀性、化学惰性和光学透明性等特点。本文通过对生物矿化产物的应用和仿生矿化的类型以及植物生物矿化的概述,为系统研究由硅亲和多肽介导的植物生物矿化机理提供参考依据。 展开更多
关键词 生物矿化 亲和多肽 二氧化硅 生物矿化机理
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蛋白质组学研究中高丰度蛋白质去除方法的研究进展 被引量:11
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作者 苟黎明 邵小宝 李克 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期298-300,共3页
关键词 蛋白质组学 高丰度蛋白质 低丰度蛋白质 免疫亲和层析法 多肽亲和去除技术
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乙型脑炎病毒E蛋白高亲和性多肽的筛选及鉴定 被引量:1
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作者 李耀政 王方雨 +4 位作者 余秋颖 郝俊芳 张浩 张以芳 张改平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2131-2136,共6页
利用分子对接技术筛选出能识别乙型脑炎病毒E蛋白的高亲和性多肽序列。利用大肠杆菌原核表达系统表达乙型脑炎病毒E蛋白,并对其进行纯化。借助分子对接及虚拟肽库筛选技术设计多条针对E蛋白的多肽序列,通过酶联免疫吸附试验和表面等离... 利用分子对接技术筛选出能识别乙型脑炎病毒E蛋白的高亲和性多肽序列。利用大肠杆菌原核表达系统表达乙型脑炎病毒E蛋白,并对其进行纯化。借助分子对接及虚拟肽库筛选技术设计多条针对E蛋白的多肽序列,通过酶联免疫吸附试验和表面等离子共振试验对多肽与靶标蛋白的结合情况进行筛选及鉴定。结果显示:成功表达E蛋白,并利用该蛋白筛选出了A、B两条特异性多肽序列,经检测,A、B多肽序列特异性和亲和性达到阳性血清水平。证明了利用分子对接技术设计的多肽可以与乙型脑炎病毒E蛋白特异性结合。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 E蛋白 分子对接 亲和多肽
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Interactions of carrageenan or its degradation product with R15K by affinity capillary electrophoresis
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作者 李中杰 李立 +2 位作者 王孝伟 刘俊义 凌笑梅 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS CSCD 2015年第6期400-404,共5页
V3 loop of HIV-1 envelop protein gp120 plays a pivotal role in the entry process of HIV-1 into target cells. R15K, the relatively conserved region of V3 loop, can be used in binding studies instead of recombinant gp12... V3 loop of HIV-1 envelop protein gp120 plays a pivotal role in the entry process of HIV-1 into target cells. R15K, the relatively conserved region of V3 loop, can be used in binding studies instead of recombinant gp120 molecule. Polyanionic compounds, such as carrageenan, possess antiviral activity through disrupting gp120-CD4 interaction, and chemical modifications have been performed to improve such activity. In this work, we, for the first time, analyzed the interactions between carrageenan or its degradation and R15K by affinity capillary electrophoresis (ACE). Our results revealed that depolymerized carrageenan rather than carrageenan could bind to R15K. The binding constant of depolymerized carrageenan was (2.94±0.57)× 10^6 mol/L. Our finding indicated that the depolymerized carrageenan could be R15K antagonist, and it might inhibit the infection of HIV-1 through the entry process. 展开更多
关键词 HIV-1 V3 peptides ACE CARRAGEENAN Carrageenan degradation
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Affinity adsorption mechanism studies of adsorbents C1-Zn(Ⅱ) for uremic middle molecular peptides containing Asp-Phe-Leu-Ala-Glu sequence
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作者 LI PingLin FU LiXue +2 位作者 QIAO YiTao ZHAO JianXin WANG Wei&YUAN Zhi 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2011年第2期375-379,共5页
To exploit efficient adsorbents for removing middle molecular peptides containing DFLAE (DE5, a typical peptide sequence accumulated in uremic serum) sequence by hemoperfusion, we designed and synthesized three affini... To exploit efficient adsorbents for removing middle molecular peptides containing DFLAE (DE5, a typical peptide sequence accumulated in uremic serum) sequence by hemoperfusion, we designed and synthesized three affinity adsorbents (C1-Zn^2+, C2-Zn^2+ and C3-Zn^2+) that could have high affinity to DE5. Subsequently, we evaluated the corresponding adsorption ability of each adsorbent by static adsorption experiments and isothermal titration calorimetry (ITC). The results showed that C1-Zn^2+ bad the best adsorption ability to DE5-containing peptides and the adsorption capacity for DE5 was 8.52 mg/g. By changing the adsorption conditions, the adsorption mechanism was elucidated. The main driving force of the adsorption is metal-carboxyl coordination and the hydrophobic force affords the cooperative effect. It is expected that our present work can provide basic understanding for the design of adsorbents with high affinity and selectivity towards oligopeptides. 展开更多
关键词 affinity adsorbent adsorption mechanism middle molecular peptides
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