离子液体[BMIM]_3[CB3GA]萃取溶菌酶的影响因素分析

以离子液体[BMIM]3[CB3GA]作为萃取剂在不同操作条件下进行溶菌酶萃取实验。结果表明,[BMIM]3[CB3GA]离子液体的浓度为4 mmol/L、萃取时间为30 min及溶液呈酸性时,对溶菌酶的萃取效果最佳,可达90%以上;多次回收离子液体进行重复萃取时,[BMIM]3[CB3GA]对溶菌酶的萃取率无明显下降,也可维持在90%以上。

组氨酸标签蛋白纯化介质的合成及应用

以离子液体为萃取溶剂,将氮杂大环功能性配体与疏水性离子液体链接构建亲和性离子液体,通过氮杂大环螯合金属离子构成复合物;利用螯合的金属离子(Cu2+、Ni2+、Zn2+)对组氨酸标签特异的亲和性,对组氨酸标签蛋白进行特异性亲和纯化,结果表明:AIL螯合金属离子后才会对FITC-(His)6-OH产生亲和性。Cu-AIL亲和性最强,对于His-tag EGFP的选择性最差;Ni-AIL受限于其低的金属离子结合量,获得的目的蛋白最少;Zn-AIL能有效亲和His-tag EGFP,纯化效率相对最佳。结合以上不同亲和介质的特性,开发出利用Zn-AIL与Cu-AIL的二次纯化体系,获得纯度约90%的His-tag EGFP。