链霉亲和素及其亲和系统的蛋白质进化

链霉亲和素/生物素(Streptavidin/Biotin)体系作为目前已知的最高亲和力作用体系,已在生物学研究中获得广泛应用。本文针对Streptavidin/Biotin和Strep-Tactin/Strep-tag两个相关系统的演化,分别从链霉亲和素蛋白的结构改造、亲和肽标签优化等方面进行了较为详细的归纳。通过对链霉亲和素蛋白各种突变体的优缺点的比较,有助于实际应用中选择合适的Streptavidin突变体。本文通过对链霉亲和素蛋白质进化的综述,可帮助更准确地理解市场上各种链霉亲和素蛋白的功能和用途,并为深入研究链霉亲和素蛋白的进化提供参考。

K^+高亲和转运系统吸收动力学特征及其受NH_4^+影响的研究

为探讨钾的高亲和转运系统是否受到铵离子的影响,采用溶液培养方法研究了水稻、大豆两种作物苗期(16d)的K+高亲和转运系统吸收动力学特征及其受吸收液中NH4+的影响。结果表明,NH4+对K+吸收的Vmax的影响在作物种类间有较大的差异,水稻受影响显著小于大豆。NH4+对供试作物K+吸收的Km值影响均很小,说明NH4+对K+吸收速率的影响主要在于影响了细胞膜上K+载体的数量而非影响了载体吸收位点与K+之间的亲和性。

铵对不同作物根系钾高亲和转运系统的影响

为探讨植物苗期根系高亲和转运系统的K+吸收动力学特征及其是否受吸NH4+的影响,采用溶液培养和添加K+通道抑制剂的方法,对低K+浓度下5种植物在有铵和无铵时的K+吸收动力学特征进行了研究。结果表明,植物根细胞K+高亲和系统的吸钾特征曲线符合Michaelich-Menten方程。不同植物K+高亲和系统的Km值之间差异较小,均在50%以内,说明不同植物的载体与K+间的亲和性差异较小;不同植物K+高亲和系统的Vmax值间差异很大,说明不同植物根细胞膜上的K+载体数量间差异很大,这是导致不同植物在低钾条件下吸钾能力差异较大的主要原因。铵的存在可以明显降低供试植物在低钾条件下对K+的吸收速率。与无NH4+情况比较,NH4+的存在可使大豆K+吸收的Vmax减少80%;但NH4+对不同载体与K+之间亲和性(Km)的影响较小,由NH4+所导致的Km的降低率均在10%以内。可见,对高亲和系统而言,NH4+对K+吸收的影响主要是由于铵竞争细胞膜上的钾载体所造成的。

木瓜蛋白酶在亲和双水相系统中的分配行为及机制研究进展

本文查阅相关文献,对木瓜蛋白酶传统提取方法(超滤法、盐析法、有机溶剂法、亲和层析法)及一些新兴的提取方法如双水相萃取法、亲和双水相法作了简要综述。利用金属螯合亲和双水相分配系统,能有效获得高纯度木瓜蛋白酶,但木瓜蛋白酶与亲和成相剂的相互作用及其分配行为与机制尚不清楚。研究木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的相互作用和吸附动力学模型;对酶的亲和结合物进行物理表征和分子模拟。阐明木瓜蛋白酶与不同金属离子亲和成相剂之间的亲和作用原理。将双水相萃取技术和亲和分配技术相融合,提出基于木瓜蛋白酶的金属螯合亲和双水相分配技术,该技术有望大力推动木瓜蛋白酶工业化高效制备的发展。

生物素-亲和素系统在压电免疫传感器中质量放大作用研究

生物素－亲和素系统（ＢｉｏｔｉｎＡｖｉｄｉｎＳｙｓｔｅｍ，ＢＡＳ）是７０年代后期迅速发展起来的一种新型生物放大系统，具有高灵敏度、高特异性以及简便、经济、快速等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛的应用［１］．我们首次将生物素－亲和素系统用于压电免...

生物素—亲和素系统在生物传感器中的应用

在生物传感器的研究过程中寻求稳定的、高灵敏度的酶固定技术受到人们极大的关注。常用的酶的固定化技术有物理吸附、共价结合、包埋等,然而每一种方法都有一些需要解决的问题,例如:降低了酶的活性或响应较慢等。这些问题与酶的构象、酶层和电极的几何结构、酶和支撑物之间的联结有关。为了解决这些问题,人们试图合成出许多不同构象、不同化学结构的多功能分子,发展新型的制膜技术,在分子水平上进行设计和制造出按人们预想的次序排列的分子组合体系。亲和素—生物素系统的应用开辟了一类新的酶的固定化技术,本文就亲和素—生物素系统在酶的固定及生物传感器方面的应用进行综述。

生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用

目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性。方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性。将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600 μg,24 h后腹腔注射80 μg 亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素。对实验动物行MR扫描,测量SE T1WI平扫及增强后10、30 min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比。结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%。增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到最大值,与其他各时间点有显著性差异。肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到最高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似。肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异。结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化。

生物素—亲和素系统检测食品中黄曲霉毒素B_1的研究

建立了ABC—ELISA检测食品中AFB_1的方法,最小检测值0.01ng/孔,灵敏度比普通ELISA高10倍,检测时间缩短1h。方法灵敏、特异、简便、快速,样品提取液可直接用于测定。对抗体标记生物素的方法、溶剂影响、反应时间等作了较详细的讨论。对3类食品(83份样品)加标回收率为70-100％,变异系数为7.7 17.3％。将本法测得的12个玉米样品中AFB-1值与国家标准检测法测得的值作配对资料的t检验,P>0.05,说明两种方法测得结果间的差异无显著性。

亲和素-生物素系统介导的炎症预定位显像研究

目的:探讨亲和素-生物素系统在小鼠炎症模型中进行预定位炎症显像的实验研究。方法:实验动物均为用肌肉注射松节油所致炎症模型,采用生物素化人免疫球蛋白(B-hIgG)和99mTc标记亲和素(99mTc-Avi-din)进行二步法预定位炎症显像,在注药后3h、6h、12h对小鼠炎症模型进行显像和体内生物学分布测定,并以99mTc-hIgG和99mTc-Avidin作为对照组。结果:二步法预定位显像组炎症病灶在3h即可显像,其靶/非靶(T/NT)比值为1.95,6h达3.12,血中放射性清除较快。而99mTc-hIgG组T/NT在3h仅0.38,由于其分子量较大,血中清除时间较长,血本底较高,6h^12h血中仍保持较高放射性水平,且肝脏积聚放射性较多,图像也不清晰;99mTc-Avidin组则在肝、肾有较多放射性浓聚。结论:二步法预定位炎症显像的T/NT比值较99mTc直接标记hIgG法为高,且病灶显像时间提前,并可提高图像的清晰度。

生物素-亲和素桥接系统在骨组织工程中的应用

目的:观察生物素-亲和素桥接系统(avidin-biotin binding system,ABBS)对骨组织工程中种子细胞与支架材料黏附的影响,探讨ABBS在骨组织工程的作用。方法:以脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为种子细胞、β磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)作为支架材料建立组织工程骨模型。实验分为两组,对照组:ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合;实验组:ABBS修饰的ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合。通过免疫荧光以及流式细胞仪检测ADSCs生物素化的效率。计算并比较两组的细胞黏附率;在扫描电镜下观察ADSCs与多孔β-TCP支架黏附的表面情况。结果:生物素化的ADSCs荧光染色显示生物素结合部位在细胞胞质,且流式细胞仪检测提示生物素化细胞阳性率为95%。ADSCs与多孔β-TCP支架复合物结合10min、30min、60min、12h、24h时,对照组和实验组的细胞黏附率分别为(2.31±0.14)%和(21.75±4.69)%、(11.96±2.53)%和(54.82±12.37)%、(33.48±9.51)%和(78.69±15.65)%、(78.29±10.63)%和(95.46±7.38)%、(94.79±10.42)%和(98.13±1.45)%。生物素化的ADSCs与亲和素化多孔β-TCP支架材料的黏附效果在10min、30min、60min、12h4个时间点明显高于未修饰的ADSCs与多孔β-TCP支架的黏附效果(P<0.05)。电镜下观察,ABBS组与对照组无明显差别。结论:ABBS可以促进ADSCs在支架上早期黏附,有利于细胞增殖,并且对组织工程骨的生物相容性无明显影响。

用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性

分别用131I和188Re标记亲和素,测定其与生物素结合的能力,并与未标记的亲和素、罗丹明标记的亲和素进行比较,测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量;探讨用生物素 亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明,未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、188Re 亲和素和131I 亲和素,它们与生物素的结合能力依次下降,与生物素半解吸量分别为21.9,19.5,25.7和47.9μg;放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明 亲和素。由此推测,有可能用亲和素 生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。131I和188Re;

生物素/亲和素系统用于活体分子成像现状

生物素/亲和素系统由于具有高的亲和力以及多级放大作用,已成为近年来进展迅速的一门生物学技术,已应用于医学影像学的多个领域。对生物素/亲和素系统的分子结构及其在分子影像学中的应用进展进行综述。

亲和素-生物素系统预定位放免治疗的实验研究

选用153Sm标记抗CEA单抗 (McAb)和螯合DTPA生物素 (DB2 ) ,利用生物素化单抗 -亲和素- 153Sm -DB2 的三步法在荷人结肠癌裸鼠模型中进行预定位放免治疗。以153Sm -CEAMcAb、153Sm -mIgG、153Sm -DB2 作为治疗对照组 ,10 0 μL生理盐水作为非治疗对照组 ,在移植瘤接种后的第3天实施治疗 ,采用单次较大剂量治疗 ( 11.1MBq 每鼠 ) ,定期测量裸鼠的体重、血白细胞计数和肿瘤生长体积以及瘤块的组织病理学检查 ,观察肿瘤抑制效应及毒副作用。结果表明 ,预定位放免治疗与直接标记单抗放免治疗对肿瘤有明显的抑制作用 ,治疗第 5周肿瘤抑制率分别达到 80 .67%和 78.4 4 % ,组织病理学结果提示肿瘤组织呈坏死样改变 ,而正常脏器如肝、肾等未见损伤 ;治疗前后白细胞计数以153Sm -CEAMcAb及153Sm -mIgG两组降低最为显著。提示预定位放免治疗具有低毒高效的治疗作用 ,较153Sm

亲和素-生物素系统预定位放免治疗白血病的研究

1预定位技术概述单克隆抗体在肿瘤学中已成为将放射性核素传递至肿瘤细胞的载体用于肿瘤的诊断及治疗。放免治疗（RIT）成为最令人期待的治疗形式之一,特别是在血液系统恶性肿瘤。例如,抗CD20介导的RIT即可单独或联合化疗或造血细胞移植（HCT）可明显提高惰性B-细胞非霍奇金淋巴瘤病人的预后,为侵袭性淋巴瘤的预后带来希望。

亲和素-生物素系统预定位技术在炎症显像中的应用

亲和素 -生物素系统预定位技术已在肿瘤放射免疫显像中得到成功应用 .近年来 ,这一新技术也已开始用于炎症的显像研究中 .本文就亲和素 -生物素系统预定位技术及其在炎症动物模型中的实验研究和临床试用研究中的情况进行简要综述 .并就目前炎症显像的现状及存在的问题 ,以及预定位炎症显像的应用前景加以讨论 .

量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析测定雌三醇

以生物素化羊抗兔免疫球蛋白和量子点标记链霉亲和素为荧光探针，采用竞争免疫分析模式，建立了一种灵敏度高、选择性好的检测雌三醇的荧光免疫分析方法。对几种测量参数如温育时间和温度、缓冲溶液pH、试剂浓度等进行了优化；方法的线性范围为0．01～1000ng/mL，检出限0．0029ng／mL，血清样品加标回收率在91％-117％之间。

辛巴蓝F3GA-羟丙基淀粉的制备及其对蛋白质的亲和分离特性

为了开发新型的淀粉基生物分离材料,制备了适用于亲和双水相萃取技术的辛巴蓝F3GA-羟丙基淀粉,并考察了其对蛋白的亲和分离特性。将三嗪类染料辛巴蓝F3GA分别偶联于不同取代度的羟丙基淀粉上,对其反应时间、温度以及pH进行考察,根据亲和配基密度,得到制备亲和分离材料的优化工艺条件为:反应温度60℃,反应时间6 h,pH 9.5。进一步考察了亲水性基团、亲和配基对羟丙基淀粉亲和材料/聚乙二醇双水相体系液液平衡的影响,表明,亲和配基的引入对系统的相平衡影响很小,系统结线都基本重合,斜率变化很小;随着羟丙基淀粉取代度的增大,双水相呈相区域向右移。牛血清白蛋白被分配到羟丙基淀粉亲和材料相中,当亲和配基密度达到1.25μmol/g时,分配效率从30%提高到80%以上。

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先,将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应,观察荧光信号的放大情况;然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式,对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化,包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后,采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明,BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附,并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限;另外,与传统的与生物素-亲和素检测技术相比,采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度,有望用于蛋白质芯片的检测。

盐胁迫下囊果碱蓬和陆地棉硝态氮低亲和吸收速率的差异及其生理分析

采用常规离子耗竭方法,以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)为对照,在不同Cl-和NO3--N营养状况下,研究了盐生植物囊果碱蓬(Suaeda physophora Pall.)NO3-低亲和吸收动力学特征,探讨了盐胁迫下囊果碱蓬NO3-高效吸收的调控机制。结果表明:两种植物NO3-的低亲和吸收动力学呈线性吸收,且囊果碱蓬NO3-的净吸收速率和硝酸还原酶的活性显著高于陆地棉,说明囊果碱蓬具有较高的氮需求;10 mmol L-1KNO3预处理2 h后,囊果碱蓬和陆地棉地上部全氮的含量分别增加30.6%和36.8%;NO3-的净吸收速率分别降低了46.6%和45.5%,说明两种植物氮的吸收受到体内氮营养的负反馈调节;NaCl长期胁迫30 d显著抑制NO3-的吸收,陆地棉NO3-的净吸收速率下降幅度显著高于囊果碱蓬,而根系Cl-的含量显著高于囊果碱蓬;NO3-的净吸收速率与植物根系Cl-的含量呈显著性负相关,说明囊果碱蓬根系拒Cl-的能力显著高于陆地棉;NaCl或KCl短期胁迫2 h对囊果碱蓬NO3-的净吸收速率没有显著影响,但陆地棉NO3-的净吸收速率分别降低了43.8%和37.5%。研究结果证明了盐胁迫下囊果碱蓬NO3-的高效吸收与植物内部的高氮需求和Cl-的累积有关,而培养介质中Cl-的浓度对NO 3-的低亲和转运系统影响较小。