亲和素-生物素系统介导的炎症预定位显像研究

目的:探讨亲和素-生物素系统在小鼠炎症模型中进行预定位炎症显像的实验研究。方法:实验动物均为用肌肉注射松节油所致炎症模型,采用生物素化人免疫球蛋白(B-hIgG)和99mTc标记亲和素(99mTc-Avi-din)进行二步法预定位炎症显像,在注药后3h、6h、12h对小鼠炎症模型进行显像和体内生物学分布测定,并以99mTc-hIgG和99mTc-Avidin作为对照组。结果:二步法预定位显像组炎症病灶在3h即可显像,其靶/非靶(T/NT)比值为1.95,6h达3.12,血中放射性清除较快。而99mTc-hIgG组T/NT在3h仅0.38,由于其分子量较大,血中清除时间较长,血本底较高,6h^12h血中仍保持较高放射性水平,且肝脏积聚放射性较多,图像也不清晰;99mTc-Avidin组则在肝、肾有较多放射性浓聚。结论:二步法预定位炎症显像的T/NT比值较99mTc直接标记hIgG法为高,且病灶显像时间提前,并可提高图像的清晰度。

亲和素-生物素系统预定位放免治疗白血病的研究

1预定位技术概述单克隆抗体在肿瘤学中已成为将放射性核素传递至肿瘤细胞的载体用于肿瘤的诊断及治疗。放免治疗（RIT）成为最令人期待的治疗形式之一,特别是在血液系统恶性肿瘤。例如,抗CD20介导的RIT即可单独或联合化疗或造血细胞移植（HCT）可明显提高惰性B-细胞非霍奇金淋巴瘤病人的预后,为侵袭性淋巴瘤的预后带来希望。

亲和素-生物素系统预定位放免治疗的实验研究

选用153Sm标记抗CEA单抗 (McAb)和螯合DTPA生物素 (DB2 ) ,利用生物素化单抗 -亲和素- 153Sm -DB2 的三步法在荷人结肠癌裸鼠模型中进行预定位放免治疗。以153Sm -CEAMcAb、153Sm -mIgG、153Sm -DB2 作为治疗对照组 ,10 0 μL生理盐水作为非治疗对照组 ,在移植瘤接种后的第3天实施治疗 ,采用单次较大剂量治疗 ( 11.1MBq 每鼠 ) ,定期测量裸鼠的体重、血白细胞计数和肿瘤生长体积以及瘤块的组织病理学检查 ,观察肿瘤抑制效应及毒副作用。结果表明 ,预定位放免治疗与直接标记单抗放免治疗对肿瘤有明显的抑制作用 ,治疗第 5周肿瘤抑制率分别达到 80 .67%和 78.4 4 % ,组织病理学结果提示肿瘤组织呈坏死样改变 ,而正常脏器如肝、肾等未见损伤 ;治疗前后白细胞计数以153Sm -CEAMcAb及153Sm -mIgG两组降低最为显著。提示预定位放免治疗具有低毒高效的治疗作用 ,较153Sm

亲和素-生物素系统预定位技术在炎症显像中的应用

亲和素 -生物素系统预定位技术已在肿瘤放射免疫显像中得到成功应用 .近年来 ,这一新技术也已开始用于炎症的显像研究中 .本文就亲和素 -生物素系统预定位技术及其在炎症动物模型中的实验研究和临床试用研究中的情况进行简要综述 .并就目前炎症显像的现状及存在的问题 ,以及预定位炎症显像的应用前景加以讨论 .

用生物素-亲和素系统测定放射性标记生物物质的活性

分别用131I和188Re标记亲和素,测定其与生物素结合的能力,并与未标记的亲和素、罗丹明标记的亲和素进行比较,测定标记亲和素与生物素结合曲线和半解吸量;探讨用生物素 亲和素系统测定放射性核素标记生物物质活性的可能性。结果表明,未标记的亲和素、罗丹明标记亲和素、188Re 亲和素和131I 亲和素,它们与生物素的结合能力依次下降,与生物素半解吸量分别为21.9,19.5,25.7和47.9μg;放射性标记的亲和素与生物素结合的能力低于未放射性标记的亲和素和罗丹明 亲和素。由此推测,有可能用亲和素 生物素系统来评价标记方法对生物活性的影响。131I和188Re;

生物素-亲和素系统在压电免疫传感器中质量放大作用研究

生物素－亲和素系统（ＢｉｏｔｉｎＡｖｉｄｉｎＳｙｓｔｅｍ，ＢＡＳ）是７０年代后期迅速发展起来的一种新型生物放大系统，具有高灵敏度、高特异性以及简便、经济、快速等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛的应用［１］．我们首次将生物素－亲和素系统用于压电免...

生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用

目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性。方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性。将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600 μg,24 h后腹腔注射80 μg 亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素。对实验动物行MR扫描,测量SE T1WI平扫及增强后10、30 min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比。结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%。增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到最大值,与其他各时间点有显著性差异。肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到最高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似。肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异。结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化。

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先,将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应,观察荧光信号的放大情况;然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式,对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化,包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后,采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明,BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附,并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限;另外,与传统的与生物素-亲和素检测技术相比,采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度,有望用于蛋白质芯片的检测。

人血清甲状腺素的生物素-亲和素竞争酶联免疫分析

目的:建立人血清T4-BA-ELISA分析方法。方法:合成的3种生物素化的T4-衍生物、经过筛选,Biotin-BSA-T4被用于以下实验中:T4在三氯乙酸作用下与甲状腺T4结合球蛋白（TBG）分离,并与Biotin-BSA-T4对有限量的兔抗人T4IgG形成竞争,在链霉亲和素化辣根过氧化物酶（streptavidin-HRP）存在下,以四甲基联苯胺（TMB）为底物,进行T4的ELISA定量分析。结果:标准曲线的可测量范围是10～20μg/L,批内变异系数为7.1％,批间变异系数为 8.03％。另外,用EIA和RIA同时测定了71份血清标本,对两套数据作了回归分析.r=0.969 5,P<0.001。结论:此方法的灵敏度已达到甚至超过了放射免疫分析的灵敏度,标准曲线范围与放射免疫分析相同。

外源性生物素对基于生物素-链霉亲和素化学发光技术干扰的研究进展

基于生物素-链霉亲和素系统的化学发光技术被广泛应用,但外源性生物素会对其产生干扰,这种干扰与多种因素相关,如反应模式、检测平台、检测项目和反应体系中的相关要素等。这些因素任何一种发生改变都将对干扰产生不同程度的影响。及时准确的识别干扰有助于减少临床误诊和漏诊。该文对国内外所报道的影响干扰的因素进行综述,为临床实验室人员提供借鉴。

静电吸附法与生物素-亲和素桥联法制备PSMA抗体靶向纳米微泡的对比实验研究

目的比较静电吸附法和生物素-亲和素桥联法制备前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体靶向纳米微泡的物理特性和靶向黏附率。方法分别应用静电吸附法和生物素-亲和素桥联法制备PSMA抗体靶向的纳米微泡,检测其物理性状;光镜下观察两种微泡与前列腺癌细胞LNCaP和C4-2的靶向能力,并与胃癌细胞MKN45对照;对比分析两种靶向纳米微泡的粒径、浓度及与前列腺癌细胞结合能力。结果两种靶向纳米微泡均呈圆形,表面光滑,大小均匀,分散度好,无聚集,粒径均<1000 nm。静电吸附法制备的靶向纳米微泡平均粒径为(702.96±66.65)nm,平均浓度为(3.46±0.30)×108/ml,与前列腺癌细胞LNCaP黏附率(77.2±3.19)%,与C4-2细胞黏附率(61.00±4.47)%;生物素-亲和素桥联法制备的靶向纳米微泡平均粒径为(609.90±37.40)nm,平均浓度约(4.52±0.19)×108/ml,与前列腺癌细胞LNCaP黏附率(96.60±1.14)%,与C4-2细胞黏附率(94.00±1.58)%。两种靶向纳米微泡的粒径、浓度及与前列腺癌细胞黏附率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);与胃癌细胞MKN45均无黏附。结论生物素-亲和素桥联法是一种高效、灵敏、稳定、特异性强的PSMA抗体靶向微泡制备方法,较静电吸附法具有更大的优势。

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。

生物素化DNA与链霉亲和素绑定初步研究

将生物素标记的DNA与链霉亲和素(streptavidin,STV)按4∶1摩尔比连接,用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)对混合物表征,观察到所有可能的几种DNA-STV复合物。并按照不同摩尔浓度比和孵育时间配制DNA与STV混合液,探讨了影响结合效率的因素,初步得到用生物素-链霉亲和素系统批量制备1STV-1DNA单分子复合物的最佳制备条件,为未来单分子DNA的大规模快速制备奠定了基础。

生物素化壳聚糖微球的体外抗癌活性

目的 研究一套有预定位及肿瘤导向作用的药物载体系统。方法 以生物素化无唾液酸胎球蛋白为分子识别系统 ,与肝癌细胞特异性结合 ,将包封有 5 Fu的壳聚糖微球生物素化 ,作为药物载体 ,通过生物素 亲和素系统将二者桥连 ,用“三步法”研究微球体外抗肿瘤作用。结果 亲和素 生物素化受体介导的生物素化壳聚糖微球能与体外培养的肝癌细胞特异结合并有显著的抗癌作用。结论 生物素化微球 亲和素 生物素化受体 (或单克隆抗体 )系统可望在体内有预定位及肿瘤靶向作用 ,有广泛的应用前景。

量子点标记链霉亲和素荧光免疫分析测定雌三醇

以生物素化羊抗兔免疫球蛋白和量子点标记链霉亲和素为荧光探针，采用竞争免疫分析模式，建立了一种灵敏度高、选择性好的检测雌三醇的荧光免疫分析方法。对几种测量参数如温育时间和温度、缓冲溶液pH、试剂浓度等进行了优化；方法的线性范围为0．01～1000ng/mL，检出限0．0029ng／mL，血清样品加标回收率在91％-117％之间。

钛种植体表面固定生物素的实验研究

目的利用生物素-亲和素系统,将生物素共价键合在钛基材表面,为钛种植体表面接枝生物活性分子提供新的实验方法。方法使用3-氨丙基膦酸(APP)对钛基材表面进行酸蚀处理并使其获得游离氨基,由碳二亚胺(EDC)介导,通过与羧基反应形成酰胺键以实现生物素-亲和素系统在钛种植体表面的固定。结果通过环境扫描电镜、傅立叶变换红外光谱、X射线光电子能谱、免疫荧光等检测方法对样品进行表征,证实钛基材表面已成功接枝生物素。结论采用生物素-亲和素系统,可以在氨基化的钛基材表面成功接枝生物素,为钛种植体表面生物化修饰的研究提供新的方法和思路。

生物素化壳聚糖微球用于体外肿瘤靶向治疗

生物素 -亲和素介导的肿瘤靶向治疗是近几年来肿瘤早期诊断、治疗研究的热点。将包封有 TNFα的壳聚糖微球生物素化 ,以生物素化无唾液酸胎球蛋白为导向系统 ,采用“三步法”研究了微球体外抗肿瘤毒性实验。结果表明 :生物素化壳聚糖微球对体外培养的肝癌细胞 SMMC- 772 1有显著的抑制作用 (抑制率为 6 0 .8% ,P<0 .0 1)。

应用生物素标记和蛋白质组学方法分离鉴定柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)的表面蛋白

建立灵敏、特异、稳定的柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)表面蛋白分离鉴定技术,对研究其侵染机制和早期检测技术非常重要。采用生物素Sulfo-NHS-SS-biotin能特异性标记柞蚕微孢子虫的表面蛋白;经生物素标记后的微孢子虫用0.01 mol/L NaOH和2%SDS的混合液裂解结合超声波破碎的方法能提取到更多的微孢子虫总蛋白质;用30%乙腈和70%甲酸配合沸水浴处理可有效洗脱微孢子虫表面蛋白。对得到的柞蚕微孢子虫表面蛋白检测样品进行LC-MS/MS质谱鉴定,共获得了8个假定的表面蛋白,其中分子质量为26.6 k D(Np SWP12)、25.7 k D(Np SWP26)、32.0 kD(Np SWP30)的3个假定蛋白经间接免疫荧光分析确证为定位在孢子表面的蛋白质。序列分析显示,NpSWP12、NpSWP26、NpSWP30与家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白NbSWP12、NbSWP26、NbSWP30的氨基酸序列相似度分别为100%、93%、79%,其中Np SWP26无N-糖基化位点和O-糖基化位点,但C端具有介导孢子粘附宿主细胞的肝素结合基序。分离鉴定的3个表面蛋白可以作为柞蚕微孢子虫侵染机制研究和早期检测的靶标蛋白。

生物素衍生化环孢素A的合成及其与人亲环素A的相互作用研究

通过ε-氨基己酸二聚体的乙酯与生物素缩合将其羧端延伸14个原子,然后与氨基衍生化的环孢素A缩合合成了生物素衍生化的环孢素A.经过药物免疫印迹和表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance)测定表明生物素衍生化的环孢素A还保留了与人亲环素A结合的活力.

SPR生物传感器在食品安全领域的应用研究

使用集成化手持式SpreetaTM SPR传感器快速检测大肠杆菌E.Coli 0157∶H7,利用大肠杆菌抗体的免疫吸附反应,采用亲和素—生物素系统放大检测的响应信号,并引入复合抗体作为第二抗体,整个检测过程在1 h内完成,实现病原微生物的快速检测。