谷胱甘肽亲和层析介质的制备条件及其层析特性研究

以琼脂糖凝胶4FF（Sepharose 4 Fast Flow）为基质,1,4-丁二醇二缩水甘油醚（BDGE）为活化剂,通过活化、偶联谷胱甘肽（GSH）,得到GSH亲和层析介质.实验结果表明：活化及偶联的优化条件为10,m L基质加入0.42,g Na OH、15,m L二甲基亚砜（DMSO）、15,m L BDGE,反应温度为40,℃,反应时间为6,h;偶联溶液p H 6.5,反应温度为37,℃,反应时间为24,h.在此条件下,环氧基修饰密度可达60~65,μmol/m L;所制备的介质载量为（14.19±0.98）mg/m L.以此介质对谷胱甘肽S–转移酶（GST）、融合蛋白GST-Bcl-2、GST-Ald、GST-PTPN12进行纯化,结果表明,该介质纯化效果较好、载量高、稳定性能较好,可重复使用.

适应高滴度抗体制备的抗体捕集纯化技术研究进展

抗体捕集纯化是单克隆抗体和Fc融合蛋白药物制备过程的关键步骤。但相较于大规模动物细胞培养技术的迅猛发展,抗体的捕集纯化已经成为了制约单抗药物生产的主要"瓶颈"。本文回顾了蛋白A亲和层析和阳离子交换层析等当前抗体药物工业生产过程主要捕集纯化技术的发展现状和应用情况,介绍了近年来亲和肽层析和混合模式吸附层析等新型层析分离技术的发展以及膨胀床吸附和多柱串联吸附等过程集成方法在提高抗体捕集效率方面所展现的良好前景。在此基础上,指出了影响抗体捕集纯化的主要因素以及各技术发展中存在的问题,展望抗体捕集纯化技术的发展方向。

G蛋白Rab3a cDNA的克隆与表达

利用PCR法 ,从人胎盘总cDNA中扩增得到Rab3acDNA的全编码区 .序列分析表明 ,扩增得到的Rab3acDNA有 5个核苷酸发生了变异 ,但翻译的氨基酸与发表的完全一致 .将扩增得到的Rab3acDNA克隆于原核融合表达载体pGEX 4T 1中 ,在E .coliBL2 1中经IPTG诱导表达 .为了进一步鉴定表达产物 ,对纯化后的Rab3a蛋白进行了SDS PAGE、N端氨基酸测序、质谱分子量测定及氨基酸组成分析鉴定 .结果显示 ,表达蛋白的分子量约 2 5kD ,N端氨基酸序列为MASATDSR ,氨基酸组成分析表明 。