蛋白A高效亲和膜色谱法测定人血浆中免疫球蛋白G的含量

研究了蛋白Ａ高效亲和膜色谱对水溶液及人血浆中人免疫球蛋白Ｇ（ＨＩｇＧ）的特异性吸附和定量测定。方法具有较高的精确度和较好的重复性：ＨＩｇＧ标样５次重复进样的相对标准偏差为１．５％，人血浆样品３次重复进样的相对标准偏差为３．６％；所测得的定量标定曲线的线性相关系数达到０．９９９３；不含己二胺间隔臂的亲和介质的非特异性吸附极低，基本检测不出来。快速实验中，一次分析可在０．５ｍｉｎ内完成。实验表明，利用所建立的方法对人血浆中的ＨＩｇＧ进行定量测定可以得到较为满意的结果。

亲和膜色谱技术研究进展

对一种崭新的生物大分子分离技术——亲和膜色谱技术做了全面的评述,介绍了亲和膜色谱分离的过程,评价了亲和膜基质材料活化、改性方法,给出了配基、间隔臂的选择原则,概括了亲和膜色谱理论研究的进展,并对亲和膜色谱技术进行了展望.

高效亲和膜色谱快速分析及小量制备蛋白质

以甲基丙烯酸缩水甘油酯纤维素复合膜为基质，分别以蛋白Ａ（ＰｒｏｔｅｉｎＡ）、人免疫球蛋白Ｇ（ＨＩｇＧ）、三嗪染料（ＣｉｂａｃｒｏｎｂｌｕｅＦ３ＧＡ）、亚胺二乙酸铜离子为配基，用不同方法制备了适合于分析及小量制备的高效亲和膜色谱介质，并对高效亲和柱的基本性能及其应用于各种相应蛋白的定量测定情况进行了考察。利用这种方法可以针对不同的目标蛋白及所存在的环境采用不同的配基，对各种蛋白的定量测定及小量制备可达到较为满意的结果。

亲和膜色谱法纯化人血浆纤溶酶原

首次以尼龙膜为基质 ,分别采用三氯三嗪和 1 ,4 丁二醇二缩水甘油醚活化法 ,制备了以L 赖氨酸为配基的亲和膜。首次使用亲和膜色谱法成功地从人血浆中快速纯化出了高纯度的纤溶酶原 ,电泳分析显示一个主要的谱带。为规模化快速纯化临床用高纯度纤溶酶原提供了新方法。

染料膜亲和色谱法中膜堆的制备及应用

将染料亲和配基偶联于大孔纤维素膜上，所得亲和膜用胶粘法制成亲和膜堆，膜堆的通透性远优于通常的亲和色谱柱。装有蓝色和红色亲和膜的膜堆可分别用于人血清白蛋白和碱性磷酸酯酶的分离纯化，其中碱性磷酸酯酶可在一步操作后纯化４０倍。

膜亲和色谱的现状、发展和应用

文章对膜亲和色谱的原理、特点、设备、过程和发展情况做了介绍，并对亲和膜在整个膜分离技术中的地位、所占的比重及市场预测做了述评，对膜亲和色谱与其它色谱分离技术的优缺点进行了比较。重点介绍了制备亲和膜的材料，活化方法，问隔臂和配基的种类、选择和共价键合方法，配基和配合物产生亲和作用的机理及解离过程和方法。并对膜亲和色谱在酶、蛋白质、核糖核酸等生物大分子纯化分离方面的应用情况做了述评。

用新型尼龙亲和膜纯化人血浆蛋白

以微孔尼龙膜为基质 ,分别采用三氯三嗪和 1,4 丁二醇二甘油醚活化法制备了一系列亲和膜。首次使用平板亲和膜方法经一步操作即从人血浆中纯化得到高纯度的γ 球蛋白、纤溶酶原。电泳分析显示 ,纯化得到的人血浆γ 球蛋白 ,纯度在 83%以上 ;纯化得到的γ 球蛋白和纤溶酶原的纯度均高于市售同类产品 ;另外 ,初步探索了人血浆凝血酶的一步纯化法。该法纯化得到的凝血酶比活为 42 0NIH单位 /mg～ 42 5NIH单位

尼龙亲和膜的制备及其对木瓜蛋白酶的分离纯化研究

以尼龙膜为基质,键合壳聚糖的方法对尼龙膜进行改性,使膜的非特异性吸附大大降低,并偶联活性染料亲和基Cibacron Blue F3GA,得到一种新的染料亲和膜.该亲和膜具有良好的色谱性能,对木瓜蛋白酶有较高的吸附量(235.3 mg/g),吸附行为满足Freundlich吸附模型,pH值和离子强度对吸附量有明显影响.使用该亲和膜对木瓜粉中的木瓜蛋白酶进行分离纯化,纯化倍数可达46.5倍.

木瓜蛋白酶在染料Cibacron Blue F3GA纤维素亲和膜上的吸附研究

以纤维素滤纸膜为载体,染料Cibacron Blue F3GA为配基,制备了一种新型亲和膜色谱介质。采用扫描电镜、红外光谱、元素分析等方法对亲和膜介质进行鉴定与表征,该膜具有良好的色谱性能。亲和膜对F3GA的键合质量摩尔浓度达93.7μmol/g。研究了木瓜蛋白酶在亲和膜上的吸附行为,实验表明:在30℃下、酶质量浓度为2 mg/mL、pH=8.0时,吸附质量比可达57.9 mg/g,改变pH值及离子强度等条件对吸附质量比有明显的影响。在最适条件下吸附遵循Langmuir型吸附。可以初步推断,纤维素滤纸膜可以制成性能优良的亲和膜色谱介质,成本低廉,适合工业化分离纯化生物大分子。

批量法研究牛γ-球蛋白在尼龙亲和膜上的等温吸附行为

以尼龙膜为基质，Ｌ－色氨酸（Ｔｒｐ）为配基，合成了一种新的亲和介质用以吸附牛γ－球蛋白（ＢＧＧ）。用批量法系统考察了温度、离子强度和ｐＨ对亲和等温吸附的影响。研究结果表明，ＢＧＧ与氨基酸之间的亲和相互作用力主要是静电力和疏水相互作用力。在最适条件下吸附遵循Ｌａｎｇｍｕｉｒ型吸附，并且亲和吸附量最大而非特异性吸附最小。偏离该条件则会发生蛋白质在膜上的堆积，蛋白质构型变化及蛋白质与配基间的空间取向的变化，从而使吸附不再遵循Ｌａｎｇｍｕｉｒ型吸附。

尼龙亲和膜的制备条件优化及其表征

尼龙膜经稀盐酸水解、壳聚糖改性后,以木瓜蛋白酶为亲和膜的配基,通过戊二醛的活化处理后采用共价结合的方法将配基键合在尼龙膜上,从而得到有特异吸附性能的尼龙亲和膜.本实验考察了制备尼龙亲和膜的交联剂戊二醛的质量分数、pH值、温度、反应时间和酶用量对亲和膜上木瓜蛋白酶活力的影响,确定了最适合的制备条件:pH=9.0,质量分数为0.5%的戊二醛,反应温度为45℃,反应时间为6 h,酶用量为10 mg/mL.该优化条件下制备的尼龙亲和膜具备优良的色谱性能,可用于分离纯化半胱氨酸蛋白酶抑制剂.

鸭血清转铁蛋白的分离纯化

用硫酸铵沉淀、火棉胶透析去盐，再经固定化金属螯合亲和色谱柱层析，经洗脱液（0．1mol／L氯化钠和20mmol／L咪唑）洗脱，火棉胶透析去盐得纯化的鸭血清转铁蛋白．鸭血清转铁蛋白在固定化铜离子亲和膜层析柱上的吸附率达到80％以上．考察了上样速度、pH值、温度对鸭血清转铁蛋白吸附率的影响．最佳操作条件为：上样速度为0．5～0．8mL／min、pH值控制在7～8、操作温度为室温，用硫酸铵沉淀法及固定化金属螯合亲和色谱法，能获得光谱纯的鸭血清转铁蛋白．

中药成分的生物学活性评价及筛选

中药成分的生物学活性评价是探索中药药效物质基础的主要手段。分别从整体动物、细胞、分子3个层面,系统论述了10年来该领域的技术进展,以及依托新技术筛选出的新中药活性组分及单体化合物。同时分析了不同技术的长处及不足,以期能为中药新药研发提供资料及思路。