三黄汤降糖降脂活性成分的多靶标亲和超滤质谱研究

三黄汤是传统的中药复方,临床上被用于治疗糖尿病和肥胖已有上千年的历史,但三黄汤中具有显著降血糖和降血脂作用的活性成分及其作用机制仍不清楚。为此,本研究首先测试三黄汤对α-葡萄糖苷酶(α-Glu)和脂肪酶(LP)的抑制活性,然后分别以α-Glu、α-淀粉酶(α-Amy)和LP这3个靶酶为靶标,采用多靶标亲和超滤质谱技术从三黄汤中筛选出24、17和25种分别能够与α-Glu、α-Amy和LP结合的潜在活性配体,其中,表儿茶素-3-O-没食子酸酯等多个成分具有显著的降糖和降脂活性。随后,对筛选出的部分代表性活性成分进行分子对接验证。本研究结合3种糖脂代谢相关药物靶标,采用多靶标亲和超滤质谱技术探究三黄汤复方中潜在的降糖降脂活性成分,并据此构建多成分多靶标作用网络图,可为阐明降糖降脂活性物质基础和防治肥胖和糖尿病的临床应用提供理论依据。

亲和超滤质谱技术在中药活性成分筛选中的研究进展

亲和超滤质谱技术是20世纪90年代中期发展起来的一种快速、简单、有效的药物小分子发现模式。该技术利用配体与受体之间特异性结合,通过超滤装置快速筛选活性小分子化合物,再结合液相色谱-质谱联用技术(LC-MS),鉴定活性成分结构。亲和超滤质谱技术集药物活性成分筛选、结构鉴定于一体,尤其适用于从复杂体系中筛选潜在的活性小分子化合物。近年来,针对中药发挥药理作用具有多组分、多靶点的重要特点,亲和超滤质谱技术已被广泛用于从中药提取物中筛选与特定蛋白靶点相结合的小分子活性物质,对阐明中药药效的物质基础和以活性成分作为先导化合物的新药开发具有重要意义,是对传统药物发现方法的有利补充。本工作综述了该技术在中药活性成分筛选中的原理、特点、应用进展,以及对未来的展望。

超滤亲和结合液相色谱-质谱联用和分子对接技术筛选毛菊苣种子中高亲和性α-葡萄糖苷酶抑制剂

采用超滤亲和结合液相色谱-质谱联用(UF-LC-MS)和分子对接技术筛选毛菊苣种子中高亲和α-葡萄糖苷酶抑制剂。以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物,阿卡波糖为阳性对照,评价毛菊苣种子提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,其中阿卡波糖IC_(50)为0.003 mg/m L,毛菊苣种子IC_(50)为0.447 mg/m L。利用UF-LC-MS技术对毛菊苣种子提取物进行筛选鉴定,获得4种化合物;通过Autodock软件筛选出2种与α-葡萄糖苷酶有较高亲和力的化合物,分别是绿原酸和异绿原酸A。结合体外酶活实验,验证了绿原酸、异绿原酸A对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明,各化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性由大到小依次是:阿卡波糖>异绿原酸A>绿原酸,其中异绿原酸A与阿卡波糖抑制率相近。

赤芍抗凝血活性成分的筛选

目的建立超滤质谱快速筛选赤芍活性成分的方法,从中得到可能的潜在抗凝血活性成分。方法对赤芍不同极性部位成分进行鉴定,以凝血酶(thrombin,THR)为靶标,亲和超滤法逆靶向筛选赤芍中的凝血酶抑制剂,并对得到的活性成分进行分析、鉴定;采用生色底物法及体外抗凝法对其进行活性验证,通过分子对接对其结合能力进行初步分析。结果经对赤芍不同极性部位成分进行定性分析,检测出17个成分,并通过亲和超滤质谱法筛选得到一个可能的抗凝血活性成分——鞣花酸。鞣花酸浓度为1 g·L^(-1)时对凝血酶百分抑制率可达98.34%;体外凝血实验发现鞣花酸凝血酶时间(thrombin time,TT)与空白组相比有显著性差别(P<0.01),表明其为潜在的凝血酶直接抑制剂;分子对接结果显示鞣花酸与凝血酶活性结合位点多、结合能低,具有良好的结合效果。结论建立了一种快速筛选赤芍中抗凝血活性成分的方法,筛选结果表明鞣花酸可能为潜在的凝血酶抑制剂,为中药的靶向治疗、机制探索和质量控制提供了有价值的参考。

天然药物中乙酰胆碱酯酶抑制剂的快速发现

目的建立从天然药物中快速发现乙酰胆碱酯酶抑制剂的有效方法,为中药及其活性成分治疗阿尔茨海默病提供支持。方法通过Ellman比色法,对多种药用植物乙醇提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性进行评价,筛选出活性较好的提取物样品,应用亲和超滤超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术分离鉴定其中的活性成分。结果元胡、黄柏、钩藤、血三七具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性。经过快速筛选,发现3-二氢异卡丹宾或者3-二氢卡丹宾、钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛或异柯诺辛可能为钩藤中的活性化合物。结论采用亲和超滤UPLC-Q-TOF/MS联用技术从天然药物中快速筛选出乙酰胆碱酯酶抑制剂,方法可行、快速,能够为治疗阿尔茨海默病的新药开发提供先导化合物。