水溶性葡聚糖亲和-超滤载体对溶菌酶吸附分离特性的研究

亲和-超滤载体决定了亲和-超滤膜分离蛋白质的效率。以溶菌酶为对象,探讨了pH、离子浓度、反应时间等操作条件对葡聚糖亲和-超滤载体吸附溶菌酶的影响,随pH增加,亲和-超滤载体对溶菌酶的吸附量呈增长趋势,而随着离子浓度的增加,其吸附作用受到了抑制,此外亲和-超滤载体与溶菌酶的吸附能够在短时间内达到吸附平衡。应用Langmuir方程拟合了等温条件下亲和-超滤载体对溶菌酶的吸附曲线,得到最大理论吸附量为13.65mg/g,解离常数为3.019mg/mL。用醋酸缓冲溶液对载体进行洗脱,测得溶菌酶的平均洗脱率为91.74%。

亲和-超滤载体对His标记重组AxCeSD吸附特性的研究

采用金属螯合亲和层析技术纯化了N-末端组氨酸(His)标记的重组蛋白Ax Ce SD。以2000 ku的水溶性葡聚糖Dextran T2000为基质,亚氨基二乙酸(IDA)作为螯合剂,Cu2+做亲和配基制备了能特异性吸附重组蛋白His标记的水溶性葡聚糖亲和-超滤载体,并探讨了p H、离子浓度、吸附时间以及温度等因素对水溶性葡聚糖亲和-超滤载体吸附重组蛋白Ax Ce SD的影响。结果表明,在一定范围内,随着p H和温度的升高亲和-超滤载体对Ax Ce SD吸附量增加,而随着离子浓度的增加其对Ax Ce SD吸附量减少;亲和-超滤载体对Ax Ce SD的吸附在30 min内能够达到平衡。应用Langmuir方程拟合了等温条件下亲和-超滤载体对Ax Ce SD的吸附曲线,得到最大理论吸附量为125.15 mg/g,解离常数为3.259×10-6 mol/L,说明亲和-超滤载体对His标记的重组Ax Ce SD的吸附为以螯合作用为主的特异性吸附。