疏水-亲水型硅胶固定化葡萄糖氧化酶的研究

目的 评价疏水 亲水型硅胶作为载体固定化葡萄糖氧化酶的性能 ,以期制备出能用于临床体液中葡萄糖浓度测定的生物传感器。方法 以甲基三甲氧基硅 (MTMOS)和γ 氨丙基三甲氧基硅烷 (APTMOS)为原料 ,利用溶胶 凝胶技术制成了一种疏水 亲水型硅胶 ,以 1 乙基 3 (3 二甲基氨丙基 ) 碳二亚胺·盐酸 (EDC)和N 羟基琥珀酰亚胺(NHS)为催化剂 ,利用葡萄糖氧化酶 (GOD)分子中的羧基基团与硅胶中氨基基团间的碳二亚胺偶联反应 ,实现了GOD在硅胶上的固定化 ,考察了固定化GOD的基本性质。结果 固定化GOD活力最优时的条件如下 :APTMOS的体积分数为 70 %、给酶量为 16 80 0U、最适温度和最适pH值分别为 35℃和 5 .5 ,固定化GOD具有很好的操作稳定性和贮存稳定性 ,其米氏常数Km为 9.1mmol·L-1。结论 疏水 亲水型硅胶是一种新型的酶固定化载体 ,可用于多种酶的固定化。

酶工程近年来的进展——兼谈在氨基酸生产上的应用

酶学是一门古老的学科,近年来分成两部分。理论部分称为分子酶学,而应用方面则逐渐形成了“酶工程”。但严格说来,酶工程也不是什么新鲜事物,例如作为酶工程一部分的酿造工业自古以来各个国家都有。只不过“酶工程”这个名词在近年来才正式使用而已。在正式讨论酶工程以前,首先对“生物工程”的概念是什么应有所了解。

集成化蛋白质组定量分析平台的构建及应用

为提高蛋白质组定量分析的准确度、通量和自动化程度,构建了由微升级混合离子交换色谱、亲水型固定化酶反应器(hIMER)和纳升级反相色谱-电喷雾串级质谱(nanoRPLC-ESI-MS/MS)组成的集成化蛋白质定量分析平台。该平台实现了二甲基化标记蛋白质样品在线分离、酶解、肽段分离鉴定和定量分析。采用质量比为1∶1的轻、重标记的蛋白质样品考察该平台的定量性能,发现蛋白质水平二甲基化标记效率为90%;蛋白质经hIMER在线酶解10 min产生的漏切及酶解产物在hIMER柱上的非特异性吸附对定量准确度的影响较小,所有定量到的重/轻标记的蛋白质质量比的平均值为1.01。最后将该平台应用于小鼠腹水型肝癌淋巴道高、低转移细胞系差异蛋白质的分析,发现了12种蛋白质在高转移细胞系中低表达,15种蛋白质在高转移细胞系中高表达。以上结果证明了该平台可以实现高准确度和高通量的蛋白质组定量分析。