白僵菌亲环素蛋白基因BbCPLA的克隆与分析

亲环素几乎存在于所有的生命体中,并存在于细胞液和各个细胞器中,具有分布广泛性及结构的高度保守性等特点,在细胞的生命活动中起着重要的作用。球孢白僵菌是最常见的昆虫病原真菌之一,已成功应用于玉米螟和松毛虫等害虫的生物防治。本研究首次从玉米螟虫生真菌球孢白僵菌中分离到一个亲环素蛋白基因BbC-PLA,该基因片段长度为606 bp,基因序列与来源于小菜蛾虫生真菌白僵菌的亲环素白蛋白基因A对应编码序列(AF542516)同源性为99.8%;该基因的编码区为495 bp,编码了一个由164个氨基酸组成的蛋白,与蛋白数据库中同源蛋白(AAN39296)的最高同源性为99.4%。

蛋白亲环素D基因功能研究进展

蛋白亲环素D(CypD)是细胞器内线粒体的一个重要组成原件,定位于线粒体通透性转换孔。线粒体是细胞的发动机,在能量产生、钙离子(Ca 2+ )内稳态平衡以及细胞死亡、增殖等方面发挥重要作用。CypD是目前线粒体功能研究领域最重要的基因,一直是研究的热点。CypD基因与器官缺血再灌注损伤、氧化应激及肿瘤等病理生理过程密切相关,并干预细胞凋亡及坏死等细胞死亡过程。目前关于CypD在上述过程中的具体机制及潜在的临床治疗作用尚不完全明确,需进一步探明。

蛋白亲环素D在索拉非尼治疗肾透明细胞癌中的作用

目的探讨蛋白亲环素D（CypD）与肾透明细胞癌（ccRCC）的发生、发展的关系，同时探讨CypD在索拉非尼治疗CCRCC中的作用及机制。方法取人CCRCC标本53例和癌旁组织标本34例，应用免疫组织化学法比较其CypD蛋白表达差异；采用反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）及Westernblot法比较人正常肾小管上皮细胞株HK-2、人肾癌细胞株A498、人ccRCC细胞株786—O中mRNA和蛋白表达的差异；用索拉非尼作用于786—0细胞株，观察索拉非尼对CypD基因表达的影响。结果在癌旁组织标本中CypD免疫反应评分为（7．1±0．2）分，显著高于ccRCC标本评分[（1．6±0．4）分，P〈0．01]；A498及786-0细胞株中mRNA和蛋白表达较HK-2细胞株分别下降了75％和69％（mRNA）；77％和65％（蛋白），差异有统计学意义（P〈0．01）；50μmol／L索拉非尼24h能上调786．0细胞株中CypD基因蛋白的表达的63％。结论CypD与ccRCC的发生、发展呈负相关。

蛋白亲环素D特异性小干扰RNA对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨蛋白亲环素D(CypD)特异性小干扰RNA对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:构建CypD特异性小干扰RNA表达质粒RNAi-Ready pSIREN Ppif,用脂质体转染肾小管上皮细胞(NRK),然后采用逆转录聚合酶链反应检测转染后CypD mRNA的表达,采用MTT法检测转染后NRK细胞的增值情况,流式细胞术检测转染后对NRK细胞调亡的影响。结果:转染RNAi-Ready pSIREN-Ppif载体后,NRK细胞增值加速,凋亡被抑制,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:CypD特异性siRNA表达载体可以下调NRK细胞CypD的表达,促进细胞增值,抑制细胞凋亡。

SARS-CoV-2靶向CypA/CD147受体途径诱导心肌细胞凋亡

目的探究SARS-CoV-2靶向亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147)受体途径诱导心肌细胞凋亡的可能机制。方法构建pEncmv-SARS-CoV-2 S-3xflag重组载体质粒转染H9c2细胞,TUNEL实验、流式细胞术和DNA ladder分析细胞凋亡,免疫共沉淀(CoIP)验证CD147与SARS-CoV-2 S蛋白之间相互作用,Western blotting法检测细胞凋亡信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TUNEL实验和流式细胞术结果显示转染组细胞凋亡显著增加(P<0.05),DNA ladder分析发现DNA降解明显。Western blotting法检测显示Caspase12、DR3表达显著升高(P<0.001),FAS表达升高(P<0.01),TRF1、DR4表达降低(P<0.01)。结论SARS-CoV-2 S蛋白靶向CypA/CD147受体入侵宿主细胞,激活内质网通路(Caspase12)和死亡受体通路(DR3、FAS),以内源性和外源性凋亡途径诱导心肌细胞凋亡。

青杄CYP1基因的克隆与表达

以青杄(Picea wilsonii)的c DNA文库为模板,根据青杄基因Pw CYP1的EST序列设计引物,通过RACE-PCR方法获取Pw CYP1的全长c DNA序列。生物信息学分析表明:Pw CYP1全长c DNA为962 bp,编码框为516 bp组成,编码一个171氨基酸的多肽,Protparam工具预测蛋白的分子量约为17.98 k Da,理论等点为8.34。组织特异性试验表明,Pw CYP1在青杄花粉中的表达量最高,种子中最少。花粉萌发试验显示,Pw CYP1在青杄花粉萌发中表达量先下降,在后期表达量重新上调。在青杄种子萌发试验中,Pw CYP1表达量先下降,在第4天达到最低值后表达量被上调。同时,Pw CYP1受脱落酸(abscisic acid,ABA)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)、赤霉素(Gibberellin,GA)、干旱和盐胁迫的诱导且表达量上调,这些结果显示Pw CYP1参与了发育及多种逆境胁迫和对激素的响应过程。

苦蝶子注射液联合氯吡格雷治疗急性脑梗死的临床研究

目的探讨苦蝶子注射液联合氯吡格雷治疗急性脑梗死的临床疗效。方法选取2017年4月—2018年4月在郑州市第六人民医院治疗的急性脑梗死患者190例,根据用药的不同分为对照组(95例)和治疗组(95例)。对照组口服硫酸氢氯吡格雷片,50 mg/次,1次/d;治疗组在对照组基础上静脉滴注苦蝶子注射液,40 mL加入5%葡萄糖注射液250 mL,1次/d。两组患者均治疗2周。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者NIHSS、m RS和SF-36评分及血清学指标和脑血流动力学。结果治疗后,对照组和治疗组临床有效率分别为82.11%和97.89%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组NIHSS评分和m RS评分显著降低(P<0.05),SF-36评分升高(P<0.05),且治疗组NIHSS、m RS和SF-36评分明显好于对照组(P<0.05)。治疗后,两组血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(s TRAIL)、嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血小板激活因子(PAF)、血红素氧合酶1(HO1)水平均显著降低(P<0.05),且治疗组上述血清学指标明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组相对平均血流量(Qmean)和平均血流速度(Vmean)水平明显升高(P<0.05),动态阻力(DR)、特性阻抗(ZCV)和脑血管周围阻力(R)明显降低(P<0.05),且治疗组上述脑血流动力学指标明显优于对照组(P<0.05)。结论苦蝶子注射液联合硫酸氢氯吡格雷片治疗急性脑梗死可有效促进神经功能恢复,及改善日常活动能力,具有一定的临床推广应用价值。

微小隐孢子虫CRIP基因克隆与分析

目的比对分析微小隐孢子虫南京(NJ)株亲环素-RNA相互作用蛋白(CRIP)与其他隐孢子虫株CRIP基因序列的差异。方法根据GenBank微小隐孢子虫IowaⅡ株CRIP基因序列设计并合成2对引物,应用巢式聚合酶链反应(PCR)技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增CRIP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将重组质粒pMD18-T-CpCRIP进行PCR和双酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他种属的CRIP基因序列同源性。结果巢式PCR扩增获得的特异性CRIP基因序列,经PCR及双酶切鉴定确为pMD18-T-CpCRIP重组质粒;测序结果显示,该序列有119 bp,微小隐孢子虫NJ株CRIP基因全长为909bp,编码302个氨基酸;测序结果和同源性分析显示,中国微小隐孢子虫NJ株CRIP基因序列与国外的微小隐孢子虫Iowa II株同源性为98%;该隐孢子虫NJ株CRIP基因序列获GenBank登录号JQ396883。结论微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他微小隐孢子虫株存在基因变异。