外周血亲环素B、胃泌素释放肽前体、维生素D结合蛋白在胃癌根治术病人中的表达及对术后复发的影响

目的探究外周血亲环素B(CypB)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)、维生素D结合蛋白(VDBP)在胃癌根治术病人中的表达及对术后复发的影响。方法选取2014年1月至2016年10月平顶山市第一人民医院收治的94例胃癌病人作为研究对象,均行胃癌根治术,并随访2年或至复发止。根据术后2年内是否复发分为复发组(40例)、未复发组(54例)。比较两组临床病理特征、术前、术后1个月、术后2年或复发时血清CypB、ProGRP、VDBP水平,分析胃癌根治术后复发的影响因素及血清各指标对术后复发的诊断价值。并采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果两组淋巴结转移、TNM分期、分化程度、浸润深度差异有统计学意义(P<0.05);术后1个月两组血清CypB、ProGRP水平低于术前,VDBP水平高于术前(P<0.05),组间对比差异无统计学意义(P>0.05);复发组复发时血清CypB、ProGRP高于未复发组,VDBP水平低于未复发组(P<0.05);TNM分期、浸润深度、血清CypB、ProGRP、VDBP是胃癌根治术后复发的重要影响因素(P<0.05);各血清指标中,CypB诊断胃癌根治术后复发的AUC最大,为0.772。CypB、ProGRP、VDBP等三指标联合应用的诊断价值更高,其灵敏度和特异度分别为92.50%(37/40)、90.74%(49/54)。血清CypB、ProGRP、VDBP低表达组、高表达组生存曲线对比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌根治术后复发受多种因素影响,其中血清CypB、ProGRP、VDBP的异常表达与术后复发密切相关,在复发诊断方面具有较高应用价值,且能作为评估复发病人生存率的重要指标。

原发性肝癌患者亲环素B特异性T细胞反应研究

目的探讨亲环素B（CypB）特异性T细胞反应强度变化在原发性肝癌患者中意义。方法以北京佑安医院收治的107例HBV相关肝病患者为研究对象，分为慢性肝炎组（49例）、肝硬化组（22例）及肝癌组（36例）。采集患者外周血并分离外周血单个核细胞。采用体外合成CypB全序列多肽技术，运用ELISPOT方法分析107例患者外周血单个核细胞对CypB合成肽的细胞反应情况。结果慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者CypB特异性T细胞反应强度分别为0[0—0]SFU／10^9PBMCs、0[0～0]SFU／10^9PBMCs及20[0—60]SFU／10^6PBMCs，3组比较差异有统计学意义（P=0．0210）；3组反应频率分别为18．4％（9／49）、18．2％（4／22）及47．2％（17／36），差异有统计学意义（P=0．071）。CypB90～208氨基酸肽段诱导的T细胞反应强度高于1～107氨基酸肽段[（34．3±5．3）SFU／10^6 PBMCsVS．（70．0±11．0）SFU／10^6PBMCs]，差异有统计学意义（t=2．922，P=0．0064）。生存分析显示，CypB特异性T细胞反应阴性组肿瘤复发率明显高于CypB特异性T细胞反应阳性组（P=0．0492）。结论肝癌患者外周血中存在CypB特异性T细胞反应，可能成为肝癌预警标志物和未来肝癌免疫治疗的新靶点。

重组日本血吸虫亲环素B的克隆、表达及免疫分析

目的克隆、表达日本血吸虫亲环素B(SjCyPB)基因,鉴定并分析重组蛋白的免疫性。方法根据Genbank中日本血吸虫序列设计一对特异性引物,以日本血吸虫cDNA为模板扩增SjCyPB基因,酶切后连接到表达载体pET28,构建pET28a(+)-SjCyPB重组质粒,转化入感受态大肠杆菌BL21/DE3后对质粒进行双酶切和测序鉴定。IPTG诱导表达后,经亲和层析纯化重组蛋白。采用Western Blotting分析鉴定重组蛋白的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫大鼠,获得免疫血清,ELISA检测抗SjCyPB特异性抗体滴度。结果构建的pET28a(+)-SjCyPB重组质粒经双酶切和测序鉴定证实SjCyPB基因成功连接到pET28a(+)质粒中。经原核表达后获得纯化的重组蛋白,Western Blotting结果显示,该重组蛋白可与感染日本血吸虫的兔血清结合形成明显的条带。采用ELISA检测重组蛋白免疫后大鼠免疫血清的特异性IgG抗体滴度为1∶51 200。结论成功克隆了日本血吸虫CyPB基因,并获得大量纯化的重组蛋白,重组SjCyPB具有免疫原性和抗原性。

亲环素B在胃癌肿瘤组织和血清中表达的意义

目的检测亲环素B(cyclophilin B,Cyp B)在胃癌肿瘤组织与血清中的表达情况,并对其临床意义进行探讨。方法将收治的80例胃癌手术患者作为研究组,均有术后病理确诊,取肿瘤组织及距肿瘤边缘5 cm以上的胃黏膜组织制备石蜡切片,行免疫组化染色,检测肿瘤组织与癌旁组织中Cyp B的表达情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测研究组患者术前1 d、术后1个月时血清中Cyp B、CEA、白介素17(IL-17)的含量。同时选取健康体检者50例作为对照组,取血清进行上述指标的检测。收集患者的临床病理资料,按UICC(2010年第7版)的TNM分期记录患者的肿瘤分期。结果患者肿瘤组织中Cyp B表达的阳性率明显高于癌旁胃黏膜组织(P<0.05)。患者中Ⅰ期11例、Ⅱ期21例、Ⅲ期42例、Ⅳ期6例。肿瘤组织中Cyp B表达的阳性率在Ⅰ~Ⅲ期中依次升高(均P<0.05),但Ⅳ期Cyp B表达的阳性率与Ⅲ期无明显差异(P>0.05)。胃癌患者术前血清Cyp B的浓度均高于正常对照组(均P<0.05)。分期Ⅰ~Ⅳ期患者血清Cyp B浓度依次升高,Ⅳ期者最高,Ⅰ期者最低(均P<0.05);术后1个月外周血Cyp B水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。术后Ⅰ~Ⅳ期患者血清Cyp B浓度与相应分期术前相比水平明显下降(P<0.05)。研究组术前血清中CEA、IL-17的水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);手术后胃癌患者血清中CEA、白介素的水平与术前相比均有明显变化(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。胃癌患者肿瘤组织与手术前血清Cyp B水平有明显相关性(P<0.05)。术前血清Cyp B水平与CEA、IL-17均存在相关关系(均P<0.05)。结论在胃癌患者血清及肿瘤组织Cyp B表达增高,检测胃癌患者Cyp B水平对病情评估有重要价值。

球形孢子丝菌亲环素B的功能和定位研究

目的研究球形孢子丝菌亲环素B(CypB)的抗原性、免疫原性以及亚细胞定位。方法通过生物信息学方法从球形孢子丝菌基因组数据库中鉴定出CypB基因(Sg.CypB)及其蛋白(Sg.CypB)。通过原核表达的方法表达出重组Sg.CypB(r Sg.CypB)。将纯化的重组蛋白免疫SD大鼠获得抗r Sg.CypB抗体,用ELISA法检测获得的抗体滴度。用获得的抗体对球形孢子丝菌行免疫荧光染色,观察Sg.CypB在球形孢子丝菌上的分布。结果Sg.CypB基因长930 bp,编码的Sg.CypB含有309个氨基酸。预测Sg.CypB具有分泌信号肽和C端跨膜序列,蛋白主体部位位于细胞外,具有典型的肽基脯氨酸顺反异构酶(PPIase)活性,且能检测出原核表达的r Sg.CypB具有PPIase活性。利用大鼠产生的抗r Sg.CypB抗体(滴度达到1∶51200,P<0.05),免疫荧光检测到Sg.CypB位于球形孢子丝菌表面。结论Sg.CypB是位于球形孢子丝菌表面的具有PPIase活性的抗原分子,可能在真菌-宿主相互作用中发挥作用。

银屑病患者CD147、亲环素A和亲环素B表达

目的探讨CD147、亲环素A和亲环素B存银屑病发病机制中的作用。方法用RT-PCR半定量检测40例寻常性银屑病、15例脓疱性银屑病患者和20例正常人外周血T细胞和中性粒细胞中CD147、亲环素A和亲环素B mRNA的表达水平。结果在T细胞中,寻常性银屑病组CD147、亲环素A和亲环素B mRNA表达水平分别为1．231±0．128、1．254±0．096和1．667±0．166,显著高于正常人对照组(分别为0．983±0．105、1．084±0．070和1．386±0．152,P值均＜0．01),且患者组三者表达水平均与其相应的PASI积分呈正相关(r值分别为0．544、0．643和0．668,P值均＜0．01)；脓疱性银屑病组三者表达水平分别为1．418±0．117、1．760±0．160和1．959±0．156,显著高于寻常性组(P值均＜0．01)。寻常性银屑病组中性粒细胞CD147 mRNA表达水平(2．118±0．278)显著高于正常人对照组(1．393±0．144,P＜0．01),且与其相应的PASI积分呈正相关(r值为0．618,P＜0．01)；脓疱性银屑病组中性粒细胞CD147的表达水平(3．072±0．371)显著高于寻常性银屑病组(P＜0．01)。寻常性银屑病组亲环素A和亲环素B mRNA表达水平分别为1．127±0．086和1．081±0．124,与正常人对照组比较差异无统计学意义(P值均＞0．05)；并与其相应的PASI积分无线性相关关系(r值分别为0．290和0．144,P值均＞0．05)。脓疱性银屑病组二者的表达水平(分别为1．116±0．075和1．096±0．133)与寻常性银倩病组比较差异无统计学意义(P值均＞0．05)。结论CD147、亲环素A和亲环素B可能在银屑病疾病活动和发展过程中起作用。

超声心动图检查联合血清亲环素A与亲环素B 检测在高血压性心脏病诊断中的应用

目的分析超声心动图联合血清亲环素A与亲环素B在高血压性心脏病诊断中的应用。方法选择2016年1月至2018年1月就诊的高血压性心脏病患者100例为观察组,同期高血压但无心脏结构性损害者100例作为对照组,对受试者行超声心动图检查,并检测血清中亲环素A与亲环素B水平,采用Logistic回归分析超声心动图、亲环素A与亲环素B联合诊断的价值。结果观察组舒张早期与晚期血流速度峰值比值(E/A)及二尖瓣血流舒张早期左心室充盈峰速(VE)水平分别为0.96±0.24和(0.53±0.12)m/s,低于对照组1.43±0.21和(0.68±0.13)m/s,左心室舒张晚峰值流速(VA)和亲环素A及亲环素B水平分别为(0.66±0.11)m/s、(11.98±2.13)和(198.61±28.19)ng/L,高于对照组(0.49±0.09)m/s、(7.49±1.04)和(139.03±31.25)ng/L(均P<0.05)。超声心动图、亲环素A与亲环素B联合诊断高血压性心脏病的敏感度、特异度及受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为94.0%、90.0%和0.987,均显著高于各指标单独诊断的结果。结论采用超声心动图联合血清亲环素A与亲环素B检测对高血压性心脏病进行诊断可有效提高诊断的敏感度和特异度。

结直肠癌组织CypB表达及其对癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察伴或不伴淋巴结转移的结直肠癌组织中亲环素B(CypB)的表达变化,研究CypB质粒敲除对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织芯片中59例结直肠癌组织CypB表达,其中31例无淋巴结转移,28例伴淋巴结转移。构建CvpB的RNA干扰质粒,测序鉴定后转染结直肠癌细胞系SW1116(SW1116-siCypB),设立阴性对照(SW1116-NC);Western blotting分析CypB敲除效果。分别采用划痕实验和细胞侵袭实验评估和检测CypB敲除对SW1116细胞迁移和侵袭能力的影响。结果伴淋巴结转移结直肠癌组织中CypB表达显著高于无淋巴结转移结直肠癌组织(P<0.01)。与SW1116-NC比较,SW1116-siCypB的CypB表达明显减少,细胞迁移和细胞侵袭能力均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论CypB在结直肠癌淋巴结转移过程中具有重要作用,有望成为防治结直肠癌淋巴结转移的分子靶点。

早期胃癌病人血清CypB改变及其辅助诊断价值

目的:探讨血清亲环素B(CypB)在早期胃癌病人中的改变及辅助诊断价值,以期为早期胃癌的临床诊疗提供参考。方法:纳入49例早期胃癌病人为观察组。另纳入同期健康体检者45名作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测2组外周血血清CypB、癌胚抗原(CEA)及糖类抗原-199(CA-199)水平,并分析各指标在早期胃癌病人中的诊断价值,以及早期胃癌病人外周血CypB水平与CEA及CA-199的相关性。结果:观察组病人外周血血清CypB、CEA及CA-199水平均明显高于对照组(P<0.01);观察组病人外周血血清CypB水平与CEA及CA-199均呈明显正相关关系(P<0.05);ROC曲线分析显示,以4.030ng/mL为截点值,CypB诊断早期胃癌的敏感性为76.36%,特异性为75.51%,曲线下面积为0.766,诊断效能优于CEA及CA-199。结论:早期胃癌病人外周血血清CypB水平升高,对辅助诊断具有一定价值。

CypB在消化道肿瘤中的研究进展

亲环素蛋白是具有肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIASE)、高度保守的蛋白质,参与蛋白折叠、免疫抑制、病毒感染、细胞内信号转导等一系列生物学功能,其中亲环素B(CypB)在多种肿瘤中,尤其是胃癌、胰腺癌、肝癌等消化道肿瘤中高表达,受到国内外研究者的高度关注。现就亲环素B(CypB)在消化道肿瘤研究进展做一综述。

CypB在4NQO诱导SD大鼠颊黏膜癌变过程中的表达研究

目的:研究亲环素B(CypB)在正常颊黏膜及诱导口腔鳞状细胞癌变各阶段组织的表达情况。方法:收集本课题组前期实验4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)引发SD大鼠口腔癌变中冻存的多种部位不同阶段的组织标本,HE染色确立组织的病理分级,免疫组织化学染色法检测CypB的表达情况,实时荧光定量PCR法、Western blot法检测、分析CypB在正常颊黏膜及诱导口腔鳞状细胞癌变各阶段组织基因转录水平、蛋白水平表达的改变。结果:CypB在颊鳞状细胞癌组织中表达最高,在正常组织中表达最低(P<0.05)。随着病变的进展,CypB在基因转录水平和蛋白水平相对表达均为逐渐上调的趋势(P<0.05)。结论:CypB与口腔鳞状细胞癌的发生、发展过程紧密相关。