不同药用辅料对人α防御素5抗菌活性影响的单因素实验研究

目的探索单种药用辅料不同浓度条件下对人α防御素5(HD5)抗菌活性的影响,为后期新药制剂配方的研制提供实验依据。方法采用抗菌实验平板计数法,分析不同浓度HD5的抗菌活性,然后选择不同浓度甘油、蔗糖、NaCl、吐温80、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、尼泊金甲酯钠作为候选辅料,以含有各浓度不同辅料添加HD5多肽作为实验组,以各浓度辅料的未添加HD5作为对照组,其中将未添加HD5和辅料的对照组称为空白对照组。计数平板菌落数,以抑菌率作为响应值,从而选择适宜的辅料种类和浓度范围。结果与单纯HD5多肽相比,分别单独加入浓度大于0.29%的NaCl和10%以上的(HP-β-CD),HD5的抑菌率明显下降(P<0.05),而单独加入设定浓度的甘油、蔗糖、吐温80、HP-β-CD和尼泊金甲酯钠均不会显著影响HD5的抑菌率,但是由于较高浓度的甘油、吐温80和尼泊金甲酯钠本身具有显著抑菌活性,所以在较高浓度时无法判断它们是否影响了HD5的抗菌活性,因此在选取浓度时要注意区分抑菌活性的主次关系。分别单独加入浓度低于10%的甘油、12%的蔗糖、0.5%的吐温80、5%的HP-β-CD和0.5%的尼泊金甲酯钠均不会显著影响HD5的抗菌活性。结论在一定浓度范围内,甘油、蔗糖、吐温80、HP-β-CD和尼泊金甲酯钠不会影响HD5的抗菌活性,可作为HD5的备选辅料。

不同构型人α防御素-5多肽抗HSV-2感染的实验研究

目的探讨不同构型人α防御素-5(HD-5)多肽对单纯疱疹Ⅱ型病毒(HSV-2)感染的抑制作用,分析不同构型HD-5抗HSV-2活性的差异。方法 HSV-2病毒感染体外培养的绿猴肾细胞(Vero细胞),分别给予100μg/mL的HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/A肽处理,72h后观察细胞病变效应(CPE),并通过CCK-8法测定细胞保护率;建立HSV-2感染豚鼠生殖器实验动物模型,按照症状评分方法对不同构型HD-5多肽的体内抗HSV-2病毒感染作用进行分析。结果 HD-5/N与HD-5/Acm均能显著抑制HSV-2感染体外培养的Vero细胞(P<0.01),而HD-5/A的抗病毒作用不明显;阴道内给予HD-5/N多肽12.5μg.kg-1.d-1治疗8d能显著改善HSV-2感染豚鼠的生存状况,提高动物30d存活率(P<0.01),外阴感染症状评分显著降低(P<0.01),而HD-5/Acm治疗效果并不明显。结论天然结构HD-5多肽(HD-5/N)在体外或豚鼠阴道内应用均可发挥显著抗HSV-2感染的作用,二硫键缺失会显著影响HD-5多肽的体内抗病毒效果。