腺相关病毒介导人α1干扰素基因在淋巴细胞中表达的研究

为了探讨人α1干扰素基因和腺相关病毒重组体pWP8A -hIFNα1在淋巴细胞中表达的情况 ,将pWP8A-hIFNα1以磷酸钙转染法转入淋巴细胞 ,于转染后 2 4小时、48小时、72小时和 1周分别提取细胞总DNA、RNA和蛋白质 ;经PCR、Southernblot,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测该重组体在淋巴细胞中表达人α1干扰素情况。结果显示 ,pWP8A -hIFNα1转染淋巴细胞后 2 4小时检测到细胞内含人α1干扰素mRNA和蛋白质 ,并持续表达 1周以上。

家蚕细胞基因工程人α_1干扰素在离体培养的HL_(60),KB细胞上与其它化疗药物间的相互作用

探讨了离体细胞中家蚕细胞基因工程人α_1干扰素(rhIFN-α_1)与某些肿瘤药物的相互作用。这些药物包括环磷酰胺8.3μg·ml^(-1),盐酸阿霉素0.008μg·ml^(-1)和5-氟尿嘧啶6.2μg·ml^(-1)。现察它们与rhIFN-α_1;在HL_(60)以及KB细胞中的作用。研究发现rhIFN-α_1;以及3个化学药物单独使用能明显降低细胞的增殖数目及活细胞数(P<0.01),但是,它们相互合用不表现为协同作用,而表现为亚相加或相加作用,甚至在HL_(60)细胞中,150IU·ml^(-1)的rhIFN-α_1与5-氟尿嘧啶6.0μg·ml^(-1)合用呈拮抗作用。

腺相关病毒与人α_1干扰素基因重组体的构建

目的 构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素 (hIFNα1 )基因重组体。 方法 用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增获得hIFNα1 基因 ;以T A克隆方法将PCR扩增hIFNα1 基因亚克隆到PCR2 1质粒中 ,产生PCR2 1-hIFNα1 ;用EcoRI酶切PCR2 1-hIFNα1 后回收hIFNα1 基因片断 ,将此片断连接到pWP8A的EcoRI位点上 ,构建重组体pWP8A-hIFNα1 ;pWP8A -hIFNα1 转化JM10 9大肠杆菌扩增 ,hIFNα1 基因经测序鉴定符合Genebank中hIFNα1 序列 ,并用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向。 结果 经PCR扩增获得 5 67bphIFNα1 基因 ;构建重组体pWP8A -hIFNα1 ,经测序证实pWP8A -hIFNα1 中的hIFNα1 与Genebank中hIFNα1 序列相同 ,用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向正确的重组体pWP8A -hIFNα1 。 结论 成功构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素(hIFNα1 )基因的重组体。

在大肠杆菌中提高人α1b型基因工程干扰素的表达

将人α１ｂ型干扰素（ＩＦＮα１ｂ）基因插入带有原核增强子样序列的新型载体ｐＢＶ３２２，使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体，达到１６×１０８ｕ／Ｌ培养液。重组质粒的特点是：含增强子序列Ｘ，ｔｒｐ启动子控制。利用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ、ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析及单克隆抗体亲和层析纯化ＩＦＮα１ｂ，获得了电泳纯产品，其比活性为２×１０７ｕ／ｍｇ，分子量为１９ｋＤａ。此外，用ｐＡＴ１５３代替ｐＢＶ３２２，构建了带有和不带有Ｘ序列的两种表达载体。

重组人α1b干扰素软膏抗豚鼠皮肤单纯疱疹病毒Ⅰ型感染实验研究

IFN是国内外公认的抗病毒作用机理及疗效都较明确的生物制剂,临床一直用其治疗多种病毒性疾病.

α1b干扰素雾化吸入治疗小儿呼吸道合胞病毒感染的临床观察

目的对小儿呼吸道合胞病毒感染采用重组人α1b干扰素雾化吸入治疗的效果进行探究。方法选取60例小儿呼吸道合胞病毒感染患儿进行研究,且所有患儿为我院在2017年1月到2017年12月之间收治的,按照数字随机抽取原则将患儿分成两组,每组的例数是30例,采用重组人α1b干扰素肌肉注射治疗对照组患儿,采用重组人α1b干扰素雾化吸入治疗观察组患儿,比较治疗后两组患儿的治疗效果。结果对照组患儿的治疗总有效率为90%,显著低于观察组的96. 67%,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论对于小儿呼吸道合胞病毒感染采用重组人α1b干扰素雾化吸入进行治疗有显著的效果,可明显改善和缓解患儿的各种症状,具有非常大的临床价值,适合在日后的临床有关治疗中作为参考和借鉴。