腺相关病毒介导人α1干扰素基因在淋巴细胞中表达的研究

为了探讨人α1干扰素基因和腺相关病毒重组体pWP8A -hIFNα1在淋巴细胞中表达的情况 ,将pWP8A-hIFNα1以磷酸钙转染法转入淋巴细胞 ,于转染后 2 4小时、48小时、72小时和 1周分别提取细胞总DNA、RNA和蛋白质 ;经PCR、Southernblot,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测该重组体在淋巴细胞中表达人α1干扰素情况。结果显示 ,pWP8A -hIFNα1转染淋巴细胞后 2 4小时检测到细胞内含人α1干扰素mRNA和蛋白质 ,并持续表达 1周以上。

腺相关病毒与人α_1干扰素基因重组体的构建

目的 构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素 (hIFNα1 )基因重组体。 方法 用多聚酶链反应 (PCR)方法扩增获得hIFNα1 基因 ;以T A克隆方法将PCR扩增hIFNα1 基因亚克隆到PCR2 1质粒中 ,产生PCR2 1-hIFNα1 ;用EcoRI酶切PCR2 1-hIFNα1 后回收hIFNα1 基因片断 ,将此片断连接到pWP8A的EcoRI位点上 ,构建重组体pWP8A-hIFNα1 ;pWP8A -hIFNα1 转化JM10 9大肠杆菌扩增 ,hIFNα1 基因经测序鉴定符合Genebank中hIFNα1 序列 ,并用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向。 结果 经PCR扩增获得 5 67bphIFNα1 基因 ;构建重组体pWP8A -hIFNα1 ,经测序证实pWP8A -hIFNα1 中的hIFNα1 与Genebank中hIFNα1 序列相同 ,用BamHI酶和XbalI酶双酶切鉴定hIFNα1 基因插入方向正确的重组体pWP8A -hIFNα1 。 结论 成功构建腺相关病毒载体 (pWP8A)与人α1 干扰素(hIFNα1 )基因的重组体。