人β-NGF基因在CHO细胞中表达的生物学活性及分离纯化

目的 :检测人 β NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所表达的 β NGF的生物学活性及分离纯化。 方法 :采用脂质体介导的真核细胞转染 ,运用形态学观察和MTT法进行检测做定性定量分析 ,蛋白观察用SDS PAGE电泳。结果 :转染 β NGF基因的CHO细胞可分泌能促进PC12细胞生长的活性 β NGF ,且可透过血脑屏障。 结论 :转染 β NGF基因的CHO细胞所分泌的 β NGF ,接近自然合成的蛋白 ,具有较高生物学活性 ,为NGF的生物制药奠定了实验基础。

体外培养表达人β-NGF基因的猫角膜内皮细胞

目的:体外培养表达人β-神经生长因子基因(β-nerve growth factor,β-NGF)的工程化猫角膜内皮细胞,为进一步猫角膜内皮细胞的移植做准备。方法:将人β-NGF重组真核表达载体pcDNA4-β-NGF,通过EffecteneTM脂质体介导转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中,选择性培养基筛选转基因后细胞,人NGF单克隆抗体行细胞免疫组织化学染色(immunohistochemistry)。结果:选择性培养基培养2wk后筛选出独立细胞克隆,该细胞高表达人β-NGF基因。结论:转基因方法可体外培养出表达人β-NGF基因的工程化猫角膜内皮细胞。

人β-NGF基因在CHO细胞中表达的活性检测

目的 检测人 β -NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所表达的 β -NGF的生物学活性。 方法 采用脂质体介导的真核细胞转染 ,运用MTT法进行检测分析。结果 转染 β-NGF基因的CHO细胞可分泌能促进PC12细胞生长的活性 β -NGF。 结论 转染 β -NGF基因的CHO细胞所分泌的 β -NGF接近自然合成的蛋白 ,具有较高的生物学活性 ,为NGF的生物制药奠定了实验基础。