米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株的增殖抑制作用

目的 探讨米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株的生长抑制作用。方法 采用MTT测定 ,观察不同浓度米非司酮对HO8910 细胞的生长抑制作用 ,通过免疫组化染色 ,检测用药后细胞核增殖抗原Ki 67表达的变化。结果 3个浓度的米非司酮对上述细胞均有抑制作用 ,以 2 0 μmol/L浓度抑制最明显 ,抑制率达 50 .2 8% ;5μmol/L米非司酮可使HO8910 细胞Ki 67抗原表达显著减少 ,细胞增殖受到明显抑制。结论 米非司酮对人卵巢上皮性癌细胞株具有明显抑制作用 ,且通过降低核增殖抗原Ki

MicroRNA-150对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移能力的影响

目的研究micro RNA-150(mi R-150)在人上皮性卵巢癌细胞中的表达情况,及其对人上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移能力的影响。方法通过荧光实时定量PCR(q RT-PCR)检测各处理组细胞中的mi R-150表达水平;利用MTT法、流式细胞技术、Transwell法探究mi R-150的表达对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响。结果与正常卵巢上皮细胞(T29)相比,上皮性卵巢癌细胞(A2780和OVCAR3)中mi R-150表达显著降低(P<0.01);转染mi R-150mimic后,A2780和OVCAR3细胞中mi R-150水平明显升高(P<0.01);MTT试验显示,转染培养三天后,mi R-150 mimic组细胞OD值(A2780:1.12±0.03;OVCAR3:1.91±0.03)较Blank组(A2780:2.35±0.09;OVCAR3:2.63±0.07)及mi R-150 NC组(A2780:2.18±0.07;OVCAR3:2.43±0.11)明显降低(P<0.01);细胞凋亡检测显示:mi R-150 mimic组凋亡率(A2780:16.10±0.58%;OVCAR3:15.16±1.30%)较Blank组(A2780:10.07±0.66%;OVCAR3:3.81±0.24%)及mi R-150 NC组(A2780:10.36±1.08%;OVCAR3:4.89±0.07%)明显升高(P<0.01);Transwell试验显示:mi R-150 mimic组穿膜细胞数(A2780:38.67±2.03;OVCAR3:28.67±2.03)较Blank组(A2780:76.30±7.45;OVCAR3:55.67±3.18)及mi R-150 NC组(A2780:74.33±5.78;OVCAR3:56.33±3.84)明显减少(P<0.01)。结论 mi R-150在上皮性卵巢癌细胞中表达降低,可能是上皮性卵巢癌增殖、侵袭转移的机制之一;上调mi R-150的表达可以抑制上皮性卵巢癌细胞增殖、促进细胞凋亡,并且降低上皮性卵巢癌细胞侵袭转移能力。

3-甲基腺嘌呤对低氧状态下上皮性卵巢癌细胞自噬、迁移和侵袭的影响

目的·检测3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对低氧状态下上皮性卵巢癌细胞(epithelial ovarian carcinoma,EOC)自噬、迁移和侵袭的影响。方法·不同浓度的3-MA处理低氧环境下EOC细胞,Western blotting检测自噬相关蛋白LC3的表达,透射电子显微镜观察自噬体的生成,噻唑蓝比色法、黏附试验、Transwell迁移试验和Matrigel侵袭试验分别测定EOC细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭能力。结果·3-MA可以抑制低氧环境诱导的LC3-Ⅱ表达增加以及自噬体生成。低氧环境下,5.00 mmol/L的3-MA作用24 h可显著降低EOC细胞存活率(P=0.000);2.50 mmol/L的3-MA作用6 h后,细胞的黏附能力显著降低(P=0.007);1.25 mmol/L和2.50 mmol/L的3-MA均可抑制低氧环境下EOC细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论·3-MA在抑制低氧状态下EOC细胞自噬的同时,具有抗细胞迁移和侵袭的作用。

COX-2在上皮性卵巢肿瘤的表达及塞来昔布对卵巢癌A2780细胞株凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在上皮性卵巢肿瘤的表达及环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)在体外对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响。方法 (1)采用免疫组化SP法检测COX-2在65例上皮性卵巢癌,18例交界性、18例良性上皮性卵巢肿瘤,以及9例正常卵巢组织中的表达。(2)用流式细胞仪测定塞来昔布在体外对A2780细胞凋亡的影响。结果 (1)COX-2在上皮性卵巢癌组(73.8%)及交界性卵巢肿瘤组的表达(66.7%)显著高于良性卵巢肿瘤组(16.7%)及正常卵巢组(11.1%),P均<0.05。(2)流式细胞仪测定结果显示,塞来昔布呈剂量依赖方式诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡(P<0.05)。结论 (1)COX-2在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤中的表达明显增强,COX-2可能在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤的发生发展中起一定作用。(2)体外特异性COX-2抑制剂塞来昔布能够诱导人卵巢癌A2780细胞株凋亡,可能成为上皮性卵巢癌化疗的有效药物。

上皮性卵巢癌细胞增殖状态与肿瘤血管生成关系的研究

目的 探讨上皮性卵巢癌不同分级、不同临床分期细胞增殖状态及肿瘤微血管密度 (MVD)以及两者之间的关系。方法 应用增殖细胞核抗原 (PCNA) ,采用SABC法 ,检测细胞增殖状态并计算细胞增殖指数 (PI)。采用FⅧ相关抗原 ,应用SABC法 ,检测上皮性卵巢癌肿瘤微血管密度。应用Spear man等级相关法检测PI与MVD的相关性。结果 (1) 4 5例上皮性卵巢癌中PI均值为 35 .7± 10 .9,MVD均值为 31.7± 11.2 (40 0倍镜下 )。不同临床分期、组织分级的PI无显著性差异 (P >0 .0 5 )。MVD在不同的卵巢癌临床分期中的差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,临床Ⅲ～Ⅳ期肿瘤MVD高于临床Ⅰ～Ⅱ期 (P <0 .0 5 )。 (2 )上皮性卵巢癌中PI与MVD无明显相关 (P >0 .0 5 )。结论 肿瘤血管生成是上皮性卵巢癌发展的伴随条件 ,随着卵巢癌的进展 ,肿瘤血管生成是增加的。上皮性卵巢癌中细胞增殖状态与肿瘤血管生成无明显相关。肿瘤血管生成的机制与肿瘤细胞增殖的机理可能不同。

卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3培养相关影响因素分析

目的探讨卵巢上皮癌细胞OVCAR-3培养的影响因素,提高培养的成功率。方法按培养条件分为:未滤菌加抗菌素组、滤菌加抗菌素组、滤菌不加抗菌素组及改良复苏组,取对数生长期的细胞裸鼠皮下种植,观察成瘤率并行组织学检查。结果未滤菌加抗菌素组,复苏培养5次,全部失败;滤菌加抗菌素组,复苏培养10次,全部成功;滤菌不加抗菌素组,复苏培养10次,失败4次,成功率60%;改良复苏组:复苏培养10次,全部成功。种植后2周出现瘤体,各组成瘤率100%,各组肿瘤组织学检查未见明显差异。结论无菌操作是OVCAR-3最重要的影响因素,滤菌及加用抗菌素是关键步骤。

RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察

目的构建核糖核苷酸还原酶亚基M2(RRM2)基因过表达的卵巢癌细胞株SKOV3,并观察RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性。方法提取SKOV3细胞总RNA,反转录得到c DNA,以其为模版进行PCR反应,获得RRM2基因。通过酶切(XhoⅠ、Bam HⅠ)连接的方法,将RRM2基因插入慢病毒表达载体p LVX-IRESZs Green1中,得到重组质粒p LVX-IRES-RRM2。利用脂质体将重组质粒转染293FT细胞,包埋病毒。将SKOV3细胞分为实验组和对照组,实验组转染p LVX-IRES-RRM2慢病毒,96 h后测算慢病毒感染效率。对照组不进行转染。采用Western blotting法检测两组细胞中的RRM2蛋白;流式细胞仪检测两组凋亡细胞与死亡细胞,反映细胞对顺铂的敏感性。结果重组质粒p LVX-IRES-RRM2经限制性内切酶XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切验证,各片段大小符合预期,测序结果显示RRM2基因序列正确。实验组、对照组细胞中RRM2 mRNA相对表达量分别为0.280±0.055、0.102±0.022,RRM2蛋白相对表达量分别为0.582±0.049、0.228±0.032,实验组高于对照组,说明RRM2基因过表达的SKOV3细胞构建成功。实验组、对照组凋亡细胞比例分别为0.39%±0.08%、9.60%±1.20%,死亡细胞比例分别为26.65%±2.20%、44.96%±2.80%,实验组凋亡细胞比例和死亡细胞比例均低于对照组(P均<0.01)。结论成功构建了RRM2基因过表达的SKOV3细胞,RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性降低。

人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3-luc裸鼠皮下及原位移植瘤模型的建立与研究

目的:建立整体可视化人卵巢癌皮下和原位移植瘤模型,用于实时观察和分析人卵巢癌移植瘤发展和转移的规律,并比较两者的成瘤情况及生物学特性。方法:使用带有荧光素酶报告基因(Luciferase)的人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3-luc分别接种于裸鼠右侧腋窝皮下和左侧卵巢内,建立人上皮性卵巢癌裸鼠皮下和原位移植瘤模型。实时观察卵巢癌细胞SKOV3-luc在裸鼠皮下和原位的生长情况,并切取肿瘤组织,应用病理组织学方法对裸鼠皮下移植瘤和原位移植瘤进行检测和评价。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3-luc裸鼠皮下和原位移植瘤模型建立的成功率均较高。裸鼠皮下和左侧卵巢接种肿瘤细胞后,可通过活体成像实时观察肿瘤的生长情况,并且行定量分析肿瘤形成时间等。皮下移植瘤(皮下组)成瘤率为100%,左侧卵巢原位移植瘤(原位组)成功率为100%。注射后第7天,皮下组的肿瘤总荧光强度比值为(3.38±2.50)(Fold),原位组为(1.43±1.32)(Fold);第14天,皮下组为(15.73±11.70)(Fold),原位组为(6.44±7.26)(Fold),皮下组第7天和第14天的肿瘤总荧光强度比值均大于原位组(P<0.05)。结论:人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤和卵巢原位移植瘤建模成功率高,并能很好地反应肿瘤的生物学行为,实时荧光成像便于观察肿瘤体内生长情况,为研究卵巢癌发展和转移提供了可靠的观察模型。

Snail蛋白对E-钙黏蛋白表达的抑制在上皮性卵巢癌细胞侵袭及淋巴结转移中的作用

目的:探讨Snail蛋白对E-钙黏蛋白(E-cad)表达的抑制在上皮性卵巢癌细胞侵袭及淋巴结转移中的作用。方法:选择人卵巢癌细胞株C13,将Snail/siRNA、Snail/smRNA分别转入C13细胞,以PBS作为空白对照组,检测E-cad蛋白表达情况,采用Transwell上室进行细胞侵袭性及淋巴结转移实验分析。结果:C13细胞空白对照组、Snail/smRNA组、Snail/siRNA组,12 h穿膜细胞数分别为98.24±7.92、90.93±8.38和21.48±4.85,Snail/siRNA组与另两组相比有显著性差异(P<0.05);Snail/siRNA组的转移细胞与另两组相比也有显著性差异(P<0.05)。相对于Snail/smRNA组,Snail/siRNA组细胞E-cad的蛋白水平降低,两组差异有统计学意义(P<0.05),而空白对照组则没有明显变化(P>0.05)。结论:Snail蛋白对E-cad表达的抑制能抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭及转移,能够在分析卵巢癌转移分子机制时给予理论支持,为靶向逆转的研究提供了可供参考的靶点。

Irisin促进上皮性卵巢癌细胞生长增殖

目的Irisin是近几年新发现的一种与能量代谢、胰岛素抵抗等相关的细胞因子,在人体中广泛表达且与多种肿瘤的病理过程密切相关,本研究旨在明确Irisin对上皮性卵巢癌细胞A2780是否有促增殖作用。方法用不同浓度的Irisin处理细胞A2780,通过CCK-8实验检测细胞生长增殖情况。结果CCK-8实验表明Irisin能促进细胞生长增殖。结论Irisin能诱导卵巢癌细胞生长增殖,进一步促进肿瘤发生发展。

c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响

目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。

全反式维A酸对卵巢上皮性腺癌侵袭潜能的影响

目的:通过观察全反式维A酸(ATRA)对卵巢上皮性腺癌细胞株COC2细胞中上皮性钙黏附素(E-cadherin)、乙酰肝素酶和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的作用,探讨ATRA对卵巢上皮性腺癌侵袭潜能的影响。方法:利用流式细胞仪检测经不同浓度的ATRA干预前后的COC2细胞中E-cadherin、乙酰肝素酶和VEGF的蛋白含量。结果:COC2细胞经ATRA干预后,细胞表面E-cadherin蛋白含量明显增多,细胞内VEGF蛋白以及细胞表面乙酰肝素酶的含量明显降低,呈剂量依赖性。各加药组与对照组比较,差异有统计学意义。结论:ATRA不仅能够增加COC2细胞中E-cadherin蛋白的含量,增强肿瘤细胞间黏附能力;而且能够降低乙酰肝素酶和VEGF蛋白的表达,抑制肿瘤细胞对细胞外基质和基底膜的破坏,并具有抗血管新生作用,从而降低卵巢上皮性腺癌细胞的侵袭转移能力。

FXR1基因过表达对卵巢癌细胞生物学行为影响的初步研究

背景与目的:前期研究显示,FXR1基因是从卵巢上皮癌cDNA文库中筛选到的相关抗原基因,FXR1抗原蛋白的自身抗体可用于早期卵巢癌的诊断。本研究的目的是分析上调上皮性卵巢癌相关抗原基因FXR1表达对卵巢癌细胞系HO8910生物学行为的影响。方法:采用半定量RT-PCR法检测在不同卵巢组织中,FXR1 mRNA的表达,并分析其与临床病理的关系。RT-PCR扩增FXR1 CDS,构建FXR1真核表达载体,脂质体介导下转染HO8910细胞,经G418筛选获得稳定转染株,检测转染后细胞相应生物学行为。结果:FXR1 mRNA在卵巢癌组织中的相对表达水平比卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织均增高(P<0.05);FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期和高分化癌组织中FXR1 mRNA相对表达水平低于Ⅲ期和中-低分化组织(P<0.05);成功构建了FXR1基因的真核表达载体,并稳定转染了HO8910细胞。生长曲线显示上调FXR1基因表达可促进细胞的生长;克隆形成实验显示上调FXR1基因表达可促进细胞增殖。基质黏附实验显示,上调FXR1基因表达可加强细胞对基质的黏附能力,流式细胞周期检测亦发现与对照(80%)相比,转染FXR1基因后G1期细胞(67.1%)比例明显减少,这说明转染FXR1后细胞的增殖更旺盛。同时发现FXR1对细胞侵袭、迁移的能力无明显影响。结论:上调FXR1基因表达可能有促进卵巢癌细胞的生长、增殖、加强细胞对基质黏附能力的作用。

卵巢癌VEGF表达及癌细胞线粒体超微结构的改变

目的:观察卵巢癌血管内皮生长因子(VEGF)表达及癌细胞线粒体超微结构的改变,探讨卵巢癌VEGF表达增强对线粒体的影响及其机制。方法:用免疫组化染色法及电子显微镜技术研究卵巢癌VEGF表达及癌细胞线粒体超微结构的改变及相互关系。结果:免疫组化结果显示,微血管内皮细胞及卵巢上皮细胞VEGF表达呈强阳性。癌变后的卵巢上皮细胞的线粒体数量增多,线粒体明显肿胀、脊断裂明显。结论:卵巢癌线粒体超微结构的改变与VEGF表达有关,其VEGF表达增强可能是癌细胞自我保护机制的反应。

Ets-1与卵巢上皮性肿瘤研究进展

Ets-1为E26禽类红白血病病毒家族成员,通过调节细胞黏附、促进基质蛋白水解和血管生成以及提高肿瘤细胞缺氧耐受等机制参与多种肿瘤的侵袭和转移。在卵巢上皮性肿瘤中Ets-1高表达与癌细胞高侵袭力、活动力及迅速生长等生物学特性有关,并可在转录水平调节基质金属蛋白酶和血管生成促进因子的表达。Ets-1表达水平与卵巢癌患者临床分期、组织学分级和不良预后正相关,阻断Ets-1表达可能为抑制卵巢癌提供新的治疗思路。

应用SELDI-TOF-MS技术筛选不同分型卵巢上皮性癌血清标志物

目的:应用表面增强激光解析离子化—飞行时间—质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛选不同分型的卵巢上皮性癌患者血清标志物。方法:选择卵巢上皮性癌68例,健康妇女87例,卵巢良性肿瘤组20例血清,以及体外培养的卵巢恶性肿瘤细胞系SKOV3、A2780、HO8910、HO8910PM为材料,采用WCX2蛋白质芯片分析血清和体外培养的恶性肿瘤细胞系蛋白质表达差异蛋白,选择卵巢上皮性癌血清与细胞均存在表达的差异蛋白建立卵巢上皮性癌诊断模型进行验证。结果:WCX2芯片捕获的M/Z为5343和5640蛋白质,在卵巢浆液性上皮癌和浆液性上皮癌细胞系HO8910、HO8910PM中均上调表达。以上述2个蛋白质建立诊断模型判别浆液性卵巢癌的敏感性为97.8%,特异性为82.7%,优于CA125的检测结果。结论:M/Z为5343和5640蛋白质在卵巢浆液性上皮癌发生和发展的过程中的变化可以反映到血清中,而且可以验证血清标志蛋白的组织特异性,为其作为卵巢癌的肿瘤标志物提供强有力的支持。

PDGF-C促进体外培养人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的增殖和迁移

目的观察血小板衍生生长因子-C(PDGF-C)对体外培养的卵巢上皮癌细胞系A2780和人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3的影响。方法采用培养的人类上皮性卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,应用CCK8检测法评价细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期;利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力。结果PDGF-C能明显刺激A2780和SKOV3增殖,增加两种细胞S期细胞的比例,对SKOV3的促增殖作用在20μg/L达高峰,A2780的促增殖作用在30μg/L达高峰。同时,PDGF-C促进A2780和SKOV3的迁移能力。结论 PDGF-C可促进培养的A2780和SKOV3的增殖与迁移能力。

肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在顺铂作用下的卵巢癌细胞中表达的变化

目的研究顺铂(cDDP)作用下人卵巢上皮性癌细胞株3AO中肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82的表达的变化,初步探讨其作用机制。方法采用倒置显微镜观察cDDP作用后3AO细胞形态学的变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察cDDP对细胞增殖的影响;运用免疫细胞化学方法检测不同浓度cDDP(1、3、9 mg/L3个浓度组)作用的3AO细胞株中KAI1/CD82表达情况,并与细胞对照组(未经药物处理)进行比较。结果cDDP作用后细胞体积缩小、细胞内颗粒增多,细胞核固缩、深染,细胞凋亡;cDDP对3AO细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖关系;cDDP作用后卵巢癌细胞中KAI1/CD82基因的表达较对照组明显增强。结论cDDP不仅能增加对卵巢癌细胞的生长抑制率,而且能上调卵巢癌细胞中肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82的表达,为临床上药物抑制肿瘤转移的深入研究提供了有利的实验依据。