甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402的体外实验研究

通过体外培养人上皮样肝癌BEL-7402细胞,分别以加入PBS液为对照组,加入5-FU(10μg/mL)为阳性对照,加入甘遂根提取物(浓度分别为0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μg/mL)为实验组,采用台盼蓝染色法、MTT比色法、克隆形成法以及流式细胞仪进行检测分析,以明确甘遂根提取物对BEL-7402细胞的抑制作用.结果显示,几种方法测定的结果一致,甘遂根提取物对BEL-7402细胞的生长抑制率随处理浓度的增高呈上升趋势,其中台盼蓝染色法测定的抑制率分别为71.9%、81.3%、84.4%、86.8%、100%;MTT比色法测定的抑制率分别为50.8%、52.4%、55.6%、57.1%、74.6%;克隆形成实验对克隆形成抑制率分别为44.9%、53.9%、58.1%、79.6%、86.8%.流式细胞仪测定的凋亡率分别为0、24.3%、26.5%、32.9%、100%.实验表明,甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402细胞生长具有显著的抑制作用,而且抑制效果随提取物浓度的增加而递增.

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸I、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁,其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸I、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸I、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱,其次为黄连碱、马兜铃酸I和茄次碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响

研究芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响。方法:采用人肝癌细胞株Bel-7402和细胞药理学方法,对比观察3种措施(阴性无药对照、阳性阿霉素对照及芍药甙)对Bel-7402细胞增殖的影响。结果:芍药甙(2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml)对Bel-7402细胞增殖均有显著性抑制作用(均P<0.01),其抑制率分别为33.78％、22.22％和11.56％,增殖抑制作用随药物浓度增高而加强,呈显著的量效关系。结论:芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖有一定的抑制作用。

生长激素受体在Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株中的表达

目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与RT鄄PCR法检测GHR在Bel鄄7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达。结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR。结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础。

5-FU持续和间歇处理对Bel-7402肝癌细胞株的抑制作用

目的:评价体外5FU持续和间歇处理对Bel7402肝癌细胞株的生长抑制作用。方法:体外培养Bel7402肝癌细胞株,用一系列不同浓度的5FU对Bel7402肝癌细胞株分别进行每天24小时持续处理及2小时间歇处理,4天后进行MTT试验,检测肿瘤细胞的生长抑制率,对两组的IC50进行比较。结果:5FU处理浓度依次10.0μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L、75.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L、500.0μg/L、750.0μg/L、1000.0μg/L、2500.0μg/L、5000.0μg/L、7500.0μg/L、10000.0μg/L、20000.0μg/L持续处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.34%、2.01%、7.21%、10.37%、18.64%、29.96%、35.06%、43.35%、50.66%、87.63%、93.63%、94.46%、99.27%、99.35%,IC50是991.7μg/L。5FU处理浓度依次120.0μg/L、300.0μg/L、600.0μg/L、900.0μg/L、1200.0μg/L、3000.0μg/L、6000.0μg/L、9000.0μg/L、12000.0μg/L、18000.0μg/L、60000.0μg/L、90000.0μg/L、120000.0μg/L、240000.0μg/L2小时间歇处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.32%、1.78%、2.01%、2.89%、3.57%、5.94%、8.30%、10.36%、15.25%、17.27%、25.95%、32.63%、43.66%、67.81%,IC50为146600μg/L,为持续处理组的1478倍。

人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402对放射敏感性的体外实验研究

目的 采用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG 2和BEL -740 2对放射的敏感性。方法 对人肝癌细胞株HepG2和BEL -740 2进行体外培养 ,应用集落形成法和MTT法测定 6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率 ,计算 2株细胞放射敏感性参数 (D0 )。结果 HepG 2的D0 值为 1.5 ,SF2 为 (0 .45± 0 .0 5 ) ;BEL -740 2的D0 值为 1.6,SF2 为 (0 .63± 0 .0 5 )。MTT法与集落形成法相关性较好 (γ =0 .946,P <0 .0 5 )。结论 HepG2具有较高的放射敏感性 ,BEL -740 2的放射敏感性较低 ;MTT法可替代集落形成法作细胞放射敏感性的快速测定。

SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的表达及意义

目的了解生长激素受体(GHR)在SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR法)检测GHR在SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞株的表达情况,使用双脱氧末端终止法进行基因测序。结果SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞均可表达GHRmRNA;在蛋白质表达水平发现GHR在7721肝癌细胞的位点数量(Site,103/cell)为3.462±0.632,平衡解离常数(Kd)为0.52±0.05942nmol/L;7402肝癌细胞位点数量为7.348±0.891,Kd为0.63±0.04583nmol/L。结论由于上述两种肝癌细胞株均可表达GHR,因此可为研究rhGH与肝细胞肝癌的生长关系奠定一定的实验基础。

低浓度5-Fu24-小时持续化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响

目的研究低浓度5-Fu24-小时持续化疗和高浓度5鄄Fu短时间化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响。方法用低浓度(1000.0μg/L)的5-Fu对BEL-7402肝癌细胞株进行持续24小时的培养(A组),用高浓度(50000.0μg/L)的5-Fu对BEL-l7402肝癌细胞株进行2小时培养(B组),在培养后的不同时间点用流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果A组结果显示:0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为25.23%、32.35%、39.28%、41.05%、46.02%、47.00%及47.14%。B组结果显示:0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为24.68%、68.43%、46.67%、43.67%、35.42%、33.22%及32.96%。结论5-Fu引起的S期细胞周期阻滞不但和浓度相关,也和作用时间相关。低浓度(1000.0μg/L)的5-Fu持续化疗较高浓度(50000.0μg/L)的5-Fu短时间(2小时)化疗更容易引起BEL-7402肝癌细胞株S期阻滞。

四种蛛毒抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖作用的实验研究

近年来,在动物毒素的抗肿瘤作用研究中,以蛇毒[1]、蜂毒[2]居多,未见蜘蛛蛛毒对肿瘤细胞作用的报道.本研究目的是从海南捕鸟蛛、虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛、雷氏大疣蛛四种蜘蛛毒素中筛选出抗人肝癌细胞株BEL-7402作用强的一种,并探讨其量效及时效关系,以便进行更深入的研究.

人肝癌多药耐药细胞株survivin蛋白的表达及意义

目的 探讨人肝癌多药耐药细胞株survivin蛋白表达与肝癌细胞多药耐药的关系。方法 用阿霉素(DOX)浓度梯度递增诱导法,建立人肝癌多药耐药细胞株(Bel- 74 0 2 / DOX)。用流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率,同时用蛋白印迹(Western blot)检测其survivin蛋白表达。结果 随着培养液中DOX浓度的增加,Bel- 74 0 2 /DOX的凋亡率逐渐增加,survivin蛋白的表达逐渐增强。结论 Survivin蛋白的表达变化可能与人肝癌细胞获得性耐药有关。

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人肝癌细胞株乙酰肝素酶表达的影响

目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)反义寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞株Hpa mRNA和蛋白表达的影响。方法:设计合成互补于Hpa mRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS-ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS-ODN,以阳离子脂质体Oligofectamine^(TM) Reagent包埋后转染SMMC-7721、BEL-7402细胞,以RT-PCR和Western-blot检测转染前后细胞Hpa mRNA以及蛋白表达的变化。结果:与正常对照组和NS-ODN相应浓度组相比,转染AS-ODN组肝癌细胞Hp amRNA和蛋白的表达均下降。结论:Hpa反义寡脱氧核苷酸下调Hpa mRNA和蛋白的表达,可能抑制肝癌的侵袭转移。

人血树突状细胞联合LPAK细胞体外诱导肝癌细胞株凋亡的形态学观察<英文>

研究人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)联合LPAK(lymphokine and PHA activatedkiller)细胞体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的作用,并进行形态学分析。实验分LD(BEL-7402+LPAK+DC),L(BEL-7402+LPAK),D(BEL-7402+DC)和 B(BEL-7402)四组,采用中性红摄入比色法检测细胞毒活性,原位末端标记(TUNEL)技术、电镜技术观察细胞的光镜形态和超微结构。结果显示,D组与B组比较吸光度值无显著性差异(P>0.05),即无杀伤活性;LD组与L组比较,细胞毒活性为LD组>L组(P<0.01)。光镜下凋亡的肿瘤细胞呈TUNEL阳性,细胞核染成棕黄色或深棕色,大小不等,形态也不一;电镜下肿瘤细胞核染色质凝聚、固缩和胞质浓缩,凋亡小体多见;少部分LPAK细胞内形成自噬体,发生自噬性凋亡。结论提示,人血DC联合LPAK细胞能有效地诱导肝癌细胞凋亡,在此过程中LPAK细胞同时发生自噬性凋亡。

半边旗二萜类化合物5F下调BEL-7402细胞中PIK3CA和AKT的表达

目的：研究半边旗二萜化合物5F（简称PsL5F）对人肝癌细胞株BEL-7402中PIK3CA（Phosphoinositide-3-kinase，catalytic，alphapolypeptide）和AKT（V-akt murine thymoma viral oncogene homolog）表达的影响，探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法：应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F对PIK3CA和AKT表达的影响。结果：PsL5F能明显下调肝癌细胞中PIK3CA和AKT的表达。结论：PsL5F抗肿瘤作用与PIK3CA、AKT低表达有关。

抗坏血酸与三氧化二砷联合应用诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨抗坏血酸(ascorbic acid,AA)与三氧化二砷(As2O3)联合应用增强肝癌细胞凋亡的作用。方法肝癌细胞株BEL-7402及SMMC-7721细胞分别用As2O3(1 μmol/L)、AA(62.5 μmol/L)、As2O3(1 μmol/L)+ AA(62.5 μmol/L)处理24～96 h,流式细胞仪上检测细胞凋亡百分率;用试剂盒法测定细胞内谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量。结果1 μmol/As2O3作用24～96 h有诱导BEL-7400及SMMC-7721细胞凋亡的作用,从(62.5 μmol/L)+As2O3(1 μmol/L)作用72 h BEL-7402细胞凋亡百分率为(61.7±0.8)%,SMMC-7721细胞为(26.8±0.9)%,较单独应用As2O3(1 μmol/L)的凋亡百分率[(40.2±0.8)%;(11.4±0.5)%]明显增高。As2O3(1 μmol/L)单独作用对SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响。从(62.5 μmol/L)单独作用对BEL-7402细胞内GSH的含量无明显影响,但可明显降低SMMC-7721细胞内GSH的含量(P<0.05)。AA(62.5 μmol/L)与As2O3(1 μmol/L)联合作用可明显降低SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH的含量(P<0.05),SMMC-7721细胞内GSH的含量降低更显著(P<0.01)。结论AA及As2O3联合应用能增强肝癌细胞株BEL-7402及SMMC- 7721细胞凋亡作用,尤其是对As2O3不敏感细胞株SMMC-7721细胞作用更显著。

生长抑素对人肝癌细胞株BEL-7402血管内皮生长因子表达与合成的影响

研究表明生长抑素可以抑制肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)的释放[1-3],其机制涉及多种受体后信号传导途径[4,5],本实验以体外培养的人肝癌BEL-7402细胞株为研究对象,观察生长抑素类似物奥曲肽对肝癌细胞VEGF表达与合成的影响,并初步探讨其作用机制.

原发性肝癌及其癌旁组织、Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的定量研究

目的定量测定原发性肝癌(HCC)及其癌旁组织、国内常用Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达水平,探讨重组人生长激素(rhGH)在原发性肝癌患者中的适用性。方法采用放射配体分析法对45例原发性肝癌组织及其癌旁组织、8例正常肝组织、Bel-7402人肝癌细胞株进行GHR的检测,肝组织及肝癌细胞的GHR受体最大结合量(RT)采用Scatchard法计算;并分析肝癌组织GHR的表达量与肝癌患者各临床病理参数的关系。结果在38例HCC组织与45例癌旁组织,以及7402肝癌细胞株均检测到GHR的存在,GHR受体结合容量(RT)在有GHR表达的肝癌组织为(19.673 00±3.876 6)fmol/mg蛋白,癌旁组织GHR的RT值为(33.628 3±3.621 8)fmol/mg蛋白,GHR在7402肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891;同正常肝组织相比,肝癌与癌旁组织GHR的表达量均降低(P<0.05),肝癌组织GHR的表达量又低于癌旁组织;肝癌组织GHR的表达量与肿瘤大小、患者临床分期的延迟呈负相关,而与肿瘤分化程度、患者年龄、是否合并肝硬化无关;有7例肝癌组织未检测到GHR存在。结论大多数原发性肝癌组织及全部癌旁组织均表达一定水平的GHR,在它们受体功能未明的情况下,rhGH在肝癌患者中的应用可能需慎重。

As_2O_3抑制肝癌细胞株Bel-7402 VEGF的表达及临床意义

肝癌发展过程中血管内皮生长因子（VEGF）起重要作用,可诱导微血管形成、增加血管通透性、促进肿瘤的侵袭及转移.目前研究应用血管生成抑制剂达到阻断肿瘤转移已成一个热点.本研究以免疫组化检测As2O3对肝癌细胞株Bel-7402 VEGF表达的影响,探求新的抗肝癌血管形成药物.为临床介入治疗肝癌、防治肝癌转移提供理论基础.

冬凌草甲素可抑制肝癌细胞增殖

中山大学第三附属医院研究人员以人肝癌细胞株BEL-7402细胞为研究对象，观察了不同浓度的冬凌草甲素对BEL-7402细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。结果发现，冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系：冬凌草甲素作用48～60h后，在BEL-7402细胞荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征：同时，端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性明显降低。研究人员介绍，端粒酶是一种特殊的核糖蛋白多聚酶，大量的临床资料表明，肝脏肿瘤细胞普遍表现出端粒酶活性，端粒酶活性的高低对于判断肝癌的疗效、