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题名内含肽融合标签介导的人乙醛脱氢酶2基因原核表达
被引量:1
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作者
刘向宇
尹杰超
李景鹏
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机构
东北农业大学生命科学学院
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出处
《东北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期38-44,共7页
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基金
黑龙江省科技厅应用技术研究与开发计划项目(2013GC13C105)
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文摘
为获得高活性重组人乙醛脱氢酶2(ALDH2)重组蛋白,研究通过PCR获得ALDH2基因,先后构建克隆和表达载体p GEM-ALDH2和p TYB11-ALDH2。转化的阳性重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE显示融合蛋白获得大量表达。通过正交试验对表达条件优化设计,结果表明,诱导OD值0.3,30℃,IPTG浓度1.0 mmol·L-1,诱导表达4 h为最优表达条件。由于融合蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性,使用IMPACTTM-CN蛋白纯化系统,经内含肽标签蛋白自裂解洗脱、纯化,获得仅含有几个载体氨基酸的ALDH2蛋白,蛋白浓度为0.045 mg·m L-1。纯化的ALDH2蛋白比活力为462 U·mg-1。
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关键词
人乙醛脱氢酶2
内含肽
重组表达
包涵体
IMPACTTM-CN蛋白纯化系统
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Keywords
human aldehyde dehydrogenase 2
intein
recombinant expression
inclusion body
IMPACTTM-CN protein purification system
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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