CD44v6与人乳头状瘤病毒L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值

目的探讨CD44v6与人乳头状瘤病毒(HPV)L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。方法收集2017年1月—2022年1月江南大学附属医院102例手术切除的宫颈鳞癌及癌前病变组织石蜡标本,其中宫颈鳞癌组织石蜡标本41例,癌前病变组织石蜡标本61例[宫颈低级别上皮内病变(LSIL)标本30例,宫颈高级别上皮内病变(HSIL)组织31例],另选取同期49例因子宫肌瘤行子宫切除的正常宫颈组织石蜡标本为对照。采用免疫组织化学法检测不同组织中CD44v6与HPV L1衣壳蛋白表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CD44v6、HPV L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。结果正常宫颈组织、LSIL组织、HSIL组织、宫颈鳞癌组织中CD44v6阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组织高于正常宫颈组织、LSIL组织及HSIL组织(P<0.05),HSIL组织高于正常宫颈组织和LSIL组织(P<0.05)。正常宫颈组织、LSIL组织、HSIL组织、宫颈鳞癌组织中HPV L1衣壳蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组织低于HSIL组织、LSIL组织、正常宫颈组织(P<0.05),HSIL组织低于LSIL组织、正常宫颈组织(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白及两者联合诊断宫颈鳞癌的敏感性分别为70.73%(95%CI:0.543,0.834)、75.61%(95%CI:0.594,0.871)、70.73%(95%CI:0.543,0.834),特异性分别为77.05%(95%CI:0.642,0.865)、73.77%(95%CI:0.607,0.838)、90.16%(95%CI:0.792,0.959),AUC分别为0.746(95%CI:0.648,0.844)、0.742(95%CI:0.638,0.846)、0.907(95%CI:0.848,0.966)。ROC曲线分析结果显示,癌前病变组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白及两者联合诊断HSIL的敏感性分别为74.19%(95%CI:0.551,0.875)、70.96%(95%CI:0.518,0.851)、70.96%(95%CI:0.518,0.851),特异性分别为76.67%(95%CI:0.573,0.894)、73.33%(95%CI:0.538,0.870)、90.00%(95%CI:0.723,0.974),AUC分别为0.748(95%CI:0.649,0.847)、0.726(95%CI:0.627,0.825)、0.890(95%CI:0.820,0.959)。结论CD44v6在宫颈病变组织中异常高表达,且随着宫颈病变程度的加重,CD44v6表达水平呈升高趋势,HPV L1衣壳蛋白的变化与CD44v6相反,两者联合诊断宫颈鳞癌及癌前病变价值较高。

人乳头瘤病毒11型L1主要衣壳蛋白的B细胞表位多肽作为疫苗的研究

分析了人乳头瘤病毒11型(HPV11)L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,并以此为基础研制表位多肽疫苗。研究中采用Goldkey和PC/Gene软件系统,分析HPV11的L1主要衣壳蛋白的二级结构、抗原性、B细胞表位,并引入氨基酸抗原性指数,综合评估其B细胞优势表位。Fmoc固相合成表位多肽,高效液相层析方法纯化,毛细管电泳分析其纯度。与0.2ml佐剂完全乳化后,按50μg/只的剂量免疫小鼠,进行动物水平的免疫效果评价。取免疫小鼠血清,与HPV11DNA阳性的尖锐湿疣患者的疣体上清液结合,鉴定免疫后小鼠所产生抗体的特异性。发现HPV11的L1主要衣壳蛋白的第426～439位和第487～501位具有较高的免疫原性,可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,且该抗体与人尖锐湿疣的疣体组织上清液呈阳性反应。说明所选这两个肽段为HPV11的L1主要衣壳蛋白的B细胞优势表位,但是否具有功能特异性,尚需进一步研究。

人乳头状瘤病毒16型E6蛋白在食管癌中的表达及与Cyclin D1的关系

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型E6蛋白在食管癌中的表达及与细胞周期蛋白Cyclin D1的关系。方法采用免疫组织化学法检测50例食管鳞癌组织、30例食管癌旁组织及30例正常食管黏膜组织中HPV 16型E6蛋白的表达情况,采用Western blot方法检测Cyclin D1在HPV 16型E6蛋白阳性及阴性的食管鳞癌组织中的表达水平。结果食管鳞癌组织中HPV 16型E6蛋白的阳性表达率高于正常食管黏膜组织(P<0.05),与食管癌旁组织差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤最大径较大者、肿瘤浸润较深者、淋巴结转移者HPV 16型E6蛋白的阳性表达率均较高(P<0.05)。HPV 16型E6蛋白阳性的食管鳞癌组织中Cyclin D1蛋白表达量高于阴性者(P<0.05)。结论 HPV 16型E6蛋白可能促进了食管癌的生长和恶化,并与Cyclin D1有一定的相关性,可作为食管癌的预后评估因子,为临床治疗提供一定的参考依据。

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义

目的：探讨人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义。方法选取2012年10月～2014年10月新疆医科大学第一附属医院行宫颈癌筛查的患者627例，先行液基细胞学检查，后行阴道镜检查并取活检，同时行人乳头状瘤病毒L1壳蛋白检测和人端粒酶RNA基因检测。分析不同病症间临床指标的变异情况。结果未见上皮病变或恶性改变（NILM）、意义不明的不典型鳞状细胞与不典型腺细胞（ASC-US）、不除外高度鳞状上皮内病变的的不典型鳞状细胞（ASC-H）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）、腺癌（AC），人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、42.9%、51.0%、80.6%、47.4%、5.9%、0.0%，差异有高度统计学意义（χ2=93.770，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在LSIL达到最高点，在AC降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、19.9%、36.3%、51.6%、94.7%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=279.564，P〈0.01），呈持续升高趋势，在SCC与AC达到最高点。依正常、炎症、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ期、CINⅡ期、CINⅢ期、宫颈癌顺序，人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、46.1%、80.6%、53.3%、25.0%、3.6%，差异有高度统计学意义（χ2=93.015，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在CINⅠ期达到最高点，在宫颈癌降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、26.4%、51.6%、93.3%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=269.582，P〈0.01），呈持续升高趋势，在CINⅢ期达到最高点。结论人乳头状瘤病毒L1壳蛋白联合人端粒酶RNA基因检测，在宫颈癌前病变中具有较高的指导价值。

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白对宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断价值分析

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）LI壳蛋白在不同宫颈病变中的表达情况及相关性。方法选择2011年1月-2013年1月于新疆维吾尔自治区人民医院妇科就诊的高危型HPV阳性宫颈病变患者171例作为研究对象．其中慢性宫颈炎组23例，宫颈上皮内瘤变组121例（CINI组48例、CINII组34例、CINIII组39例）、宫颈鳞状细胞癌（SCC）组患者27例，采用免疫组化方法检测HPVL1壳蛋白在5种宫颈病变组织的表达情况。结果171例患者中，HPVL1阳性表达63例，阳性率为36．8％，其中在慢性宫颈炎患者中，HPVL1蛋白阳性表达为17例，阳性率为73．9％；CINI患者中，HPVL1蛋白阳性表达为32例，阳性率为66．7％；CINⅡ患者中，HPVLl蛋白阳性表达为12例，阳性率为35．3％；CINUI患者中，HPVL1蛋白阳性表达为2例，阳性表达率为5．1％，SCC组中无HPV L1蛋白表达。五组患者HPVL1蛋白阳性表达率整体比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；炎症组与CINII组、CINIII组、SCC组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；CINI组与CINII组、CINIII组、SCC组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。以患者的病理检查结果作为金标准，绘制ROC曲线，面积为0．799，标准误为0．062，95％CI为0．677—0．921，灵敏度为0．769，特异度为0．750。结论HPVL1壳蛋自在宫颈上皮内瘤变中的阳性表达随病变程度的加重而呈下降趋势。提示其有望成为预测宫颈癌前病变程度的标志物，对于宫颈癌前病变的筛查和预防具有重要的意义。

人乳头状瘤病毒L1蛋白与宫颈病变相关性研究进展

人乳头状瘤病毒(HPV)被认为是宫颈癌发生的必要因素,宫颈癌发展期间对宫颈上皮内瘤变早诊断、早治疗可以有效阻止病变进程。HPV Ll蛋白具有与宿主细胞识别并黏附的抗原表位,在HPV感染及引发宫颈癌变过程中发挥重要作用。

人乳头瘤病毒18型L1蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达

目的:利用昆虫杆状病毒系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白。方法:将L1基因与p Fast Bac1(p FB1)载体连接,构建转移载体p FB1-L1,转化含Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒r Bacmid-L1;r Bacmid-L1转染Sf9细胞,获得重组病毒r Bac-L1;PCR法检测重组杆状病毒基因组L1基因,间接免疫荧光法和Western印迹检测L1蛋白的表达。结果:穿梭质粒r Bacmid-L1经PCR鉴定构建正确;感染r Bac-L1的Sf9细胞经PCR扩增可见1629 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western印迹鉴定与小鼠抗L1单克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约60 000处可见特异性条带。结论:利用昆虫杆状病毒表达系统表达了HPV18 L1蛋白。

鳞状细胞癌相关抗原联合人乳头瘤病毒蛋白L1在宫颈癌诊断中的应用

目的研究鳞状细胞癌相关抗原(SC-CA)联合人乳头瘤病毒蛋白L1(HPVL1)在宫颈癌诊断中的应用价值。方法选取从2013年2月～2018年2月收治的疑似宫颈癌患者96例为观察对象。采用微粒酶免疫检测技术检测所有患者血清SC-CA水平,采用免疫组织化学法检测所有患者HPVL1表达情况。以手术病理诊断为金标准,分析血清SC-CA水平、HPVL1以及两者联合诊断宫颈癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值情况。此外,比较不同病理分期宫颈癌患者的血清SC-CA水平以及HPVL1阳性率。结果以病理诊断为金标准,SC-CA诊断宫颈癌的灵敏度为87.10%,特异度为79.41%,阳性预测值为88.52%,阴性预测值为77.14%。HPVL1诊断宫颈癌的灵敏度为82.26%,特异度为82.35%,阳性预测值为89.47%,阴性预测值为71.79%。SC-CA联合HPVL1诊断宫颈癌的灵敏度为98.39%,特异度为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为97.14%。分化程度G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者SC-CA水平低于分化程度G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者(P <0.05);分化程度G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者HPVL1阳性率高于分化程度G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者(P <0.05)。结论 SC-CA联合HPVL1应用于宫颈癌的诊断中可显著提高灵敏度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值。

人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的纯化

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。

人乳头状瘤病毒L1蛋白在宫颈上皮内瘤样病变中的表达及临床意义

目的通过研究人乳头状瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)Ll蛋白在不同级别宫颈上皮内瘤样病变(Cervical Intraepithelial Neoplasia,CIN)中的表达,探讨HPV L1蛋白在临床上的应用价值。方法选取2013年12月至2015年12月北京市垂杨柳医院收治的经病理结果确诊为CIN合并高危HPV感染的76例患者作为研究对象,免疫组化方法检测不同级别CIN中HPV L1蛋白的表达,并与液基薄层细胞检测(TCT)比较预测结果。结果76例患者中,HPV Ll蛋白总阳性率26.32%(20/76)。低级别鳞状上皮内病变(LSIL)HPV L1蛋白的阳性率为44.12%(15/34),高级别鳞状上皮内病变(HSIL)为11.90%(5/42),差异有统计学意义(P<0.05)。在高危型HPV阳性妇女中,HPV L1蛋白及TCT预测组织学诊断HSIL病变敏感度分别为88.10%、50.00%,二者的阴性预测值分别为75.00%、55.32%,HPV L1蛋白的数值均高于TCT(P<0.05),但二者的特异度44.12%、76.47%,HPV L1低于TCT(P<0.01)。结论HPV L1蛋白可能成为高危型HPV阳性患者的一种合适的分流方法,在提高宫颈上皮内瘤样病变的筛查率中具有一定的临床价值。

利用昆虫-杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒16/18/33/58亚型L1蛋白

目的:通过昆虫-杆状病毒表达系统获得人乳头瘤病毒(HPV)16/18/33/58亚型的主要衣壳蛋白L1。方法:克隆了HPV16/18/33/58亚型的L1蛋白基因,并采用密码子优化策略进行改造(记为HPV16/18/33/58亚型mL1),将优化基因片段插入pFastBac Dual载体获得重组载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后得到重组Bacmid,转染昆虫Sf9细胞,Western印迹和SDS-PAGE检测重组蛋白的表达。结果:获得了表达HPV16/18/33/58亚型mL1蛋白的重组杆状病毒;Western印迹和SDS-PAGE分析表明该重组杆状病毒感染昆虫Sf9细胞后表达mL1蛋白,且mL1蛋白主要分布在细胞中;优化了蛋白表达时间和感染复数,获得目的蛋白mL1的高效表达。结论:多个亚型HPV L1蛋白的克隆表达,为中国优势血清型疫苗的研制奠定了基础。

人乳头状瘤病毒及其L1蛋白检测在宫颈病变诊断中的应用

宫颈癌（cervical cancer,CC）是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一,仅次于乳腺癌而居于第二位,在发展中国家尤为常见,是妇科三大恶性肿瘤之一,全世界每年都有约20万的妇女死于该疾病.宫颈癌的发生、发展在近二十年中呈现明显上升趋势,其发病与许多因素有关,且农村高于城市,近10年来有持续上升并趋于年轻化.从癌前病变发展到宫颈癌大约需10年的时间,而早期宫颈癌的治疗效果和5年生存率位于恶性肿瘤的前列.为此我们采用聚合酶链反应（Polymerase chain rection,PCR）、基因芯片和免疫组化技术对胜利医院妇科门诊104例疑似宫颈癌或癌前病变的患者和34例健康查体女性,进行了宫颈细胞HPV检测.

人乳头瘤病毒16型L1蛋白B细胞表位预测

目的预测人乳头瘤病毒16型L1（HPV-16 L1）蛋白的B细胞表位。方法先从NCBI的蛋白质数据库中获得HPV-16 L1蛋白的氨基酸序列,再采用DNAStar中的Protean模块分析HPV-16型L1蛋白的二级结构、柔韧性、亲水性、表面可及性以及抗原性,然后结合吴玉章等建立的氨基酸抗原性指数方法计算其平均抗原指数（AI）,综合分析上述多个参数,预测其可能的B细胞表位区域,并用在线BLAST进行同源性匹配分析。结果综合分析多个参数,预测得出HPV-16 L1蛋白的B细胞表位可能位于第51～58、87～97、214～220、290～296、335～341、351～366、408～418、430～442和475～496肽段,进一步的同源性匹配分析显示肽段51～58、335～341、351～366、408～418、430～442以及475～496为其B细胞表位优势区域,其中肽段51（PIKKPNNN）58、351（SETTYKNTNFKEYLRH）366、408（PPPGGTLEDTY）418和430（KHTPPAPKEDPLK）442的氨基酸序列为HPV-16型L1蛋白所特有,而肽段475（KAKPKFTLGKRKATPTTSSTST）496与HPV-16 E1蛋白具有同源性、335（DTTRSTN）341的氨基酸序列与很多其他型别的HPV的L1蛋白具有同源性。结论综合多种方案预测得到HPV-16 L1的多个B细胞表位优势区域。

非小细胞肺癌中缺氧诱导因子-1α和p-糖蛋白的表达及其与人乳头状瘤病毒感染的相关性

目的缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、p-糖蛋白(p-glycoprotein,p-gp)的表达,HPV感染在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生发展中的作用及三者的相互关系尚不清楚。文中研究NSCLC中HIF-1α和p-gp的相关性,探讨HIF-1α和p-gp在NSCLC发生发展及多药耐药(multidrug resistance,MDR)中的作用,并初步分析HIF-1α和p-gp与人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的相关性。方法收集秦皇岛市第一医院2012年1-5月NSCLC新鲜标本60例作为NSCLC组,20例肺良性病变组织作为肺良性病变组,应用PCR方法选用HPV16、18型特异性引物检测2组中HPV DNA的表达,应用免疫组化法检测HIF-1α、p-gp的表达。结果 NSCLC中HIF-1α阳性率为48.3%(29/60),肺良性病变未见阳性表达(χ2=15.163,P<0.05);p-gp的阳性率为60.0%(36/60),肺良性病变未见阳性表达(χ2=21.818,P<0.05);HIF-1α阳性者中p-gp的表达率明显高于HIF-1α阴性者,两者呈正相关(r=0.313,P<0.05);NSCLC组中HIF-1α表达与组织分化程度及淋巴结转移相关;p-gp表达与组织学分型相关,肺腺癌p-gp阳性表达率(83.3%)高于肺鳞癌(50.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC高分化型HPV DNA检出率(8.3%)低于中、低分化型(50.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移者HPV DNA检出率(60.6%)高于无淋巴结转移者(23.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α与p-gp参与了NSCLC的发生发展及MDR;HPV感染可能是NSCLC发生的病因学因素之一,但NSCLC中HIF-1α、p-gp表达与HPV感染均无协同作用。

人乳头状瘤病毒感染、P53及缺氧诱导因子-1α蛋白表达与非小细胞肺癌的相关性

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染在非小细胞肺癌(NSCLC)发生中的病因学意义,分析HPV感染与P53和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达之间的关系。方法应用免疫组化法检测60例NSCLC及20例肺良性病变组织中P53、HIF-1α蛋白的表达,应用PCR方法选用HPV16、18型特异性引物检测两组中HPV DNA的表达。结果 1HPV DNA检出率NSCLC组为41.7%,肺良性病变组5.0%,二者有显著差异(P<0.05)。2NSCLC中P53和HIF-1α的表达阳性率分别为43.3%和48.3%,肺良性病变组均未见阳性表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。3NSCLC中P53的表达率与HIF-1α呈正相关(r=0.500,P<0.05)。4HPV DNA阳性组中P53的表达率为60.0%高于HPV DNA阴性组31.4%(P<0.05)。HPV DNA阳性组与阴性组间HIF-1α的阳性表达率分别为52.0%和45.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HPV感染可能是NSCLC发生的病因学因素之一,HPV感染降解野生型P53蛋白,诱导P53基因突变,从而促进肺癌发生发展。

人乳头瘤病毒L1壳蛋白在宫颈脱落细胞中的表达及其临床意义

目的：研究人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）L1壳蛋白在各级宫颈病变脱落细胞中的表达及其临床意义。方法：选择2013年7月至2015年3月,重庆市妇幼保健院宫颈病专科薄层液基细胞学检测（thinprep cytologic test,TCT）结果异常和/或高危型HPV-DNA检测[采用第二代杂交捕获法（hybrid captureⅡ,HC-2）]结果阳性,且阴道镜检查疑有宫颈病变的妇女共248例,所有研究对象均行HPV L1壳蛋白检测及宫颈活检,并对患者进行跟踪研究。结果：在正常宫颈、宫颈上皮内病变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅰ级、CINⅡ/Ⅲ级和宫颈鳞癌（squamous cell carcinoma,SCC）患者中,HPV L1壳蛋白阳性率分别为13.04%（3/23）、28.36%（19/67）、11.92%（18/151）、0%（0/7）,其中CINⅠ组L1壳蛋白阳性表达率明显高于CINⅡ/Ⅲ组,差异有统计学差异（χ2=8.898,P=0.003）。将患者以年龄30岁为界分为2组,在年龄〈30岁组（共76例）中,各组织学分组之间L1壳蛋白阳性表达率差异均无统计学意义;在年龄≥30岁组（共172例）中,CINⅠ组（13/45,28.89%）与CINⅡ/Ⅲ组（12/104,11.54%）比较L1壳蛋白阳性表达率明显增高,差异有统计学意义（χ2=6.772,P=0.009）;HPV负荷量〉100 RLU/CO组HPV L1壳蛋白表达率（27/82,32.93%）高于HPV负荷量≤100 RLU/CO组（13/166,7.83%）,差异有统计学意义（χ2=25.553,P=0.000）;83例CIN患者随访12～24个月,HPV L1壳蛋白表达阴性组病变进展率（23/62,37.10%）大于阳性表达组（2/21,9.52%）,差异有统计学意义（χ2=4.432,P=0.035）。结论：HPV L1壳蛋白在CINⅡ/Ⅲ中阳性表达率较CINⅠ呈下降趋势,HPV L1壳蛋白阳性表达组病变进展率低,可作为预测宫颈病变进展风险的临床参考指标。

人乳头瘤病毒L1壳蛋白在子宫颈上皮内瘤变患者中的表达及其意义

目的检测人乳头瘤病毒(HPV)L1壳蛋白在宫颈上皮内瘤变(CIN)患者宫颈脱落细胞中的表达,以寻求预测CIN的生物学标志物。方法收集2008年12月至2011年8月在河南省漯河市中心医院有指征行阴道镜活检患者的宫颈脱落细胞标本480例,采用免疫细胞化学法检测HPVL1壳蛋白的表达。结果 480例患者HPVL1壳蛋白的总阳性率为40.2%(193/480),其中正常/慢性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3和宫颈鳞状细胞癌(SCC)HPVL1壳蛋白的阳性表达率分别为40.5%(17/42)、66.2%(131/198)、26.4%(28/106)、17.3%(17/98)和0(0/36)。其中CIN1组、SCC组与正常/慢性宫颈炎组,CIN1组与CIN2/3组,CIN1、CIN2/3组与SCC组HPVL1壳蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论 HPVL1壳蛋白在宫颈上皮内瘤变中的阳性表达随病变程度的加重而呈下降趋势,提示其有望成为预测宫颈癌前病变程度的标志物。

人乳头瘤病毒16型L1蛋白的克隆及表达

采用PCR技术从宫颈癌组织中扩增人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus type16,HPV16)L1全长基因片段,目的片段克隆到pMD18T载体后经酶切鉴定及测序确认。构建重组原核表达质粒pGEX4T1-L1,转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导表达出以非可溶性蛋白形式存在的表达蛋白,该重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的17%,免疫印迹检测表明,表达蛋白与宫颈癌病人血清出现特异性反应。成功构建了重组原核表达质粒pGEX4T1-L1,并且在原核细胞中得到表达,为进一步研究L1蛋白的免疫学活性及疫苗的研发奠定了基础。

表达人乳头瘤病毒58型L1、L2壳蛋白的非复制型重组痘苗病毒疫苗株的构建

采用PCR定点突变方法 ,对HPV5 81L1基因中痘苗病毒早期基因转录终止信号TTTTTNT结构进行修饰 ,并保留氨基酸不变。选用非复制型重组痘苗病毒为载体 ,将修饰的L1基因 1 5kb和L2基因 1 4kb分别插入痘苗病毒表达载体 pJSD的 7 5k和H6早期启动子之后 ,使之与非复制型重组痘苗病毒在TK区重组。经单斑筛选纯化 ,获得共表达HPV5 8L1、L2晚期蛋白的非复制型重组痘苗病毒疫苗实验株。该病毒在CEF细胞上连续传至第15代 ,经斑点杂交分析 ,重组痘苗病毒基因组中有L1和L2基因插入 ;经Westernblot检测 ,重组病毒能稳定表达HPV5 81L1及L2蛋白。此结果为HPV5

HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用

目的了解HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用。方法对同时行HPV-DNA分型检测、HPVL1检测以及宫颈细胞学筛查的520例志愿者的结果进行分析和总结。结果在HPV-DNA低危亚型阳性患者中,HPVL1均为阳性;HPV-DNA高危亚型阳性者中有62.10%HPVL1为阴性;阴道镜及病理诊断结果发现,HPV-DNA高危亚型阳性且HPVL1检测结果阴性的患者宫颈活检病变处于CINⅠ者占57.35%,CINⅡ及以上者占26.47%。结论 HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中有明确的指导价值,结合HPV-DNA分型检测意义更大;对高危阳性而HPVL1为阴性患者应警惕宫颈病变的发生。