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人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位 被引量:1
1
作者 刘金花 俞娟 +4 位作者 许蓓妮 姚军 左泽华 赵旻 伍欣星 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期1-5,共5页
目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂... 目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;West-ern印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。 展开更多
关键词 人乳头病毒 人乳头瘤病毒16型变异株e7 亚细胞定位 核定位信号 激光共聚焦
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人乳头瘤病毒16型E7变异株免疫原性研究 被引量:3
2
作者 张涵 赵旻 +3 位作者 李辉 邱小萍 谭云 伍欣星 《中国病毒学》 CSCD 2004年第3期220-223,共4页
采用分子克隆技术,构建E7变异株重组质粒[pcDNA3.1-(by)E7]和E7标准株重组质粒[pcDNA3.1-(ys)-E7],并将两种质粒分别皮下免疫Balb/c小鼠,免疫后于不同时间提取小鼠血清和制备脾淋巴细胞悬液,分别用ELISA法和MTT比色法检测特异性抗体和... 采用分子克隆技术,构建E7变异株重组质粒[pcDNA3.1-(by)E7]和E7标准株重组质粒[pcDNA3.1-(ys)-E7],并将两种质粒分别皮下免疫Balb/c小鼠,免疫后于不同时间提取小鼠血清和制备脾淋巴细胞悬液,分别用ELISA法和MTT比色法检测特异性抗体和特异性淋巴细胞增殖反应。基因免疫后,ELISA法显示,HPV16E7变异株和标准株均能诱导特异性抗E7抗体;MTT比色法显示,E7标准株免疫组脾淋巴细胞在体外受到变异株E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应,变异株E7免疫组脾淋巴细胞经过同样处理后,出现非特异性淋巴细胞增殖反应。结果表明HPV16E7变异株能诱导特异性体液免疫应答而不能诱导特异性细胞免疫应答,HPV16E7变异株无论在结构还是免疫原性上均与标准株有差异。由此推测,HPV16E7变异可能导致其逃逸机体自然感染或疫苗诱导的免疫应答。用基因免疫方法研究E7变异株免疫原性也为其它不能或难以进行体外培养的病毒变异研究提供借鉴。 展开更多
关键词 人乳头病毒16 e7 变异 基因免疫
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人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用 被引量:21
3
作者 司马妮 王薇 +5 位作者 徐茜 田训 罗爱月 卢运萍 王世宣 马丁 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期26-31,共6页
背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探... 背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。方法:利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞,利用RT-PCR和Westernblot技术检测转染后E6、E7基因的mRNA和蛋白的变化,利用MTT法检测SiHa细胞转染后细胞增殖活性,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡情况。结果:转染携带HPV16型E6、E7反义基因的质粒后,SiHa细胞的E6、E7基因的mRNA和蛋白表达均明显下调;MTT结果显示转染后细胞的增殖活性(0.50±0.05)与转染空载体细胞(1.01±0.06)和未转染细胞(1.28±0.06)比较明显降低(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示转染后细胞凋亡率(59.3±11.3)%与转染空载体细胞(9.4±1.8)%和未转染细胞(2.1±0.4)%比较有显著性差异(P<0.05)。激光共聚焦显微镜结果示转染后细胞凋亡明显增多。结论:HPV16型E6、E7基因反义RNA可降低宫颈癌细胞中E6、E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 宫颈肿 人乳头病毒16 e6基因 e7基因 反义基因 eGFP 凋亡
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人乳头瘤病毒16型E6和E7基因及其突变体转化活性的研究 被引量:16
4
作者 骆卫峰 韩立群 +4 位作者 任皎 田厚文 陆振华 谷淑燕 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期97-101,共5页
为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体 ,故将HPV16型原型株 (德国株 )E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞 ,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力。结果表明 ,单独转... 为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体 ,故将HPV16型原型株 (德国株 )E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞 ,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力。结果表明 ,单独转染和共转染HPV16野生型E6和E7基因的Balb/c3T3细胞系 ,在软琼脂中呈集落样生长 ,并在裸鼠体内成瘤 ;而转染E6基因突变体mE6 (5 0G)、E7基因的两种突变体mE7- 1(2 4G2 6G)和mE7- 3(2 4G2 6G6 7R)以及共转染mE6和mE7- 1的Balb/c3T3细胞 ,在软琼脂培养中极少形成集落 ,也不能在裸鼠体内成瘤。提示经结构改造后的HPV16E6和E7基因已失去了对Balb/c3T3细胞的转化活性 ,而保留了免疫原性 ,可用于HPV16相关肿瘤治疗性疫苗的构建。 展开更多
关键词 诱变 人乳头病毒16 e7基因 突变体 转化活性
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人乳头瘤病毒16型E6和E7癌蛋白在肺癌中的表达检测 被引量:2
5
作者 许春雷 赵光明 +2 位作者 千新来 陆元志 赵清正 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第4期364-366,共3页
关键词 人乳头病毒 16e6 16e7 癌蛋白 肺癌 基因表达 HPV
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外源性人乳头瘤病毒16型E7癌基因导入对HeLa细胞cdc25A表达的影响 被引量:2
6
作者 戴淑真 田甜 +2 位作者 孔守芳 黄丽丽 罗兵 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2006年第11期844-846,I0001,共4页
目的:研究HPV16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期调节因子cdc25A mRNA表达的影响,探讨E7癌基因和cdc25A在宫颈癌发生发展中的作用。方法:用含有HPV16E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。采用反转录... 目的:研究HPV16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期调节因子cdc25A mRNA表达的影响,探讨E7癌基因和cdc25A在宫颈癌发生发展中的作用。方法:用含有HPV16E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测感染前后HeLa细胞cdc25A mRNA表达的差异。结果:感染后HeLa细胞cdc25A的mRNA含量较感染前显著增加(感染前灰度值0.2306±0.0964,感染后0.8739±0.2188,P<0.01)。结论:HPV16E7癌基因促进细胞周期调节因子cdc25A的表达,可能是宫颈癌发病机制中的重要分子事件。 展开更多
关键词 人乳头病毒16 e7基因 cdc25磷酸酶 HeLA细胞 宫颈肿 聚合酶链反应 逆转录
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E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒16/18型阳性患者分流的可行性 被引量:2
7
作者 梁雯 白华 +2 位作者 林晓琰 黄丽英 黄宁 《广西医学》 CAS 2021年第5期569-573,共5页
目的探讨E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒61(HPV)16/18型阳性患者分流的可行性。方法选取HPV 16/18型阳性的200例患者作为研究对象。所有患者均进行E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查及阴道镜活检检查。以病理结果为金标准,评估E6/E7 m... 目的探讨E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒61(HPV)16/18型阳性患者分流的可行性。方法选取HPV 16/18型阳性的200例患者作为研究对象。所有患者均进行E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查及阴道镜活检检查。以病理结果为金标准,评估E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查对HPV 16/18型感染者的高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)及以上病变的诊断效能。结果在200例HPV 16/18型感染者中,阴道镜活检HSIL及以上病变的检出率仅为29.5%(59/200)。共107例患者HPV E6/E7 mRNA阳性,56例患者液基细胞学阳性。HPV E6/E7 mRNA阳性者HSIL及以上病变检出率高于阴性者(P<0.05);随着宫颈病变病理级别的提高,HPV E6/E7 mRNA阳性率呈升高趋势(均P<0.05),但液基细胞学异常率差异无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA诊断HSIL及以上病变的灵敏度、特异度分别为86.44%、60.28%,液基细胞学的灵敏度、特异度分别为25.42%、70.92%,HPV E6/E7 mRNA的灵敏度高于液基细胞学(P<0.05)。结论E6/E7 mRNA检测对HPV 16/18型感染者的HSIL及以上病变具有较好的诊断效能,或可用于患者的进一步分流,以降低阴道镜的转诊率。 展开更多
关键词 人乳头病毒感染 人乳头病毒16 人乳头病毒18 e6/e7 mRNA 患者分流 液基细胞学 阴道镜转诊率
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16型人乳头瘤病毒E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变发展中的表达及意义 被引量:3
8
作者 罗琼 熊树华 +1 位作者 舒宽勇 李景平 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2013年第4期32-36,40,F0003,共7页
目的研究16型人乳头瘤病毒(HPV16)E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织的表达,探讨其与宫颈癌前病变恶性进展间的关系,为寻找预测宫颈癌前病变转归方向的分子指标做一探索。方法采用免疫组织化学EnVision二步法检测30... 目的研究16型人乳头瘤病毒(HPV16)E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织的表达,探讨其与宫颈癌前病变恶性进展间的关系,为寻找预测宫颈癌前病变转归方向的分子指标做一探索。方法采用免疫组织化学EnVision二步法检测30例原发性浸润性宫颈癌(ICC组,n=30)、CIN[CINⅠ-Ⅱ组,n=60;CINⅢ(含原位癌)组,n=30]、正常宫颈组织标本(正常组,n=10)中HPV16E6、E7蛋白和端粒酶的表达。结果 HPV16E6、E7蛋白和端粒酶在正常组、CINⅠ-Ⅱ组、CINⅢ组和ICC组中的阳性表达均呈逐级增高趋势。HPV16E6蛋白的表达:ICC组高于正常组,CINⅢ组高于正常组、CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05);HPV16E7蛋白的表达:ICC组、CINⅢ组高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);端粒酶的表达:ICC组高于CINⅢ组,CINⅢ组高于CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV16E6与HPV16E7蛋白、HPV16E6蛋白与端粒酶、HPV16E7蛋白与端粒酶的表达呈正相关(r=0.272,P<0.05;r=0.279,P<0.05;r=0.376,P<0.01)。结论 HPV16E6、E7蛋白和端粒酶随宫颈病变CIN的升级其阳性表达率、表达强度呈逐渐递增趋势。在宫颈癌变过程中HPV16E6、E7蛋白和端粒酶的阳性表达均呈正相关。HPV16E6、E7蛋白和端粒酶作为CIN的预后因子还尚待进一步研究。 展开更多
关键词 宫颈癌 宫颈上皮内 16人乳头病毒e6蛋白 16人乳头病毒e7蛋白 端粒酶
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人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究 被引量:1
9
作者 刘朝奇 许雪梅 +3 位作者 徐建青 李昆 司静懿 刘世德 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期254-258,共5页
目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L... 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒16 L1 e7 蛋白表达 免疫原性
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人乳头瘤病毒16型修饰后E6E7基因免疫原性增强 被引量:1
10
作者 许雪梅 朱明昭 +2 位作者 张明策 刘晓娟 宋国兴 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2003年第3期269-273,共5页
利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fm... 利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fmE6E7,瞬时转染Cos 7细胞 ,免疫荧光法检测证实其表达后 ,在C5 7BL 6小鼠后腿肌肉进行裸DNA免疫 ,5 1Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性 (cytotoxicTlymphocyte,CTL) ,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。研究表明修饰后的中国地方株E6E7融合基因可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应 ,与单独野生型E7基因免疫相比 ,E6E7融和基因可更好的活化CTL反应。表明修饰后消除转化活性的中国地方株E6E7融合基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因。 展开更多
关键词 人乳头病毒16 基因修饰 e6e7基因 免疫原性增强 DNA疫苗 宫颈癌 癌前病变
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人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因在耻垢分枝杆菌中的表达 被引量:1
11
作者 雷蕾 吴少庭 蔡昌学 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第2期93-96,共4页
目的在耻垢分枝杆菌Mycobaterium smegmatis mc2155中表达人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因,为其重组BCG疫苗的研究奠定基础。方法采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG-E7C导入耻垢分枝杆菌(M.smegmatismc2155)中,通过卡那霉素抗性筛选经PCR鉴... 目的在耻垢分枝杆菌Mycobaterium smegmatis mc2155中表达人类乳头瘤病毒16型E7C亚基因,为其重组BCG疫苗的研究奠定基础。方法采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG-E7C导入耻垢分枝杆菌(M.smegmatismc2155)中,通过卡那霉素抗性筛选经PCR鉴定的重组M.smegmatis mc2155,培养于middlebrook7H9 broth(M7H9)培养基中,并添加10%M7H9 enrichment ADC和0.05%Tween 80,37℃培养48 h^72 h,42℃诱导表达5 h,表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot分析。结果成功构建pBCG3000-E7C质粒,SDS-PAGE显示表达产物的分子质量单位约为6.5 ku,与预期理论值相符,Western blot分析表达产物能被宫颈癌患者血清识别。结论人类乳头瘤病毒16型E7C基因在M.smegmatis mc2155中成功表达。 展开更多
关键词 人类乳头病毒16 e7C基因 耻垢分枝杆菌 基因表达
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人乳头瘤病毒16型E_7基因的体外扩增及其克隆和序列分析 被引量:1
12
作者 苏应斌 赵文先 +2 位作者 伍欣星 戴天力 丁晓华 《中国病毒学》 CSCD 1995年第4期303-308,共6页
人乳头瘤病毒16型E7基因是转化基因。作者设计了一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRI和HindⅢ酶切序列,以HPV16DNA为模板成功地扩增出E7基因。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点将E7基因定向克... 人乳头瘤病毒16型E7基因是转化基因。作者设计了一对PCR引物,在引物的5′端分别引入EcoRI和HindⅢ酶切序列,以HPV16DNA为模板成功地扩增出E7基因。通过EcoRI和HindⅢ双酶切位点将E7基因定向克隆入pUC18载体,经过PCR、酶切分析和Southern印迹杂交鉴定得到E7重组克隆pHSE7、DNA序列分析表明所克隆的E7基因与已发表的HPV16E7基因序列完全一致且读框正确。 展开更多
关键词 人乳头病毒 16 基因扩增 e7基因 序列分析
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新疆哈萨克族食管癌组织中乳头瘤病毒16型E6E7基因的研究 被引量:4
13
作者 卢晓梅 林仁勇 +3 位作者 张亚楼 阿孜古丽 张月明 温浩 《地方病通报》 2003年第4期26-28,共3页
为了解HPV16感染后E6E7基因变化在哈萨克族食管癌发病中的作用 ,以及HPV16E6E7基因与食管癌病理组织分级的关系 ,采用聚合酶链 (PCR)技术 ,检测 82例食管癌及癌旁正常食管粘膜组织中HPV 16E6E7基因差别。食管癌、癌旁正常粘膜组HPV16E6E... 为了解HPV16感染后E6E7基因变化在哈萨克族食管癌发病中的作用 ,以及HPV16E6E7基因与食管癌病理组织分级的关系 ,采用聚合酶链 (PCR)技术 ,检测 82例食管癌及癌旁正常食管粘膜组织中HPV 16E6E7基因差别。食管癌、癌旁正常粘膜组HPV16E6E7基因的检出率分别为 3 4. 15 % ( 14 /4 1)和 19. 5 1% ( 8/4 1) ,63 . 41% ( 2 6/4 1)和48. 78% ( 2 0 /4 1) ,差别均无显著性 (P >0 . 0 5 )。然而 ,在食管癌组织的高分化组、中低分化组中HPV16E6E7的检出率分别为 7. 69% ( 1/13 )和 46. 43 % ( 13 /2 8) ,3 8. 46% ( 5 /13 )和 75 % ( 2 1/2 8) ,差别均有统计学意义 (P <0 .0 5 )。提示HPV16E6E7基因与哈萨克族食管癌的发生及癌组织分级密切相关。 展开更多
关键词 人乳头病毒16 e6基因 e7基因 食管癌 哈萨克族 新疆
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人乳头瘤病毒16型E7蛋白和TGF-β1/Smads信号传导通路在宫颈病变中的表达及其意义
14
作者 徐茜 李鹏程 +5 位作者 邬素芳 陈刚 李芳 王薇 卢运萍 马丁 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2005年第3期186-189,F003,共5页
目的:检测宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7蛋白以及转化生长因子β1(TGF-β1)介导的细胞信号传导通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Smad4蛋白的表达,探讨人乳头瘤病毒感染和TGF-β1/Smads信号传导通路在肿瘤形成及演进过... 目的:检测宫颈病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV-16)E7蛋白以及转化生长因子β1(TGF-β1)介导的细胞信号传导通路中TGF-β1及其Ⅱ型受体(TβRⅡ)和Smad4蛋白的表达,探讨人乳头瘤病毒感染和TGF-β1/Smads信号传导通路在肿瘤形成及演进过程中可能的作用机制。方法:免疫组织化学SP法检测141例石蜡包埋的不同病变宫颈组织中E7,TGF-β1,TβRⅡ和Smad4的表达,通过计算机图片摄像分析系统统计其在各种病变中表达水平的差异。结果:病变由良性到恶性的发展过程中,TGF-β1和Smad4的表达水平逐渐增高(P<0·001,P<0·05);肿瘤分化程度降低,TGF-β1的表达水平增高(P<0·001)。TβRⅡ表达在不同阶段和组织学类型的宫颈病变中无显著差异(P>0·05)。E7蛋白阳性者TGF-β1的表达水平较阴性者高(P<0·05),而TβRⅡ和Smad4的表达则无显著差异(P>0·05)。结论:TGF-β1在宫颈病变中的表达与病变良恶性和肿瘤分化程度有关,TGF-β1高表达是宫颈恶性肿瘤的表现之一;HPV-16感染可能影响到TGF-β1/Smads信号传导通路的功能。 展开更多
关键词 宫颈肿 宫颈上皮内 宫颈炎 人乳头病毒16e7蛋白 TGF-β1/Smads传导通路
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宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7基因的DNA改组
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作者 李艳佳 张佃财 焦建丽 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期420-422,共3页
目的利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库。方法从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PC... 目的利用DNA改组技术进化人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)基因,建立HPV16E7基因突变体库。方法从宫颈癌标本中扩增出HPV16E7基因,用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)碎片化该基因,切割成50 bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮普通PCR扩增。结果电泳切胶回收获得与原片段大小相当的基因片段,改组结果较为成功。结论DNA改组在HPV16E7改组中的应用并成功,有利于从HPV16E7基因突变题库中筛选出高免疫原性的基因型别,并为进一步构建HPV治疗性疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒16e7基因 DNA改组 宫颈癌 人乳头病毒疫苗
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人乳头瘤病毒16型E6/E7基因shRNA真核表达载体构建及其对人宫颈癌SiHa细胞增殖及迁移能力的影响 被引量:6
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作者 阿比丹.吐尔汗江 杨润峰 +3 位作者 王恬 李莎 栗妍 项涛 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期392-396,共5页
目的构建针对人乳头瘤病毒16型E6/E7基因的shRNA真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的人宫颈癌SiHa细胞系并探讨其对SiHa细胞增殖及迁移能力的影响。方法合成3条特异性干扰HPV16 E6/E7基因的shRNA片段并定向插入psilencer 2.1-U6 hygro... 目的构建针对人乳头瘤病毒16型E6/E7基因的shRNA真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的人宫颈癌SiHa细胞系并探讨其对SiHa细胞增殖及迁移能力的影响。方法合成3条特异性干扰HPV16 E6/E7基因的shRNA片段并定向插入psilencer 2.1-U6 hygro载体,构建重组质粒psilencer 2.1-U6hygro-shE6/E7并转染入人宫颈癌SiHa细胞,Real-time PCR检测转染后细胞E6/E7 mRNA的表达,选择沉默效应最好的重组质粒并用潮霉素B稳筛,获得稳定表达重组质粒的SiHa细胞,并用real timePCR和Western blot方法进行鉴定;分别运用CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕愈合实验检测细胞的增殖及迁移能力。结果测序证实针对HPV16 E6/E7的shRNA真核表达载体psilencer 2.1-U6 hygro-shE6/E7构建正确;转染psilencer 2.1-U6 hygro-shE6/E7的SiHa细胞HPV16 E6/E7表达明显受抑,同时其增殖及迁移能力也明显受抑制。结论 psilencer 2.1-U6 hygro-shE6/E7真核表达载体的成功构建并获得稳定沉默表达HPV16 E6/E7的人宫颈癌SiHa细胞系,证实沉默表达HPV16 E6/E7的SiHa细胞增殖及迁移能力会明显受到抑制,这为进一步研究HPV 16 E6/E7基因在宫颈癌发生发展过程中的功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 人乳头病毒16e6/e7 载体构建 细胞增殖 细胞迁移 宫颈癌
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印度尼西亚、苏里南、荷兰的宫颈癌患者中人乳头瘤病毒16型的E6、E7、L1变异型
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作者 De Boer M.A. Peters L.A.W. +1 位作者 Aziz M.F. 安妮 《世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册)》 2005年第1期56-57,共2页
Objective. Human papillomavirus type 16 (HPV 16) has several intratyp ic varian ts, and some are associated with enhanced oncogenic potential. For risk determin ation aswell as for future vaccine development, knowledg... Objective. Human papillomavirus type 16 (HPV 16) has several intratyp ic varian ts, and some are associated with enhanced oncogenic potential. For risk determin ation aswell as for future vaccine development, knowledge about variants is impo rtant. Regarding the geographical distribution of HPV variants and the lack of d ata from Indonesia and Suriname, we studied the prevalence of HPV 16 variants in cervical cancer in these high incidence countries. Data were compared with The Netherlands, a low-risk country. Methods. DNA samples from 74 formalin-fixed p araffin-embedded HPV 16-positive cervical carcinomas from Indonesia (Java, N = 22), Suriname (N = 25), and The Netherlands (N = 27) were amplified using prime rs specific for the E6, E7, and part of the L1 regions. Products were sequenced and analyzed. Results. A specific Javanese variant, with mutations 666A in E7 an d 6826T in L1, was found in 73%of the Indonesian samples, 56%having an additio nal mutation in the E6 open reading frame (ORF; 276G), giving the predicted amin o acid change N58S. This Javanese variant was also found in three Surinamese sam ples, which reflects what could be expected from migration of Javanese people to Surinam. Other non-European variants were identified in Indonesian, Surinamese , and Dutch samples in 14%, 28%, and 19%, respectively. Conclusion. The major ity of the HPV 16-positive cervical cancers in Indonesia are caused by a specif ic intratypic variant that was rarely found before in other countries. 展开更多
关键词 人乳头病毒 e6 e7 L1 变异 荷兰人 癌基因 变异 特殊 种特异性
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宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、人乳头瘤病毒16型E7蛋白表达及DNA病毒载量与调节性T细胞浸润的相关性分析 被引量:2
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作者 路玲 张媛媛 +3 位作者 徐瑶 吴宝华 徐蕾 吴海燕 《中国性科学》 2022年第9期54-59,共6页
目的 探究宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6、HPV16 E7蛋白表达及DNA病毒载量与调节性T(Treg)细胞浸润的相关性及临床意义。方法 选取成都医学院第一附属医院2018年1月至2020年1月84例行手术治疗的宫颈癌患者的癌组织作为宫颈癌组... 目的 探究宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6、HPV16 E7蛋白表达及DNA病毒载量与调节性T(Treg)细胞浸润的相关性及临床意义。方法 选取成都医学院第一附属医院2018年1月至2020年1月84例行手术治疗的宫颈癌患者的癌组织作为宫颈癌组,选取同一医院同期手术治疗的42例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的宫颈组织作为CIN组,另选取42例因子宫肌瘤行全子宫切除术的患者的正常宫颈组织作为正常组。对比分析三组组织中HPV16 E6、HPV16 E7蛋白表达及DNA病毒载量、Treg细胞浸润的情况。结果 宫颈癌组HPV16 E6、HPV16 E7蛋白阳性表达率及DNA病毒载量、Treg细胞占CD4~+T细胞比例均高于CIN组、正常组,CIN组上述指标均高于正常组(P<0.05);宫颈癌组织中HPV16 E6、HPV16 E7蛋白阳性表达率及DNA病毒载量与Treg细胞占CD4~+T细胞比例呈正相关(P<0.05);HPV16 E6、HPV16 E7蛋白阳性表达率及DNA病毒载量、Treg细胞占CD4~+T细胞比例与患者临床分期呈正相关,与组织学分级呈负相关(P<0.05)。结论 宫颈癌组织中HPV16 E6、HPV16 E7蛋白表达及DNA病毒载量与Treg细胞浸润具有正相关关系,且均与患者临床分期、组织学分级显著相关,可能对宫颈癌进展有联合预测价值。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头病毒16e6 人乳头病毒16e7 调节性T细胞
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人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用
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作者 司马妮 王薇 徐茜 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期369-369,共1页
通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞。利用RT-PCR和Western blot技术检测转... 通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞。利用RT-PCR和Western blot技术检测转染后E6、E7基因的mRNA和蛋白的变化,利用MTT法检测SiHa细胞转染后细胞增殖活性,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡情况。 展开更多
关键词 HPV16e6 SIHA细胞 反义RNA 人乳头病毒16 e7基因 逆转作用 人宫颈癌 诱导细胞凋亡
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人乳头瘤病毒-16E5蛋白的功能及E5蛋白与E6、E7蛋白的相互作用 被引量:3
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作者 项先旺 江彤 陈传俊 《中国临床保健杂志》 CAS 2015年第5期555-558,共4页
人乳头瘤病毒( HPV )是一种双链环状小DNA病毒,与一些恶性肿瘤密切相关,95%的宫颈癌的病例中都能检测到人乳头状病毒,口腔舌癌中HPV感染占60%。目前已发现的HPV亚型有180余种,根据HPV感染部位的不同分为皮肤型和黏膜型,黏膜型... 人乳头瘤病毒( HPV )是一种双链环状小DNA病毒,与一些恶性肿瘤密切相关,95%的宫颈癌的病例中都能检测到人乳头状病毒,口腔舌癌中HPV感染占60%。目前已发现的HPV亚型有180余种,根据HPV感染部位的不同分为皮肤型和黏膜型,黏膜型又可分为高危型人乳头瘤病毒和低危型人乳头瘤病毒。高危型(常见HPV-16,18,31,32,58)与黏膜恶性病变(如宫颈癌和口腔鳞癌)关系密切,低危型(常见HPV-6,11)则常与良性病变(如尖锐湿疣)有关[1]。高危型人乳头瘤病毒因高致癌性现研究较多,其主要含有3个致癌基因,分别为E5、E6和E7。在宫颈癌中可检测到E6和E7蛋白的持续表达,并且已证实了E6和E7能引起各种细胞的永生化[2],其机制是E6和E7分别抑制了p53和pRb的活性,从而引起正常组织细胞周期发生改变和细胞的恶性转化[3]。相对于E6和E7,E5蛋白因强疏水性和非免疫原性使其从蛋白水平上的检测难度加大,而且E5在细胞中表达水平较低,在肿瘤形成的早期阶段发挥作用,其本身也不能使人细胞永生化,在后期病毒基因整合到宿主时常常发生缺失[4],不同的是也有学者在一些恶性的宫颈癌细胞中检测到E5基因和E5蛋白的表达[5]。这些都造成了对E5的结构和功能的研究受到限制。近年来关于 HPV-16 E5蛋白研究表明其可以通过多种机制(包括与E6、E7的互助)参与细胞的恶性转化。 展开更多
关键词 高危人乳头病毒 e7蛋白 e6 相互作用 宫颈癌细胞 HPV-16 HPV感染 细胞永生化
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