尖锐湿疣病变的人乳头瘤病毒6型L1序列多态性分析

采用PCR方法从协和医院尖锐湿疣患者皮损中检测人乳头瘤病毒 (HPV) ,并通过限制性片断长度多态性分析分型发现 ,HPV6型为主要感染型别 ,其次是HPV11型。根据临床特征选择主要致病型HPV6 8个分离株 ,扩增L1晚期基因 ,构建重组测序质粒 ,双脱氧法测序并分析L1区的核苷酸和氨基酸序列变异状况。结果表明 ,HPV6L1基因序列发生碱基替换的区域主要有四个区 ,包括SR1(5 911～ 6 10 4 ) ,SR2 (6 2 17～ 6 2 73) ,SR3(6 5 4 0～6 6 6 1)和SR4 (70 6 2～ 72 5 0 )。少数的碱基替换导致错义突变 ,推导的蛋白质一级结构中有 0～ 3个氨基酸发生变异 。

重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒诱导中和抗体

为研究重组病毒样颗粒 (virus -likeparticle ,VLP)免疫血清的抗感染作用 ,用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV - 6 )L1VLP和HPV - 6L1+L2VLP免疫BALB/c小鼠 ,获得抗血清 ,ELISA法测定抗体滴度 ,在细胞水平和裸鼠异源组织移植模型中评价了免疫血清的中和病毒抗感染作用。VLP诱导了高滴度 ( >1∶10 0 0 0 )的血清抗体 ,抗血清可以特异地阻断人胚上皮细胞对VLP的摄入 ,并且能抑制从尖锐湿疣活检标本提取的HPV对人上皮组织的感染。重组HPV - 6VLP免疫小鼠诱导的血清抗体具有中和病毒、抑制感染的作用。提示重组VLP可以用于研制HVP预防性疫苗。

血清IL-5、IFN-及HPV6抗体水平与人乳头瘤病毒6型感染关系的研究

目的 :对人乳头瘤病毒 6型感染之女性生殖器尖锐湿疣 (GenitalWarts,GW)患者的血清白介素 - 5 (IL - 5 )、干扰素 - (IFN - )及特异性人乳头瘤病毒 6型 (HPV6 )抗体进行测定 ,进一步探讨尖锐湿疣的免疫学变化。 方法 :经PCR -DNA检测证实为HPV6型引起之女性生殖器尖锐湿疣组患者 6 0例 ,分为初发组 (n =30 )及复发组 (n =30 )。另设正常健康对照组 (n =30 )。用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定各组血清IL - 5、IFN - 及特异性血清抗HPV6抗体水平。结果 :患者血清IL - 5水平初发组 (3.16± 1.32pg/ml)、复发组 (2 37± 0 94pg/ml)均高于正常对照组 (1.71± 0 .87pg/ml) ,(P<0 .0 1) ;而GW复发组血清IL - 5水平低于初发组 (P <0 .0 1) ;患者血清IFN - 水平初发组 (3.4 3± 0 .2 1pg/ml)、复发组(1.6 2± 0 .10gp/ml)均低于正常对照组 (5 .90± 0 .2 5pg/ml) (P <0 .0 1) ;复发组血清IFN - 水平比初发患者更低 (P <0 .0 1) ;患者血清HPV6抗体水平初发组 (OD :0 .995± 0 .2 75 )、复发组 (OD :0 .5 19± 0 .16 0 )均高于正常对照组 (OD :0 .2 85± 0 .0 78) (P <0 .0 5 ) ;而复发组血清抗 -HPV6低于初发组 (P <0 .0 5 )。结论 :尖锐湿疣组患者血清的IFN - 水平降低 ,而IL- 5水平相对增高 。

人乳头瘤病毒6型E7与结核杆菌热休克蛋白70融合基因的构建及原核表达

目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插入HSP70基因的5'端,构建HPV6E7与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E7-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,进行诱导表达和分离纯化。结果:成功地构建了pGEX-E7-HSP70原核表达质粒;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,经异丙醇-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达相对分子质量约为108000的蛋白;经谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达系统纯化,得到E7与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论:成功获得HPV6型E7与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究该融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用奠定了基础。

人乳头瘤病毒6型L1基因的克隆和表达及鉴定

克隆人乳头瘤病毒6型（HPV-6）保护性抗原L1基因。构建L1基因表达载体。从临床诊断尖锐湿疵的病理组织标本中提取HPV-6的DNA，采用高保真PCR扩增其保护性抗原L1基因，T-A克隆后测定核苷酸序列。构建pET32a的L1表达载体，在E．coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE鉴定表达产物。所克隆的L1基因与报道的相应核苷酸序列同源性为99．20％～99．93％，氨基酸序列同源性高达99．80％～100％。SDS-PAGE结果显示，在构建的载体中成功表达预计大小分子量的融合蛋白，成功构建了HPV-6的保护性基因L1的表达系统。

人乳头瘤病毒6型L1基因的克隆及蛋白表达

目的:在大肠杆菌中表达经密码子优化的人乳头瘤病毒6型(HPV6)L1的融合蛋白。方法:PCR方法扩增HPV6L1基因,测序及序列比对后,对基因进行密码子优化并合成优化后的基因HPV6 mL1,将其克隆入原核表达载体pGEX4T-1,IPTG诱导融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,SDS-PAGE鉴定表达产物。结果:酶切和测序结果证实HPV6 mL1基因的原核表达载体构建正确;以1mmol/L IPTG于37℃诱导4h,蛋白以包涵体形式表达;表达产物的相对分子质量与预期值一致,为80000。结论:获得大肠杆菌表达的HPV6L1蛋白,为其结构功能研究和疫苗研发提供了基础。

生殖器上皮组织人乳头瘤病毒6型E7蛋白在感染初期和复发组织中的转归

目的检测尖锐湿疣（CA）感染组织中人乳头瘤病毒（HPV）6型E7蛋白的表达情况及病毒复发转归的意义。方法152例的CA患者组织采用聚合酶链反应荧光法及S-P免疫法对初发和复发CA患者的活检组织和健康对照组织进行检测，HPV6型E7早期蛋白主要位于细胞核内呈棕黄色伴少许胞质着色为阳性，阳性率大于或等于15％者为阳性组织。结果152例CA患者中有91例HPV6型感染，感染率为59．9％。其中56例为初发患者，35例为复发患者；18～38岁53例，38～48岁26例，48～60岁12例；男52例，女39例。56例初发患者HPV6型E7蛋白阳性表达率为69．5％，35例复发患者的活检组织HPV6型E7蛋白阳性表达率为71．4％。27例正常宫颈上皮组织中HPV6型E7蛋白阳性率为0％，HPV6型E7蛋白在初发CA组织与正常宫颈组织比较以及复发CA组织与正常宫颈组织比较差异有统计学意义（P〈0．001）。初发与复发CA组织相比较率差异无统计学意义（P〉0．05）。HPV6型E7蛋白在不同年龄段阳性表达率分别为：53例18～38岁患者的阳性率为71．7％，26例38～48岁患者的阳性率为69．2％，12例48～60岁患者的阳性率为66．7％，不同年龄段阳性率差异无统计学意义（P〈0．05）；52例男性患者中阳性率为75．0％，39例女性患者中为64．1％，阳性表达与性别无关（P〉0．05）。结论HPV6型是CA的主要致病因素之一，HPV6型早期蛋白E7在HPV6型感染的CA初发和复发组织中的表达和在正常生殖上皮组织中的表达差异有统计学意义，和年龄、性别无关；HPV6型早期蛋白E7的含量与其病情有着必然联系。

孕妇人乳头瘤病毒6型-DNA荧光定量PCR检测

目的:旨在检测泉州地区孕妇人乳头瘤病毒感染情况,并探讨其流行特点。为进一步阻断传染源,降低发病率,提高临床诊疗水平,提供有价值的量化指标。方法:应用实时荧光定量PCR新技术对泉州地区1000例孕妇宫颈分泌物人乳头瘤病毒6型-DNA,进行量化检测。结果:检测阳性患者384例,阳性率为38.4%(384/1000),患者每毫升拷贝数的范围位于1.10×102～8.56×108之间。结论:检测结果显示孕妇人乳头瘤病毒感染率较高,为38.4%。相对目前国内检测方法,该方法是目前检测孕妇HPV感染的比较敏感、特异、快速、正确、可靠、稳定的技术。

应用噬菌体展示制备人乳头瘤病毒6型L1蛋白中和性单克隆抗体

目的制备人乳头瘤病毒6型L1(HPV6 L1)蛋白特异性单克隆抗体, 探索抗体的结合特点、交叉活性以及中和效果。方法从免疫HPV6 L1蛋白小鼠脾细胞中提取抗体基因, 构建ScFv噬菌体抗体文库。用HPV6 L1蛋白对文库进行富集筛选, 将获得的抗体基因表达成鼠IgG后, 验证抗体与L1蛋白的结合性质以及对假病毒的中和效果。结果成功构建了针对HPV6 L1的ScFv抗体文库, 库容量为6.54×10^(7)。抗体文库经HPV6 L1筛选后获得了两株抗体, 命名为Q9和Q11。经ELISA检测, Q9-IgG与HPV6 L1反应的滴度约为10^(6), 与HPV18和45 L1的滴度为10^(2)。Q11-IgG与HPV6 L1结合的滴度约为4×10^(4), 而与其他型别L1均不结合。经过假病毒中和试验测定, Q9-IgG没有中和活性, 而Q11-IgG针对HVP6假病毒的中和滴度约为10^(4).5。结论 Q9和Q11均为HPV6 L1特异性单克隆抗体, 但二者交叉反应性、抗原识别位点及中和活性均具有明显差异。该抗体可为HPV6病毒的基础研究、免疫学诊断以及治疗制剂研发提供工具抗体。

重组人乳头瘤病毒6型病毒样颗粒的免疫原性分析

目的 研究重组人乳头瘤病毒 6型 (humanpapillomavirustype 6 ,HPV 6 )病毒样颗粒(virus likeparticle ,VLP)的免疫原性。方法 重组杆状病毒在昆虫细胞中表达制备的HPV 6L1VLP(L1 VLP)和HPV 6L1+L2VLP(L1+2 VLP)经鉴定后 ,用于免疫BALB/c小鼠 ,对诱导的体液免疫和细胞免疫反应进行了检测。结果 电镜观察显示L1 VLP和L1+2 VLP二者形态上无明显差异 ,为圆形颗粒 ,直径约 5 0nm ,SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,L1+2 VLP中L1和L2蛋白摩尔比例为 4∶1。用ELISA法测定免疫小鼠血清抗体滴度 ,加佐剂L1 VLP免疫组和加佐剂L1+2 VLP免疫组血清针对HPV 6L1VLP的滴度在 1∶10 0 0 0以上 ,高于未加佐剂组免疫血清滴度 (1∶2 0 0 0 ) ,L1+2 VLP免疫诱导出了特异于L2抗原的抗体。血清抗体主要识别HPV 6构象依赖性抗原表位 ,与HPV 11抗原显示出一定的交叉反应 ,而与HPV 16无明显交叉反应。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经HPV 6L1VLP再激活后出现了特异性增殖反应 ,3H TdR掺入值与未免疫组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,L1 VLP和L1+2 VLP两组间差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,L1 VLP和L1+2 VLP免疫组刺激指数 (SI)分别为 6 .4和 6 .2 ,阴性对照组SI为 1.1。HPV 6L1VLP再刺激特异地诱导免疫组脾淋巴细胞IL 2和IL 10分?

人乳头瘤病毒6型L1蛋白的原核表达及免疫原性评价

目的确定原核表达系统中人类乳头瘤病毒6型(human papillomavirus 6,HPV6)L1蛋白的最佳表达条件,并对HPV6 L1 VLP免疫小鼠后产生的中和抗体水平进行评价。方法将密码子优化的HPV6 L1基因片段与原核表达载体pET30a(+)连接,构建重组表达质粒pET30a-6L1,在大肠埃希菌中表达HPV6 L1蛋白,并通过添加分子伴侣(TF、GroES-GroEL、DnaK-DnaJ-GrpE)筛选能够增加目的蛋白表达的最佳条件。将表达的HPV6 L1蛋白经密度梯度离心、阳离子交换层析后获得纯化蛋白,对其形态进行表征。将纯化的HPV6 L1 VLP免疫BALB/c小鼠,采用假病毒中和试验检测小鼠血清中和抗体水平。结果质粒pET30a-6L1经双酶切鉴定证明构建正确;添加TF分子伴侣时HPV6 L1蛋白表达量最高;HPV6 L1 VLP是呈均一的、直径45~65 nm的球状结构,与HPV6天然病毒颗粒的形态、大小相似;HPV6 L1 VLP初次免疫小鼠第8周,血清抗体水平达到峰值,为105以上。结论分子伴侣TF促进了HPV6 L1蛋白的可溶性表达,纯化后的目的蛋白免疫原性良好。本研究为后续各型别HPV L1蛋白表达工艺的探索提供了思路,也为下一步的中试扩大培养奠定了基础。

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV

靶向人乳头瘤病毒16型-E6的siRNA对宫颈癌肿瘤生长的影响

目的研究靶向HPV16-E6的小分子干扰RNA抑制宫颈癌裸鼠移植瘤的生长。方法建立裸鼠宫颈癌模型,HPV16-E6siRNA瘤体内多点注射观察肿瘤的生长情况,使用HE染色方法观察肿瘤组织细胞在pSiRNA或pCON治疗后的病理学改变;免疫组化采用SP法。结果靶向HPV16-E6的小分子干扰RNA能显著抑制宫颈癌裸鼠移植瘤的生长。结论利用宫颈癌裸鼠移植瘤模型,证明靶向HPV16-E6的siRNA能够显著抑制宫颈癌裸鼠移植瘤的生长。

1株人乳头瘤病毒6型山东地方株的全基因组序列分析

人乳头瘤病毒6型(Human papillomavirus type 6,HPV6)是引起生殖器疣与复发性喉乳头瘤的主要病原体之一。为明确2019年济南市1例尖锐湿疣患者的病毒基因组序列特征,本研究提取其尖锐湿疣组织标本总DNA,分两段进行HPV6全基因组PCR扩增和步移法Sanger测序,将拼接后的序列与全球36条不同来源的HPV6全基因组序列进行对比分析。结果显示,1013/19/JN/CHN/HPV6株(以下简称1013/HPV6)基因组全长8031bp,属于变异谱系B1,与全球不同地区HPV6分离株序列的同源性为98.4%~99.9%。1013/HPV6株与B1亚谱系参考株AF092932全基因组序列相比具有19个核苷酸变异位点,分布在7个开放阅读框架(Open Reading Frames,ORFs)和非编码区内。本研究首次分析了分离自中国大陆的HPV6全基因序列特征,研究结果为HPV分子进化的进一步研究和分型诊断试剂的优化提供了数据。

人乳头状瘤病毒16型E6蛋白在食管癌中的表达及与Cyclin D1的关系

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)16型E6蛋白在食管癌中的表达及与细胞周期蛋白Cyclin D1的关系。方法采用免疫组织化学法检测50例食管鳞癌组织、30例食管癌旁组织及30例正常食管黏膜组织中HPV 16型E6蛋白的表达情况,采用Western blot方法检测Cyclin D1在HPV 16型E6蛋白阳性及阴性的食管鳞癌组织中的表达水平。结果食管鳞癌组织中HPV 16型E6蛋白的阳性表达率高于正常食管黏膜组织(P<0.05),与食管癌旁组织差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤最大径较大者、肿瘤浸润较深者、淋巴结转移者HPV 16型E6蛋白的阳性表达率均较高(P<0.05)。HPV 16型E6蛋白阳性的食管鳞癌组织中Cyclin D1蛋白表达量高于阴性者(P<0.05)。结论 HPV 16型E6蛋白可能促进了食管癌的生长和恶化,并与Cyclin D1有一定的相关性,可作为食管癌的预后评估因子,为临床治疗提供一定的参考依据。

山东省8例尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6型全基因组序列分析

目的分析山东省人乳头瘤病毒6型(Human papillomavirus type 6,HPV6)全基因组序列谱系和变异。方法于2019年在山东省3家哨点医院采集尖锐湿疣患者肛门拭子,提取HPV6 DNA进行PCR扩增和测序,对获得的HPV6全基因组序列进行同源性、系统进化和变异分析。结果本研究获得8条HPV6全基因组序列,其中5条属于A谱系,3条属于B1谱系;8条HPV6序列共发生165个核苷酸变异,错义突变率为22.4%(37/165);8条序列的核苷酸同源性为98.48%-99.99%;A谱系和B1谱系的核苷酸变异数分别为109个、56个,错义突变率分别为14.7%(16/109)、37.5%(21/56);两个谱系中E6、E7和E4编码区未发生或极少发生突变。结论山东省尖锐湿疣患者HPV6流行株为A谱系和B1谱系,与全球HPV6流行谱系分布一致;A谱系比B1谱系更保守。

信号诱导增殖相关蛋白1和16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探讨信号诱导增殖相关蛋白1(SIPA1)和16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白(HPV16/18E6)在宫颈癌中的表达及其与临床病理之间的关系。方法:Western blot检测宫颈癌C33A、HT3、SiHa、HeLa和CaSki细胞株中HPV16/18E6和SIPA1蛋白表达;免疫组织化学Envi-sion法检测正常宫颈组织(40例)和宫颈癌组织(174例)石蜡标本中HPV16/18E6和SIPA1蛋白;分析SIPA1和HPV16/18E6相互之间及其与宫颈癌盆腔淋巴结转移之间的关系。结果:宫颈癌细胞系中SIPA1与HPV16/18E6表达呈负相关。SIPA1在正常宫颈组织和宫颈癌组织中阳性率分别为87.5%和58.6%,差异有高度统计学意义(χ2=11.78,P=0.001);SIPA1蛋白在有和无盆腔淋巴结转移时阳性率分别为19.0%和71.2%,差异有高度统计学意义(χ2=21.45,P=0.000),且SIPA1阴性者发生淋巴结转移风险高于阳性者(OR=5.011,95%CI2.311～10.866,P<0.01)。HPV16/18E6在正常宫颈组织和宫颈癌组织中的阳性率分别为30.0%和79.3%,差异有高度统计学意义(χ2=37.72,P=0.000);HPV16/18E6在有和无淋巴结转移时阳性率分别为97.6%和73.5%,差异有高度统计学意义(χ2=11.31,P=0.001),HPV16/18E6阳性者淋巴结转移风险高于阴性者(OR=14.794,95%CI1.960～111.634,P<0.01)。宫颈癌组织中SIPA1与HPV16/18E6蛋白呈负相关(r=-0.249,P<0.001)。结论:SIPA1蛋白表达与HPV感染有关,HPV16/18E6有抑制SIPA1表达的作用,SIPA1在抑制宫颈癌的淋巴结转移中发挥着重要作用,可作为宫颈癌盆腔淋巴结转移的早期预测因子。

16型人乳头瘤病毒E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变发展中的表达及意义

目的研究16型人乳头瘤病毒(HPV16)E6、E7蛋白和端粒酶在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织的表达,探讨其与宫颈癌前病变恶性进展间的关系,为寻找预测宫颈癌前病变转归方向的分子指标做一探索。方法采用免疫组织化学EnVision二步法检测30例原发性浸润性宫颈癌(ICC组,n=30)、CIN[CINⅠ-Ⅱ组,n=60;CINⅢ(含原位癌)组,n=30]、正常宫颈组织标本(正常组,n=10)中HPV16E6、E7蛋白和端粒酶的表达。结果 HPV16E6、E7蛋白和端粒酶在正常组、CINⅠ-Ⅱ组、CINⅢ组和ICC组中的阳性表达均呈逐级增高趋势。HPV16E6蛋白的表达:ICC组高于正常组,CINⅢ组高于正常组、CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05);HPV16E7蛋白的表达:ICC组、CINⅢ组高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);端粒酶的表达:ICC组高于CINⅢ组,CINⅢ组高于CINⅠ-Ⅱ组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HPV16E6与HPV16E7蛋白、HPV16E6蛋白与端粒酶、HPV16E7蛋白与端粒酶的表达呈正相关(r=0.272,P<0.05;r=0.279,P<0.05;r=0.376,P<0.01)。结论 HPV16E6、E7蛋白和端粒酶随宫颈病变CIN的升级其阳性表达率、表达强度呈逐渐递增趋势。在宫颈癌变过程中HPV16E6、E7蛋白和端粒酶的阳性表达均呈正相关。HPV16E6、E7蛋白和端粒酶作为CIN的预后因子还尚待进一步研究。

抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响

目的研究抗HPV16E6核酶(Ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R和CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,northern杂交检测三种细胞中E6基因的表达;细胞生长曲线检测细胞生长的改变;TRAP-Elisa法检测端粒酶活性。结果点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P和CaSKi明显降低。CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P和CaSKi明显减慢(P<0.01);CaSKi,CaSKi-P和CaSKi-R三种细胞的端粒酶活性分别为0.89±0.14,0.90±0.11,0.36±0.06,转染了抗HPV16E6核酶的CaSKi-R的端粒酶活性的抑制率为59.55%。经统计学处理,CaSKi-R的端粒酶活性较CaSKi和CaSKi-P细胞明显下降(P<0.01)。结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,端粒酶活性较前明显下降。

人乳头瘤病毒l6型E6-E7融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定

目的构建人乳头瘤病毒l6型(HPV16)E6-E7融合蛋白真核表达载体,为研究其基因疫苗免疫活性奠定实验基础。方法 PCR扩增HPV16 E6-E7基因片段,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7,双酶切及测序鉴定。将质粒转染HeLa细胞,RT-PCR鉴定E6-E7基因在HeLa细胞中的表达。提取质粒免疫小鼠,利用免疫组化方法检测在其肌肉组织中的表达。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7;在转染pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7的细胞中检测到HPV16 E6-E7基因。在免疫该质粒的小鼠肌肉组织中可以检测到该质粒的蛋白表达。结论成功的构建的了真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16 E6-E7,该载体能在HeLa细胞内以及小鼠骨骼肌细胞内有效表达。