人乳头瘤病毒L1壳蛋白在宫颈脱落细胞中的表达及其临床意义

目的：研究人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）L1壳蛋白在各级宫颈病变脱落细胞中的表达及其临床意义。方法：选择2013年7月至2015年3月,重庆市妇幼保健院宫颈病专科薄层液基细胞学检测（thinprep cytologic test,TCT）结果异常和/或高危型HPV-DNA检测[采用第二代杂交捕获法（hybrid captureⅡ,HC-2）]结果阳性,且阴道镜检查疑有宫颈病变的妇女共248例,所有研究对象均行HPV L1壳蛋白检测及宫颈活检,并对患者进行跟踪研究。结果：在正常宫颈、宫颈上皮内病变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅰ级、CINⅡ/Ⅲ级和宫颈鳞癌（squamous cell carcinoma,SCC）患者中,HPV L1壳蛋白阳性率分别为13.04%（3/23）、28.36%（19/67）、11.92%（18/151）、0%（0/7）,其中CINⅠ组L1壳蛋白阳性表达率明显高于CINⅡ/Ⅲ组,差异有统计学差异（χ2=8.898,P=0.003）。将患者以年龄30岁为界分为2组,在年龄〈30岁组（共76例）中,各组织学分组之间L1壳蛋白阳性表达率差异均无统计学意义;在年龄≥30岁组（共172例）中,CINⅠ组（13/45,28.89%）与CINⅡ/Ⅲ组（12/104,11.54%）比较L1壳蛋白阳性表达率明显增高,差异有统计学意义（χ2=6.772,P=0.009）;HPV负荷量〉100 RLU/CO组HPV L1壳蛋白表达率（27/82,32.93%）高于HPV负荷量≤100 RLU/CO组（13/166,7.83%）,差异有统计学意义（χ2=25.553,P=0.000）;83例CIN患者随访12～24个月,HPV L1壳蛋白表达阴性组病变进展率（23/62,37.10%）大于阳性表达组（2/21,9.52%）,差异有统计学意义（χ2=4.432,P=0.035）。结论：HPV L1壳蛋白在CINⅡ/Ⅲ中阳性表达率较CINⅠ呈下降趋势,HPV L1壳蛋白阳性表达组病变进展率低,可作为预测宫颈病变进展风险的临床参考指标。

人乳头瘤病毒L1及人端粒酶RNA基因在高危型人乳头瘤病毒阳性子宫颈脱落细胞中的表达

目的:分析高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)阳性患者子宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒L1基因(L1)及人端粒酶RNA基因(h TERC)的表达情况。方法:自就诊于我院和温州医科大学二附院HPHPV阳性者中,选取90例宫颈组织正常者作为A组,选取90例宫颈上皮内瘤变者作为B组,选取90例宫颈癌者作为C组,对比分析三组间L1及h TERC表达情况。结果:三组间L1位点中Cp G-1、Cp G-2及Cp G-3位点的甲基化水平间存在显著差异,均以C组水平最低,以A组水平最高(P<0.05)。三组间h TERC阳性表达率存在显著差异,C组阳性表达率为83.33%最高,A组阳性表达率为26.67%最低(P<0.05)。结论:在HP-HPV阳性者中,以宫颈癌者L1位点中Cp G-1、Cp G-2及Cp G-3位点的甲基化水平及h TERC阳性表达率最高。

人乳头瘤病毒L1壳蛋白与宫颈上皮内瘤变治疗后高危型人乳头瘤病毒持续感染的相关性

目的：探讨宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia，CIN）患者治疗前人乳头瘤病毒L1（humanpapillomaviruslate1,HPV-L1）壳蛋白的表达能否成为预测治疗后疾病转归的指标。方法：通过免疫组化法检测CIN患者治疗前HPv-L1壳蛋白表达：通过导流杂交基因芯片技术检测CIN患者高危型人乳头瘤病毒（high-riskhumanpapillomavims，HR-HPV）DNA的表达。结果：（1）CIN患者3种治疗方法比较，HR．HPV持续感染率差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）治疗前CINI的涂片中HPV-L1壳蛋白阳性表达率为75．00％，CINⅡ-Ⅲ的涂片中HPV-L1壳蛋白阳性表达率为36．13％，两者比较差异有显著统计学意义（P〈0．05）。（3）治疗前HPv-L1壳蛋白阳性的CIN患者，术后12个月随访中HR-HPV持续感染率为5．97％：而治疗前HPV-L1壳蛋白阴性的CIN患者．术后12个月随访中HR-HPV持续感染率为19．05％。两组比较差异有显著统计学意义（P〈0．05）。（4）CIN患者治疗前HPV-L1壳蛋白表达与治疗后12个月HR-HPV持续感染呈负相关。结论：CIN患者治疗前HPV-L1壳蛋白的检测有可能成为评估CIN患者治疗后预测疾病转归的指标。

人乳头瘤病毒L1壳蛋白预测宫颈上皮内瘤变患者预后的研究

目的探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）患者治疗前人乳头瘤病毒（HPV）-L1壳蛋白的表达能否成为预测治疗后疾病转归的指标。方法通过免疫组化法检测CIN患者治疗前HPV-L1壳蛋白表达，把CIN患者分为两组：CINⅠ级组、CINⅡ~Ⅲ级组。治疗后12个月通过导流杂交基因芯片技术检测高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）DNA的表达。结果治疗前CINⅠ的涂片中HPV-L1壳蛋白阳性表达率为75.00％，CINⅡ~Ⅲ的涂片中HPV-L1壳蛋白阳性表达率为36.13％，两者比较差异有统计学意义（χ2=15.43，P＜0.05）。CINⅠ级组：术前HPV-L1壳蛋白阳性的患者在术后12个月随访过程中，HR-HPV持续感染阳性率为0％，而术前HPV-L1壳蛋白阴性的患者，术后HR-HPV持续感染阳性率为25.00％。两者比较差异有统计学意义（χ2=6.40，P＜0.05）；CINⅡ~Ⅲ级组：术前HPV-L1壳蛋白阳性的患者，术后12个月随访过程中，HR-HPV持续感染阳性率为2.33％；而术前HPV-L1壳蛋白阴性的患者，术后HR-HPV持续感染阳性率为22.37％。两者比较差异有统计学意义（χ2=6.44，P＜0.05）。结论 CIN患者治疗前HPV-L1壳蛋白的检测有可能成为评估CIN患者治疗后预测疾病转归的指标。

宫颈鳞状上皮病变中人乳头瘤病毒L1蛋白与P16、Ki-67的表达及意义

目的：研究宫颈鳞状上皮病变中人乳头瘤病毒（HPV）L1蛋白与P16、Ki-67的表达,探讨HPV L1蛋白与P16、Ki-67在宫颈病变发展过程中的意义。方法：采用免疫组织化学（IHC）方法检测宫颈鳞状上皮病变230例〔其中尖锐湿疣50例,宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ级60例,CINⅡ-Ⅲ级95例,浸润性鳞状细胞癌25例〕中HPV L1蛋白与P16、Ki-67的表达情况,并研究其相关性。结果：宫颈鳞状上皮病变中HPV L1的阳性率为43.91%。其中在尖锐湿疣中HPV L1的阳性率为62.00%,在CINⅠ中HPV L1的阳性率为70.00%,在CINⅡ-Ⅲ中HPV L1的阳性率为29.47%,浸润性鳞状细胞癌中无表达;宫颈鳞状上皮病变中P16的阳性率为76.52%,在尖锐湿疣中P16的阳性率为30.00%,在CINⅠ中P16的阳性率为70.00%,在CINⅡ-Ⅲ中P16的阳性率为98.95%,浸润性鳞状细胞癌中P16的阳性率为100.00%;宫颈鳞状上皮病变中Ki-67的阳性率为76.08%,在尖锐湿疣中Ki-67的阳性率为28.00%,在CINⅠ中Ki-67的阳性率为68.33%,在CINⅡ-Ⅲ中Ki-67的阳性率为100.00%,浸润性鳞状细胞癌中Ki-67的阳性率为100.00%。HPV L1的阳性率随宫颈病变的发展而呈下降趋势,P16、Ki-67的阳性率则呈现升高趋势。结论：HPV L1与宫颈鳞状上皮内瘤变密切相关;抑癌基因P16蛋白的表达上调参与宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程;联合检测HPV L1、P16、Ki-67对宫颈上皮内瘤变的诊断及分级具有重要意义。

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义

目的：探讨人乳头状瘤病毒L1壳蛋白和人端粒酶RNA基因联合检测在宫颈癌筛查中的意义。方法选取2012年10月～2014年10月新疆医科大学第一附属医院行宫颈癌筛查的患者627例，先行液基细胞学检查，后行阴道镜检查并取活检，同时行人乳头状瘤病毒L1壳蛋白检测和人端粒酶RNA基因检测。分析不同病症间临床指标的变异情况。结果未见上皮病变或恶性改变（NILM）、意义不明的不典型鳞状细胞与不典型腺细胞（ASC-US）、不除外高度鳞状上皮内病变的的不典型鳞状细胞（ASC-H）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）、鳞状细胞癌（SCC）、腺癌（AC），人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、42.9%、51.0%、80.6%、47.4%、5.9%、0.0%，差异有高度统计学意义（χ2=93.770，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在LSIL达到最高点，在AC降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、19.9%、36.3%、51.6%、94.7%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=279.564，P〈0.01），呈持续升高趋势，在SCC与AC达到最高点。依正常、炎症、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ期、CINⅡ期、CINⅢ期、宫颈癌顺序，人乳头状瘤病毒L1壳蛋白阳性表达率分别为18.6%、46.1%、80.6%、53.3%、25.0%、3.6%，差异有高度统计学意义（χ2=93.015，P〈0.01），呈先升高后降低趋势，在CINⅠ期达到最高点，在宫颈癌降至最低点；人端粒酶RNA基因阳性表达率分别为0.0%、26.4%、51.6%、93.3%、100.0%、100.0%，差异有高度统计学意义（χ2=269.582，P〈0.01），呈持续升高趋势，在CINⅢ期达到最高点。结论人乳头状瘤病毒L1壳蛋白联合人端粒酶RNA基因检测，在宫颈癌前病变中具有较高的指导价值。

人乳头状瘤病毒L1壳蛋白对宫颈癌前病变及宫颈癌的诊断价值分析

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）LI壳蛋白在不同宫颈病变中的表达情况及相关性。方法选择2011年1月-2013年1月于新疆维吾尔自治区人民医院妇科就诊的高危型HPV阳性宫颈病变患者171例作为研究对象．其中慢性宫颈炎组23例，宫颈上皮内瘤变组121例（CINI组48例、CINII组34例、CINIII组39例）、宫颈鳞状细胞癌（SCC）组患者27例，采用免疫组化方法检测HPVL1壳蛋白在5种宫颈病变组织的表达情况。结果171例患者中，HPVL1阳性表达63例，阳性率为36．8％，其中在慢性宫颈炎患者中，HPVL1蛋白阳性表达为17例，阳性率为73．9％；CINI患者中，HPVL1蛋白阳性表达为32例，阳性率为66．7％；CINⅡ患者中，HPVLl蛋白阳性表达为12例，阳性率为35．3％；CINUI患者中，HPVL1蛋白阳性表达为2例，阳性表达率为5．1％，SCC组中无HPV L1蛋白表达。五组患者HPVL1蛋白阳性表达率整体比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；炎症组与CINII组、CINIII组、SCC组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；CINI组与CINII组、CINIII组、SCC组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。以患者的病理检查结果作为金标准，绘制ROC曲线，面积为0．799，标准误为0．062，95％CI为0．677—0．921，灵敏度为0．769，特异度为0．750。结论HPVL1壳蛋自在宫颈上皮内瘤变中的阳性表达随病变程度的加重而呈下降趋势。提示其有望成为预测宫颈癌前病变程度的标志物，对于宫颈癌前病变的筛查和预防具有重要的意义。

HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用

目的了解HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用。方法对同时行HPV-DNA分型检测、HPVL1检测以及宫颈细胞学筛查的520例志愿者的结果进行分析和总结。结果在HPV-DNA低危亚型阳性患者中,HPVL1均为阳性;HPV-DNA高危亚型阳性者中有62.10%HPVL1为阴性;阴道镜及病理诊断结果发现,HPV-DNA高危亚型阳性且HPVL1检测结果阴性的患者宫颈活检病变处于CINⅠ者占57.35%,CINⅡ及以上者占26.47%。结论 HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中有明确的指导价值,结合HPV-DNA分型检测意义更大;对高危阳性而HPVL1为阴性患者应警惕宫颈病变的发生。

人乳头瘤病毒18型L1蛋白的包涵体和可溶性表达及纯化

目的:原核表达系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,建立包涵体和可溶性表达的L1蛋白的纯化方法。方法:构建重组表达质粒p GEX-4T-1-HPV18 L1,在大肠杆菌BL21中以包涵体和可溶性方式表达HPV18 L1蛋白。通过超声波破碎菌体、洗涤包涵体、碱变性、透析复性和谷胱甘肽(GST)琼脂糖凝胶4B亲和层析纯化包涵体蛋白;在菌体中加入三磷酸腺苷(ATP)和3.5 mol/L尿素孵育后,GST 4B亲和层析纯化可溶性蛋白,凝血酶酶切。SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达和纯化产物。结果:SDS-PAGE结果表明,HPV18 L1蛋白以包涵体和可溶性方式在大肠杆菌BL21内高效表达,均产生相对分子质量约为86 000的HPV18 L1-GST融合蛋白。Western印迹结果显示,包涵体纯化后获得的融合蛋白降解条带较多;而可溶性蛋白纯化后获得的融合蛋白未降解,凝血酶酶切后得到HPV18 L1蛋白,可与HPV18 L1蛋白单克隆抗体结合。结论:采用原核系统表达了HPV18 L1-GST融合蛋白,分别建立了包涵体和可溶性蛋白的纯化方法,获得HPV18 L1蛋白,为其进一步应用奠定了基础。

鳞状细胞癌相关抗原联合人乳头瘤病毒蛋白L1在宫颈癌诊断中的应用

目的研究鳞状细胞癌相关抗原(SC-CA)联合人乳头瘤病毒蛋白L1(HPVL1)在宫颈癌诊断中的应用价值。方法选取从2013年2月～2018年2月收治的疑似宫颈癌患者96例为观察对象。采用微粒酶免疫检测技术检测所有患者血清SC-CA水平,采用免疫组织化学法检测所有患者HPVL1表达情况。以手术病理诊断为金标准,分析血清SC-CA水平、HPVL1以及两者联合诊断宫颈癌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值情况。此外,比较不同病理分期宫颈癌患者的血清SC-CA水平以及HPVL1阳性率。结果以病理诊断为金标准,SC-CA诊断宫颈癌的灵敏度为87.10%,特异度为79.41%,阳性预测值为88.52%,阴性预测值为77.14%。HPVL1诊断宫颈癌的灵敏度为82.26%,特异度为82.35%,阳性预测值为89.47%,阴性预测值为71.79%。SC-CA联合HPVL1诊断宫颈癌的灵敏度为98.39%,特异度为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为97.14%。分化程度G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者SC-CA水平低于分化程度G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者(P <0.05);分化程度G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者HPVL1阳性率高于分化程度G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者(P <0.05)。结论 SC-CA联合HPVL1应用于宫颈癌的诊断中可显著提高灵敏度、特异度、阳性预测值以及阴性预测值。

人乳头瘤病毒16L1抗血清的制备和鉴定

人乳头瘤病毒16型是导致宫颈癌发生的主要因素,其晚期蛋白L1在体内或体外可自组装形成VLP颗粒.作者构建了DNA疫苗载体pDRVI1.0-16L1,大提质粒后免疫BalB/C小鼠制备抗体,并对抗体进行了特异性鉴定,为HPV16L1预防性疫苗的进一步研究和应用奠定了基础.

CD44v6与人乳头状瘤病毒L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值

目的探讨CD44v6与人乳头状瘤病毒(HPV)L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。方法收集2017年1月—2022年1月江南大学附属医院102例手术切除的宫颈鳞癌及癌前病变组织石蜡标本,其中宫颈鳞癌组织石蜡标本41例,癌前病变组织石蜡标本61例[宫颈低级别上皮内病变(LSIL)标本30例,宫颈高级别上皮内病变(HSIL)组织31例],另选取同期49例因子宫肌瘤行子宫切除的正常宫颈组织石蜡标本为对照。采用免疫组织化学法检测不同组织中CD44v6与HPV L1衣壳蛋白表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CD44v6、HPV L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值。结果正常宫颈组织、LSIL组织、HSIL组织、宫颈鳞癌组织中CD44v6阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组织高于正常宫颈组织、LSIL组织及HSIL组织(P<0.05),HSIL组织高于正常宫颈组织和LSIL组织(P<0.05)。正常宫颈组织、LSIL组织、HSIL组织、宫颈鳞癌组织中HPV L1衣壳蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组织低于HSIL组织、LSIL组织、正常宫颈组织(P<0.05),HSIL组织低于LSIL组织、正常宫颈组织(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白及两者联合诊断宫颈鳞癌的敏感性分别为70.73%(95%CI:0.543,0.834)、75.61%(95%CI:0.594,0.871)、70.73%(95%CI:0.543,0.834),特异性分别为77.05%(95%CI:0.642,0.865)、73.77%(95%CI:0.607,0.838)、90.16%(95%CI:0.792,0.959),AUC分别为0.746(95%CI:0.648,0.844)、0.742(95%CI:0.638,0.846)、0.907(95%CI:0.848,0.966)。ROC曲线分析结果显示,癌前病变组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白及两者联合诊断HSIL的敏感性分别为74.19%(95%CI:0.551,0.875)、70.96%(95%CI:0.518,0.851)、70.96%(95%CI:0.518,0.851),特异性分别为76.67%(95%CI:0.573,0.894)、73.33%(95%CI:0.538,0.870)、90.00%(95%CI:0.723,0.974),AUC分别为0.748(95%CI:0.649,0.847)、0.726(95%CI:0.627,0.825)、0.890(95%CI:0.820,0.959)。结论CD44v6在宫颈病变组织中异常高表达,且随着宫颈病变程度的加重,CD44v6表达水平呈升高趋势,HPV L1衣壳蛋白的变化与CD44v6相反,两者联合诊断宫颈鳞癌及癌前病变价值较高。

HPV L1衣壳蛋白和阴道微生态及酶的改变与高危人乳头瘤病毒感染、宫颈上皮内瘤变演化的关系

目的探讨人乳头瘤病毒L1(HPV L1)衣壳蛋白及阴道微生态和酶的改变与高危人乳头瘤病毒(HRHPV)感染、宫颈上皮内瘤变(CIN)演化的关系。方法选取2021年1月至2023年3月在我院治疗的CIN患者182例,其中CINⅠ级患者52例,CINⅡ级患者70例,CINⅢ级患者60例,分析比较不同级别CIN患者HPV L1衣壳蛋白、阴道微生态、阴道微生物代谢产物及酶的差异。结果CINⅢ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(20.00±5.92)PU,低于CINⅠ级和CINⅡ级患者(t=12.232、10.223,均P<0.05);CINⅡ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(25.10±6.04)PU,低于Ⅰ级患者(t=9.922,P<0.05)。CINⅢ级患者阴道乳杆菌阳性比例为18.33%,低于CINⅠ级患者(χ^(2)=10.036,P<0.05),而假丝酵母阳性比例为35.00%,高于CINⅠ级患者(χ^(2)=6.892,P<0.05);CINⅢ级患者β-葡萄糖醛酸酶(GUS)、唾液酸苷酶(SNA)和过氧化氢(H_(2)O_(2))阳性比例分别为86.67%、90.00%和93.33%,高于Ⅰ级和Ⅱ级患者(χ^(2)=32.044、67.608、20.394,均P<0.05)。HR-HPV感染CIN患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(24.12±3.34)PU,低于HR-HPV未感染患者(t=-6.150,P<0.05)。HR-HPV感染CIN患者GUS、SNA、H_(2)O_(2)阳性率分别为65.28%、54.86%、81.25%,均高于HRHPV未感染患者(χ^(2)=18.637、18.440、29.397,均P<0.05)。HR-HPV感染CINⅠ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(28.04±3.01)PU,低于HR-HPV未感染CINⅠ级患者(t=-6.750,P<0.05);HR-HPV感染CINⅠ级患者H2O2阳性率为70.97%,高于HR-HPV未感染CINⅠ级患者(χ^(2)=4.109,P<0.05)。HR-HPV感染CINⅡ级患者HPV L1衣壳蛋白表达量为(28.04±3.01)PU,低于HR-HPV未感染CINⅡ级患者(t=-5.165,P<0.05)。HR-HPV感染CINⅡ级患者GUS、H_(2)O_(2)阳性率为50.94%、70.97%,均高于HR-HPV未感染CINⅡ级患者(χ^(2)=3.920、10.758,均P<0.05)。结论HPV L1衣壳蛋白、阴道微生态及代谢产物和酶表达与CIN严重程度有关,同时与HR-HPV感染存在一定的关系。

人乳头瘤病毒18型主要衣壳蛋白原核表达系统的构建及鉴定

目的构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型(HPV18)主要衣壳蛋白,为进一步研制HPV18基因工程疫苗打下基础。方法以重组质粒pBR322-HPV18为模板,利用PCR方法扩增HPV18L1 DNA片段,将HPV18L1 DNA与pUC 19质粒重组构建pUC19-HPV18L1重组质粒;用酶切电泳验证重组结果的正确性;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化;再利用pQE32质粒做表达载体构建重组质粒pQE32-HPV18L1,并用酶切电泳验证;利用SDS-PAGE检测HPV18L1目的蛋白;利用Western杂交鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果PCR扩增DNA片段约为1.7kb,与预期结果相同;克隆重组质粒pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同,而且测序验证插入片段全序列无改变;表达重组质粒pQE32-HPV18L1酶切图谱亦与预期相同;SDS-PAGE显示,约63×103处可见目的蛋白带,与预期结果一致;Western杂交鉴定,在Mr约63×103处可见目的条带,与预期结果一致。结论成功构建原核表达重组质粒pQE32-HPV18L1并能表达HPV18主要衣核蛋白。

利用His-杆状病毒表达系统制备HPV16L1VLP

目的 改进现有的昆虫细胞表达和纯化HPV16L1蛋白系统,寻找一种经济、简便、省时的HPV16病毒样颗粒(VLP)疫苗的制备方法。方法 将HPV16L1基因重组入带有 6×His标签的杆状病毒基因组, 并转染昆虫细胞 (Sf 9)进行表达。用镍柱纯化表达蛋白;以小鼠红细胞凝集试验和凝集抑制试验鉴定蛋白生物活性,用透射电镜观察VLP形成。结果 使用新的表达和纯化系统获得HPV16L1高效表达。小鼠红细胞凝集试验和凝集抑制试验证实纯化的HPV16L1蛋白具有HPV16L1的生物学活性;透射电镜观察证实纯化蛋白可自组装成VLP。结论 带有 6×His短肽的HPV16L1蛋白具有与HPV16L1蛋白同样的生物学活性和自组装成VLP的能力,现时的表达纯化系统,提供了一个省时、省力、简便、经济的制备HPV16VLP疫苗的方法。

人乳头瘤病毒重组质粒的构建及蛋白表达

目的 构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒 18型L1片段 (HPV18L1)活性蛋白 ,为进一步研制人乳头瘤病毒 18型 (HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒 (pBR32 2 -HPV18)为模板 ,利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段 ,将HPV18L1DNA与质粒 (pUC19)重组构建重组质粒 (pUC19-HPV18L1)。用酶切电泳验证重组结果的正确性 ;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用质粒 (pQE32 )做表达载体构建重组质粒(pQE32 -HPV18L1) ,并用酶切电泳验证。将重组质粒 pQE32 -HPV18L1转入工程菌 (M 15 ) ,用酶切电泳验证重组工程菌 (pQE32 -HPV18L1/M15 )正确性。利用SDS -聚丙酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测HPV18L1目的蛋白。采用不同浓度异丙基 - β-D -半乳糖苷 (IPTG)、不同诱导时间来优化HPV18L1目的蛋白表达条件。利用Western印迹检测蛋白质 (Westernblot)鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果 PCR扩增DNA片段约为 1 7Kb ,与预期结果相同。克隆重组质粒 pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同 ,而且测序验证插入片段全序列无改变。表达重组质粒 pQE32 -HPV18L1酶切图谱亦与预期相同。蛋白表达条件优化结果为 1mmol/LIPTG诱导 4h后 ,获得HPV18L1最佳蛋白表达量 :SDS -PAGE显示 ,约 6

HPV L1病毒样颗粒疫苗诱导机体免疫反应的研究现状

HPV感染与宫颈癌发展密切相关,HPV病毒样颗粒(VLP)在体外由病毒的主要衣壳蛋白L1自发装配而成。HPV VLP成为候选疫苗,它能很有效的减少感染并且诱导很强的抗病毒免疫。免疫后产生的中和抗体具有型特异性,接种VLP后也能产生细胞免疫,疫苗可诱导出至少持续5年的高滴度抗L1VLP抗体,比自然感染高10倍。疫苗诱导的长期保护效应通常是免疫记忆的特征。

宫颈脱落细胞HPVL1蛋白监测在高危型HPV阳性妇女分流中的应用

目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性的妇女采用宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测的临床实际意义。方法选择2014年10月至2015年10月期间我院妇科收治的386例高危型HPV阳性患者,收集患者的宫颈脱落细胞,采用液基薄层细胞学检查(TCT)、免疫组化两种方法检测HPV L1蛋白,同时对所有患者进行阴道镜检测,可疑部分取活检进行病理检查。对比HPV L1蛋白在正常妇女及不同的病理组织学病变患者中的表达情况。以此评估宫颈脱落细胞HPVL1蛋白检测对筛查子宫病变的临床实际价值。结果 386例高危型HPV阳性患者中,发现正常子宫颈162例,低度鳞状上皮内病变94例,高度鳞状上皮内病变128例,而子宫颈鳞癌2例,统计后发现高度内皮病变者、宫颈鳞癌者的HPV L1蛋白阳性率明显低于正常者和低度内皮病变者。此外,宫颈脱落细胞的HPV L1蛋白检测中的组织学诊断关于高度内皮病变者、宫颈鳞癌者两种类型的敏感度、阴性预测值均明显高于TCT检查,但是在特异度一项中,组织学诊断则明显低于TCT检查,差异均有统计学意义(P<0.05),而两项检查中对于阳性预测结果差异无统计学意义(P>0.05);高危型HPV阳性患者中,HSIL、SCC患者的HPV L1蛋白阳性比例为19.2%,而正常以及LSIL者的蛋白阳性比例高达66.4%,差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈脱落细胞额HPV L1蛋白检测中的组织学诊断关于高度内皮病变者、宫颈鳞癌者两种类型的敏感度、阴性预测值均明显高于TCT检查,但是在特异度一项中,组织学诊断则明显低于TCT检查,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对高危型HPV阳性的妇女患者而言,子宫颈脱落细胞HPV L1蛋白检测具有一定的筛查意义,能够为临床提供多一种且适宜的分流方案。

宫颈鳞状上皮病变中HPVL1与KGF的表达及意义

目的探讨人乳头瘤病毒L1壳蛋白（Human papillomavirus L1 capsid rotein,HPVL1）与角质细胞生长因子（keratinocyte gowth factor,KGF）在宫颈鳞状上皮病变发生、发展过程中的意义。方法采用免疫组化方法检测230例宫颈鳞状上皮病变患者（其中尖锐湿疣50例,宫颈上皮内瘤变CINI级60例、CINII-III级95例,浸润性鳞状细胞癌25例）的HPVL1与KGF。结果宫颈鳞状上皮病变中HPVL1的阳性率为43.91%,在浸润性鳞状细胞癌中无表达;在各种鳞状上皮病变中的阳性率差异显著（χ^2=50.835,P〈0.05）。宫颈鳞状上皮病变中KGF的阳性率为44.35%,在各种鳞状上皮病变中的阳性率差异显著（χ^2=36.529,P〈0.05）。结论 HPVL1、KGF与宫颈鳞状上皮病变的病理分级密切相关,参与了宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程。

HPV L1壳蛋白在宫颈脱落细胞中的表达及临床意义

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)L1壳蛋白在宫颈不同病变脱落细胞中的表达和临床意义。方法收集2008年1月至2009年5月到北京大学深圳医院宫颈门诊就诊患者的宫颈脱落细胞标本309例,其中正常或慢性宫颈炎33例、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级168例、CINⅡ/Ⅲ级84例和鳞状细胞癌(SCC)24例,用免疫细胞化学法检测HPV L1壳蛋白在宫颈脱落细胞中的表达。结果在正常宫颈或慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ和SCC中,HPV L1壳蛋白阳性表达率分别为27.3%(9/33)、66.7%(112/168)、25.0%(21/84)、0%(0/24)。其中CINⅠ组、SCC组与正常或慢性宫颈炎组比较,CINⅠ组与CINⅡ/Ⅲ组比较,CINⅠ、CINⅡ/Ⅲ组与SCC组比较差异均有统计学意义(均P<0.01),随病变程度的加重,HPV L1壳蛋白阳性表达率呈下降的趋势。分别以30岁和40岁为界分组,不同年龄组间HPV L1壳蛋白的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。在高危型HPV DNA负荷量≥1 000 RLU/PC组HPV L1壳蛋白表达率为73.1%,与负荷量<1 000 RLU/PC的各组相比,其表达率明显增加(均P<0.05)。HPV L1壳蛋白检测CINⅡ/Ⅲ以上病变的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为80.6%、60.2%、52.1%和85.2%。结论HPV L1壳蛋白在CIN和SCC中的阳性表达率随着病变程度加重呈下降趋势,有望成为预测宫颈癌前病变进展的生物学标志物。