原发性乳腺癌组织中人乳腺珠蛋白的表达及意义

目的研究人乳腺珠蛋白(hMAM)在乳腺组织中表达的特异性,hMAM的表达与各临床病理特征以及与乳腺癌预后的关系。方法运用免疫组织化学的方法分析142例原发性乳腺癌组织,103例其他肿瘤组织,30例正常乳腺组织,30例乳腺良性肿瘤中的hMAM表达情况,并结合乳腺癌患者的临床病理资料和生存情况进行分析。结果 hMAM只在乳腺组织中表达,在原发性乳腺癌中有70.4%的阳性表达。hMAM的表达与年龄、临床分级分期、肿块大小、腋淋巴结状态、病理类型、PR、HER2状态均无相关性,与ER呈正相关。生存分析显示,hMAM阳性患者预后明显好于hMAM阴性患者,Cox回归示年龄、临床分期、ER、hMAM状态均对乳腺癌的术后生存时间有影响。结论 hMAM具有理想的乳腺组织表达特异性,在原发性乳腺癌组织中有较高的表达率同时具备较高的敏感度和特异性。生存分析显示hMAM可以作为评估原发性乳腺癌患者预后的重要参考指标。

人乳腺珠蛋白基因表达和趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断中的应用

目的探讨人乳腺珠蛋白(HMAM)、趋化因子CXCL16及CA153在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测50例女性体检者、134例良性乳腺肿瘤患者、129例乳腺癌患者和104例其他肿瘤患者外周血中HMAM mRNA,化学发光法检测CA153,ELISA检测CXCL16,分析三种标志物与乳腺癌患者临床组织学分期的关系、手术前后的差异及联合检测在乳腺癌诊断中的应用。结果乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平高于对照组和良性乳腺肿瘤组,HMAM和CA153水平高于其他肿瘤组(P<0.05)。乳腺癌组HMAM、CA153和CXCL16水平在手术后均下降,Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)。HMAM的检测特异性最强,CXCL16的检测灵敏度最高;CA153和CXCL16联合检测可提高灵敏度和阴性预测值;HMAM、CA153和CXCL16联合检测的特异性和阳性预测值高于CA153和CXCL16联合检测,HMAM、CA153和CXCL16联合检测的灵敏度、阳性预测值和阴性预测值高于单一指标检测(P<0.05)。结论HMAM和CA153对乳腺癌预后有一定的预测作用,HMAM、CA153、和CXCL16对术后随访有意义,联合检测有助于提高对乳腺癌诊断的早期诊断。

人乳腺珠蛋白基因亚型的原核表达及纯化

目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270 bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功。

人乳腺珠蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

乳腺癌（breast cancer）是女性最常见的恶性肿瘤之一,据2017年美国癌症统计显示,每年新发病例25万人,高居女性恶性肿瘤的首位,约占所有新发恶性肿瘤的30%;每年死亡约4万人,占所有恶性肿瘤病死率的14%。

两种人乳腺珠蛋白基因亚型cDNA的克隆及其原核表达

目的克隆hMAM编码全长cDNA,建立hMAM蛋白原核表达系统及其纯化方法,为进一步研究hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定工作基础。方法自乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcDNA,构建pGEX-KG-hMAM表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达,鉴定表达产物的形式后建立目的蛋白的纯化方法。结果乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAMcDNA亚型:hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,二者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;GST-hMAM蛋白在本原核表达系统中以不溶性包涵体形式存在,通过改良的纯化方案可以获得纯化的复性蛋白。结论获得hMAMcDNA并发现一个新的hMAM突变体;hMAM可在pGEX-KG中与GST融合,实现高效表达;通过本法建立的改良的纯化流程,可获得纯度达96.5%的hMAM的两种融合蛋白,为进一步研究两种亚型hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定了工作基础。

抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法以纯化的重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。结果通过杂交瘤技术获得了2株能分泌特异性抗hMAM单克隆抗体的杂交瘤细胞株hMAM-A2及hMAM-B7,其分泌的单克隆抗体亚类均属于IgG1,Western blotting结果显示2株细胞分泌的单克隆抗体特异性强能与34kDa处的hMAM抗原形成单一的蛋白质显色条带,免疫组化结果显示其仅与乳腺癌组织呈阳性反应,与其他肿瘤组织不发生交叉反应。结论利用鼠-鼠杂交瘤技术成功的制备了2株稳定分泌高效价、高特异性抗hMAM的杂交瘤细胞株。

人乳腺珠蛋白单克隆抗体制备及生物特性鉴定

目的构建重组hMAM蛋白,通过杂交瘤技术获得特异性的抗hMAM的单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法克隆表达hMAM 8-93AA、20-52AA、43-70AA、56-82AA、67-93AA区段的抗原,以纯化的pBV220/hMAM(8-93AA)为免疫原,杂交瘤技术筛选出能稳定分泌抗hMAM单克隆抗体的细胞株。采用Western blotting和免疫组织化学染色方法鉴定其表位和特异性。结果获得6个高纯度的重组抗原,通过pBV220/hMAM(8-93AA)免疫小鼠后,获得2株稳定分泌抗hMAM抗体的杂交瘤细胞株。Western blotting结果显示MAb1、MAb2分别是识别hMAM20-52AA、hMAM52-67AA片段的特异性单克隆抗体。免疫组织化学染色结果显示该抗体仅在乳腺组织中呈阳性反应,在其他肿瘤组织中不反应。结论通过杂交瘤技术成功制备了两株稳定分泌且高特异性的抗hMAM不同位点的单克隆抗体细胞株,为进一步研制高灵敏的乳腺癌早期检测试剂奠定了基础。

人乳腺珠蛋白临床应用研究进展

人乳腺珠蛋白（hMAM）是一种分泌型球蛋白，在乳腺癌组织中高表达，具有乳腺组织特异性。hMAM是一种良好的乳腺肿瘤标志物，具有重要的临床应用价值，对乳腺癌早期诊断与鉴别诊断具显著意义，并为乳腺癌的免疫治疗、基因治疗提供广阔的应用前景。

CK19联合人乳腺珠蛋白-量子点双标法检测乳腺癌循环肿瘤细胞及其初步临床研究

近年来,乳腺癌是中国女性发病率最高的癌症,导致乳腺癌主要死亡原因是远处转移,因此早期发现乳腺癌微转移将可能成为临床指导乳腺癌的治疗的有力依据[1]。本文探讨改良细胞角蛋白CK19单标法,应用CK19联合人乳腺珠蛋白-量子点(human mammaglobin quantum dot,hMAM-QDs)双标法检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),并分析比较两者的检测效果。

人乳腺珠蛋白和亲脂素B共转染乳腺癌细胞T47-D

目的构建人乳腺珠蛋白(Mammaglobin A)和亲脂素B(Lipophilin B)真核表达载体,建立稳定高表达Mammaglobin A和同时稳定高表达Mammaglobin A和Lipophilin B的人乳腺癌T47-D细胞系。方法通过RT-PCR的方法从人乳腺癌细胞系MDA-MB-415中扩增Mammaglobin A和Lipophilin B基因,构建真核表达载体pc-MA、pc-LP,分别独立及共转染T47-D细胞,G418筛选阳性克隆,并利用RT-PCR、Western Blot鉴定。结果重组质粒pc-MA、pc-LP酶切图谱、序列分析证明pc-MA、pc-LP载体构建成功,目的基因序列与GenBank中的序列完全一致。RT-PCR与Western Blot结果证实,独立稳定高表达Mammaglobin A和同时稳定高表达Mammaglobin A和Lipophilin B的人乳腺癌细胞系建立成功。结论成功建立独立高表达Mammaglobin A和同时高表达Mammaglobin A和Lipophilin B的乳腺癌细胞系,为探讨MammaglobinA和Lipophilin B在乳腺癌发生发展中的作用提供了实验基础。

人乳腺珠蛋白的研究进展

人乳腺珠蛋白 (hMAM)为乳腺组织特异性蛋白 ,是一种新的可能具有临床应用前景的乳腺癌标志物。近几年国内外研究者对hMAM在乳腺、淋巴结、外周血和骨髓中的表达及其与乳腺癌的关系做了大量工作 ,结果不尽相同 ,提出了不同的观点。

人乳腺珠蛋白在乳腺癌诊治的应用

人乳腺珠蛋白(hMAM)是近年发现的乳腺组织特异性蛋白,具有较高的敏感性和特异性。hMAM在乳腺、淋巴结、外周血和骨髓中的表达及与乳腺癌的关系的研究表明,hMAM是一种新的可能具有临床应用前景的乳腺癌标志物。hMAM可诱导机体免疫反应,产生细胞毒作用,有望应用于乳腺癌治疗。

人乳腺珠蛋白在检测乳腺癌微转移方面的应用进展

近年来，乳腺癌发病率呈逐年上升趋势，尽管在早期诊断和综合治疗方面取得了长足发展，但肉眼不可见的肿瘤转移仍严重影响患者的预后。临床研究发现：腋淋巴结阴性的乳腺癌患者，25％～30％于术后5年内出现远处转移，甚至导致死亡。其原因可能是在首次治疗时体内已存在播散的肿瘤细胞，它可以长期处于无血管期，但具有增殖潜能，被激活后导致转移。

人乳腺珠蛋白荧光免疫层析检测方法的建立

目的:建立外周血中人乳腺珠蛋白(hMAM)荧光免疫层析快速定量检测方法。方法:采用双抗体夹心法制备免疫层析试纸条,并评价线性范围、精密性、特异性等性能指标。结果:实现了外周血中hMAM定量检测,线性范围0.312~20 ng/ml,批内变异系数均小于10%,批间变异系数均小于15%,平均回收率102.6%,与癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA153)无明显交叉反应,ELISA平行检测46例临床血清相关性良好。结论:建立了定量检测hMAM的时间分辨荧光免疫层析方法,为乳腺癌诊断和预后提供一种辅助检测手段。

乳腺癌腋窝淋巴结的超声诊断与人乳腺珠蛋白基因检测

目的检测乳腺癌腋窝淋巴结(ALN)中人乳腺珠蛋白基因(hMAM)的表达,探讨超声对诊断ALN的价值及hMAM的临床应用价值。方法以超声发现的10例乳腺癌患者的23枚ALN作为试验组,术前对其标记,术后对离体标本行常规病理及hMAM mRNA的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测。以6枚无乳腺癌病史患者的颈部或ALN作为对照组。结果 10例乳腺癌组织的hMAM均呈阳性;23枚淋巴结中病理阳性率26.09%(6/23),hMAM表达阳性率78.26%(18/23),二者差异有统计学意义(P<0.05);6枚对照组淋巴结病理为反应性增生或正常,hMAM表达均阴性。结论超声可以实时观察ALN并预测其良恶性;hMAM的RT-PCR检测可显著提高乳腺癌ALN转移的检出率。

乳腺肿块腋窝淋巴结超声造影与人乳腺珠蛋白基因检测对比研究

目的通过分析乳腺肿块患者皮下注射超声造影剂(SonoVue)后腋窝淋巴结(ALN)的增强情况并检测前哨淋巴结(SLN)中人乳腺珠蛋白基因(hMAMmRNA)的表达,探讨超声造影与hMAMmRNA检测在诊断乳腺癌SLN的应用前景。方法 21例乳腺肿块患者的肿物周围相同部位皮下先后分别注射造影剂和美蓝,观察同侧ALN的增强情况,术前对SLN标记,术后离体标本行病理及hMAMmRNA的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测。结果 21例患者造影后15例检出SLN,检出率71.4%(15/21),美蓝染色后检出SLN 19例,检出率90.5%(19/21),两组诊断准确率差异无统计学意义(P>0.05)。恶性者共检出SLN38个,病理显示15个转移,RT-PCR有26个阳性;良性患者11个SLN,且病理与RT-PCR均为阴性;两者检测的阳性率分别为75.5%(37/49)、97.9%(48/49),差异有统计学意义。结论皮下注射SonoVue超声造影可较好地检测出SLN并可判断其良恶性。

人参皂苷Rg3通过人乳腺珠蛋白A促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其可能的机制

目的:研究人参皂苷Rg3通过促进乳腺癌MDA-MB-231细胞人乳腺珠蛋白A(mammaglobin-A,MGBA)的表达从而抑制细胞增殖的作用机制。方法:MTT法和流式细胞术检测5、10、15μg/ml Rg3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测对乳腺癌细胞内MGBA表达的影响;Rg3和siRNA-MGBA单独或联合处理MDA-MB-231细胞,MTT法和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测其对细胞MGBA表达的影响,敏感硫电极法检测其对乳腺癌MDAMB-231细胞H2S分泌的影响。结果:作用细胞48 h后,与对照组相比,5、10、15μg/ml Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显增高[(18.78±0.82)%、(33.25±1.17)%、(35.11±0.94)%vs(9.72±0.91)%,均P<0.05],Rg3可促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P<0.05),也明显增强MDA-MB-231细胞内MGBA蛋白的表达(P<0.05)。与对照组相比,Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显升高[(30.12±1.01)%vs(10.66±0.59)%,P<0.05],Rg3+siRNA-MGBA组和siRNA-MGBA组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显降低[(6.61±0.63)%、(7.02±0.46)%vs(10.66±0.59)%,均P<0.05];Rg3组MGBA和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达和H2S的分泌明显增强,而Rg3+siRNA-MGBA组、siRNA-MGBA组明显抑制(均P<0.05)。结论:Rg3可以明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过增强MGBA蛋白的表达并激活H2S/CSE系统得以实现的。

免疫荧光检测乳腺癌组织中人乳腺珠蛋白的表达

应用免疫荧光双重染色在激光共聚焦显微镜下观察莆田市第一医院6例乳腺癌患者、6例乳腺正常者、6例胃癌患者和6例肠癌患者组织中乳腺珠蛋白的表达,检测乳腺珠蛋白在不同组织中表达,探讨其临床意义。结果显示,乳腺珠蛋白在乳腺癌组织中高表达,在乳腺正常组织中低表达,相对比值为10.39670(P<0.001),在胃癌和肠癌组织中几乎不表达。乳腺珠蛋白在乳腺癌和乳腺正常组织、胃癌、肠癌中表达差异具有统计学意义。结果表明,乳腺珠蛋白可能作为乳腺癌早期诊断的特异标志蛋白。

血清乳腺珠蛋白与乳腺癌的相关性及临床意义探讨

目的探讨血清人乳腺珠蛋白（hMAM）水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测68例乳腺癌患者、40例其他癌症患者（前列腺癌、胃癌、卵巢癌、直肠癌各10例）、35例良性乳腺疾病患者以及40名体检正常女性（正常对照组）血清hMAM水平并做比较。将68例乳腺癌患者按临床TNM分期、是否存在雌激素受体（ER）表达、是否有腋窝淋巴结转移以及是否绝经分别分组并做比较。通过受试者工作特征（ROC）曲线确定乳腺癌血清hMAM的Cut—off值。结果血清hMAM的ROC曲线下面积为0．825，即诊断乳腺癌的可信度为82．5％[95％可信区间（C，）：72．6％～92．4％]；当hMAM的Cut—off值为8．43ng／mL时，敏感性和特异性分别为76．5％、82．9％。乳腺癌组血清hMAM水平及阳性率明显高于良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组（P〈0．05），而良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组之间差异均无统计学意义（P〉0．05）。11I和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率（55％、75％）明显高于I和Ⅱ期患者（25％、40％，P〈0．05），但hMAM水平无差异（P〉0．05）。有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率（88％）明显高于无转移的患者（30％，P〈0．05），但hMAM水平无差异（P〉0．05）。不管乳腺癌患者血清中是否存在ER、原癌基因C—erb-2表达及是否绝经，其hMAM水平及阳性率均无差异（P〉0．05）。结论hMAM的表达与乳腺癌临床分期和是否有腋窝淋巴结转移相关；检测乳腺癌高危人群血清hMAM水平有助于提高乳腺癌的早期诊断和癌微转移的早期发现。