紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响

目的观察复方中药紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制作用及对其凋亡的诱导作用,探讨紫龙金治疗乳腺癌的作用机制。方法依据培养液紫龙金浓度的差异,实验共设4组:(1)对照组:不加紫龙金干预的1640培养液;(2)紫龙金低浓度组:1.5 mg生药/mL紫龙金培养液;(3)紫龙金中浓度组:3 mg生药/mL紫龙金培养液;(4)紫龙金高浓度组:6 mg生药/mL紫龙金培养液。采用细胞计数法绘制生长曲线及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度紫龙金对MCF-7细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞术、Hoechst 33342核染色法及DNA梯度形成法测定紫龙金诱导凋亡的作用。结果(1)与对照组比较,紫龙金各剂量组的细胞计数在各时间点(24、48、72、96、120、144 h)明显减少,其差异均有统计学意义(P<0.05);紫龙金各剂量组间的生长抑制率差异除低、中浓度组间在24、72 h无统计学意义外(P>0.05),各剂量组间两两比较在不同时间点(24、48、72、96、120、144 h),其差异均有统计学意义(P<0.05)。紫龙金对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)紫龙金使细胞阻滞在G_0/G_1期;(3)中、高浓度紫龙金诱导MCF-7细胞凋亡,并形成DNA ladder。结论紫龙金能抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。

人乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/MDR^a的建立及其生物学特性的初步研究

实验以MCF-7细胞株为亲本细胞,采用阿霉素(ADM)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳腺癌细胞系MCF-7/MDRa,并对其耐药谱、动力学周期分布、表型变化、药物的蓄积量等生物学特性进行了初步分析评价。结果表明,MCF-7/MDRa细胞较亲本细胞的ADM半数致死浓度(IC50)高500倍,撤药培养150天后耐药指数仍维持在200倍以上,并对多种化疗药物产生交叉耐药性;耐药细胞分化程度低于同步传代的MCF-7细胞,细胞倍增时间与亲本细胞接近,S期细胞显著增加,G1期细胞减少;随着撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快;耐药细胞P-gP、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有显著增加,ER阳性表达丢失;在稳定生长的撤药培养6天的细胞中仍有ADM蓄积。建立的MCF-7/MDRa模型具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于肿瘤多药耐药机制的研究。

紫龙金抑制人乳腺癌细胞系MCF-7生长的体内外实验研究

目的探讨复方中药紫龙金在体内和体外对MCF-7人乳腺癌细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法 (1)台盼蓝拒染法和双层软琼脂克隆形成法检测紫龙金对MCF-7细胞增殖活性和克隆形成的影响;(2)Westernblot法检测紫龙金对p-ERK1/2蛋白表达的影响;(3)17-β-雌二醇缓释药片包埋法构建MCF-7细胞的BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,并检测紫龙金(实验组灌胃生药20g紫龙金/kg体重)对肿瘤生长的抑制效应。结果 (1)紫龙金降低MCF-7细胞的存活率,并呈剂量和时间依赖性;(2)紫龙金组MCF-7细胞克隆形成率显著低于对照组,且随着浓度的增加,克隆形成能力明显降低[0.75、1.5、3.0、6.0mg/mL紫龙金组细胞克隆形成抑制率分别为(12.66±1.54)%、(88.83±2.13)%、100%、100%],克隆直径也明显减小或无克隆形成;(3)紫龙金下调p-ERK1/2蛋白的表达;(4)实验组裸鼠与对照组裸鼠4周后移植瘤的平均体积分别为(0.73±0.58)cm3、(1.36±0.64)cm3,平均瘤重分别为(1.02±0.25)g、(1.66±0.09)g,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),实验组抑瘤率为38.55%。结论紫龙金可显著抑制MCF-7细胞的体内和体外增殖、转化和致瘤性,这可能与p-ERK1/2蛋白的表达下调有关。

抗人Ig抗体诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的观察抗人Ig抗体对人乳腺癌传代细胞系MCF-7细胞的凋亡诱导作用。方法用培养上清中加入抗体和原位电转的方法将抗人Ig抗体分别作MCF-7细胞的抗体封闭实验,用流式分析仪进行细胞凋亡检测。结果培养上清中加入抗人IgG、抗IgM抗体后,对MCF-7细胞系没有明显的凋亡诱导作用。而通过原位电转的方法将抗人IgG、抗人IgM抗体转入MCF-7细胞内,发现二者均对MCF-7有明显的促凋亡作用(P<0.01)。结论MCF-7细胞内的IgG及IgM对MCF-7细胞的生存具有重要意义。

大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞系体外增殖和细胞周期的影响

目的观察大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖及细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法分别采用台盼蓝拒染法、流式细胞术,在不同条件下测定大豆黄酮对细胞增殖抑制率及细胞周期分布的影响。蛋白激酶C(PKC)活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞的体外增殖,作用24h可使MCF-7细胞的细胞周期阻滞于G2/M期和S期。细胞内PKC活性分析表明:大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为13.27μmol/L。结论大豆黄酮可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖,其作用机制可能与细胞周期G2/M期和S期阻滞及抑制PKC的活性有关。

微小RNA-145影响乳腺癌细胞系MCF-7增殖和凋亡的机制

目的探讨微小RNA-145(miR-145)参与乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的机制。方法体外培养永生化乳腺癌细胞系MCF-7细胞,并转染miR-145。分别应用Real-time PCR与Western blotting检测mRNA和蛋白水平。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞增殖水平,流式细胞术检测不同处理组MCF-7细胞的凋亡水平。结果 Real-time PCR结果表明,高表达miR-145对MCF-7细胞Caspase-3、增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的mRNA水平并无影响;而Western blotting实验结果表明,与对照组相比,转染miR-145 96 h可显著提高Caspase-3的表达,并抑制PCNA与Bcl-2的表达。CCK-8实验结果表明,过表达miR-145 72 h、96 h后MCF-7细胞增殖率降低,差异具有统计学意义(P<0. 05)。流式细胞术结果表明,过表达组MCF-7细胞的凋亡率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论 miR-145可通过下调PCNA与Bcl-2蛋白、上调Caspase-3蛋白的表达,从而抑制MCF-7细胞增殖和促进MCF-7细胞凋亡,有望成为乳腺癌治疗的新靶点。

ER-α36过表达促进人乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移能力

目的探讨雌激素受体新亚型ER-α36过表达对人雌激素受体阳性乳腺癌细胞侵袭转移潜力的影响及其机制。方法以野生型乳腺癌细胞系MCF-7/W、转染pcDNA3.1空载体的细胞系MCF-7/pcDNA3.1和转染重组载体pcDNA3.1/ER-α36的细胞系MCF-7/ER-α36为研究对象,分别用细胞黏附实验观测肿瘤细胞与细胞外基质的黏附能力、Transwell侵袭小室实验检测细胞侵袭转移能力,用Western blot法检测NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达。结果与MCF-7/W组细胞相比,MCF-7/ER-α36细胞的2 h细胞黏附率和24 h穿膜细胞数显著增加(P<0.05)。NF-κB P65、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白的相对表达量及MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1显著增高(P<0.05)。结论 ER-α36过表达能促进ER-α66阳性乳腺癌细胞的体外黏附能力和侵袭转移潜力,其机制可能与通过NF-κB途径提高MMP-2、MMP-9的表达水平及打破二者与TIMP-1之间的平衡有关。

桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究桃儿七对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制.方法:应用MTT法检测桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,倒置显微镜、HE染色及电镜观察细胞形态学改变,FCM分析细胞周期及凋亡率,免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达.结果:桃儿七提取物可明显抑制MCF-7细胞的增殖,1,2,3 mg/L桃儿七作用72 h后,细胞生长抑制率分别为43.0%,54.9%,78.5%,抑制作用呈时间及浓度依赖性.形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征,伴有多核细胞形成.FCM分析发现桃儿七阻断MCF-7细胞生长于细胞周期的G2/M期,凋亡诱导作用呈时间及浓度依赖性.免疫细胞化学结果显示,2 mg/L桃儿七作用48 h后,PCNA,Bc l-2蛋白表达分别由154.78±0.16,85.56±0.09降至78.46±0.15,40.43±0.07,P<0.01;而p21WAF1/C IP1和c-Myc蛋白由92.32±0.12,114.48±0.14增至125.54±0.09,156.52±0.08,P<0.01.结论:桃儿七提取物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,G2/M期阻滞并诱导凋亡.该作用与p21WAF1/C IP1表达增加及PCNA表达降低有关,通过下调Bc l-2和上调c-Myc表达诱导乳腺癌细胞凋亡.

柴桂龙牡汤含药血清对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用及对雌激素受体α表达的影响

目的观察柴桂龙牡汤(CGLM)含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞株体外生长的抑制作用及对雌激素受体α(ERα)表达的影响。方法将人乳腺癌MCF-7细胞株细胞分别加入相应(含药)培养基,对照组含有10%空白大鼠血清,给药组分别含有柴桂龙牡汤低、中、高剂量的10%含药血清。加药后,置37℃及5%CO2培养箱中继续培养48 h。噻唑蓝(MTT)法检测柴桂龙牡汤各组含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。将10%的含药血清培养基加入MCF-7细胞中,孵育48 h,提取细胞总mRNA及蛋白,反转录合成c DNA,采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中ERαmRNA的表达水平,采用Western blot方法检测各组ERα蛋白表达水平。结果 MTT法检测结果显示,与对照组相比,低、中、高剂量柴桂龙牡汤均可抑制MCF-7细胞体外增殖,中、高剂量组的差异有统计学意义(P<0.01);PCR法检测结果显示,与对照组相比,柴桂龙牡汤低、中、高剂量组中ERαmRNA均有升高,其中高剂量组有显著差异(P<0.01);Western blot法检测结果显示,与对照组相比,低、中、高剂量柴桂龙牡汤均使ERα蛋白表达水平升高,中、高剂量组有显著差异(P<0.01)。结论柴桂龙牡汤对MCF-7细胞的体外生长有抑制作用,并与剂量浓度呈正相关,其机制可能与提高ERαmRNA含量、上调ERα蛋白的表达水平有关。

桃儿七根醇提物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究桃儿七根醇提物对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT法检测桃儿七根醇提物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用,倒置显徽镜、HE染色及电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期及凋亡率,免疫细胞化学法(ICC)检测细胞增殖、凋亡相关调控蛋白的表达。结果:桃儿七根醇提物可明显抑制MCF-7细胞的增殖,1,2,3 mg．L^(-1)桃儿七根醇提物作用72h后,细胞生长抑制率分别为43．0%,54．9%,78．5%,抑制作用呈时间及浓度依赖性。形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征,伴有多核细胞形成。FCM分析发现桃儿七根醇提物阻断MCF-7细胞生长于细胞周期的G_2/M期,凋亡诱导作用呈时间及浓度依赖性。免疫细胞化学结果显示,2mg·L^(-1)桃儿七根醇提物作用48h后,PCNA,Bcl-2蛋白表达较对照组显著下降;而p21^(WAFI-CIP1)和c-Myc蛋白显著增加(P＜0．01)。结论:桃儿七根醇提物可能通过增加p21^(WAFI-CIP1)蛋白表达及降低PCNA蛋白表达而抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并可能下调Bcl-2蛋白表达和上调c-Myc蛋白表达来促进MCF-7细胞凋亡。

重组人骨形态发生蛋白2对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

背景:有研究发现重组人骨形态发生蛋白2的临床应用可增加恶性肿瘤的患病风险,但关于重组人骨形态发生蛋白2对乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响及机制尚未被阐明。目的:探讨在体外及体内条件下重组人骨形态发生蛋白2对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力的影响及其作用机制。方法:①体外实验:无血清条件下,不同浓度的重组人骨形态发生蛋白2处理MCF-7细胞,通过MTT检测重组人骨形态发生蛋白2对细胞增殖能力的影响。利用流式细胞分析技术检测细胞周期,通过Real-time PCR检测不同浓度的重组人骨形态发生蛋白2对p21、cyclinE表达的影响,应用Westernblot技术检测不同浓度的重组人骨形态发生蛋白2处理对p21、cyclinE蛋白水平及对PI3K/Akt磷酸化水平的影响;②体内实验:将14只雌性裸鼠随机等分为实验组和对照组,实验组成瘤方案为MCF-7细胞+重组人骨形态发生蛋白2,对照组成瘤方案为等量MCF-7细胞,分别于6周龄裸鼠皮下注射。结果与结论:①体外实验:无血清条件下,不同浓度的重组人骨形态发生蛋白2处理细胞,发现重组人骨形态发生蛋白2可显著抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力。无血清条件下,不同浓度的重组人骨形态发生蛋白2处理细胞24 h,发现重组人骨形态发生蛋白2可增加G1期细胞所占比率。重组人骨形态发生蛋白2可显著促进p21的表达,显著抑制cyclinE的表达,并显著抑制PI3K/Akt信号通路的磷酸化过程;②体内实验:实验组裸鼠皮下瘤体体积均较对照组低,免疫组化检测显示重组人骨形态发生蛋白2处理可显著降低瘤体组织中ki-67的表达水平;③研究证实在体外及体内条件下重组人骨形态发生蛋白2通过影响PI3K/Akt信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖能力发挥显著抑制作用,从基础水平进一步论证了重组人骨形态发生蛋白2的临床应用不能显著增加乳腺癌的患病风险,为脊柱融合及骨不连等骨科疾病的治疗中应用重组人骨形态发生蛋白2提供了一定的理论基础。

肝X受体在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7细胞增殖的影响

目的研究肝X受体(liver X receptors,LXRs)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法采用免疫组化法检测LXRs在人乳腺癌组织中的蛋白表达;采用LXR激动剂T0901317处理人乳腺癌MCF-7细胞,流式细胞术检测BrdU标记MCF-7细胞的增殖情况。结果①LXRα和LXRβ在乳腺正常组织基本不表达,但LXRα在不同乳腺癌病变(导管原位癌和浸润性导管癌)中表达增高(P<0.05),在浸润性导管癌尤为明显;LXRβ在不同乳腺癌病变中不表达。②T0901317(10μM)处理明显抑制MCF-7细胞的增殖率(P<0.05)。结论乳腺癌组织LXRα蛋白表达明显增高,激活LXRα能够显著抑制MCF-7细胞的增殖。

瘦素对人乳腺癌MCF-7细胞DMBT1表达的影响

乳腺癌是严重威胁女性生命与健康的恶性肿瘤之一,在中国,乳腺癌发病率已占女性恶性肿瘤首位[1]。肥胖已成为世界范围内的公共健康问题,而肥胖已被证实与乳腺癌的发生、发展及转移密切相关[2]。瘦素是肥胖基因(obese gene,Ob)的产物,具有调节能量平衡、生殖、免疫、炎症、造血及细胞增殖等多种生物学作用[3]。研究显示,瘦素可通过正向调节雌激素的分泌,进而影响乳腺癌的发生发展[4]。DMBT1基因(deleted in malignant brain tumors)是一种候选的肿瘤抑制基因[5],也有研究证实,DMB T1是受雌激素调节的基因[6]。

血卟啉衍生物对人乳腺癌细胞系及脐血造血细胞的光化学作用

To study the effect of hemoporphyrin derivative(HPD) combined with laser irradiation on human breast tumor cell line MCF-7 and normal human umbilical cord blood-derived hematopoietic cells by using MTT assay. The results showed that HPD plus laser irradiation was more efficient for killing MCF-7 cells than normal human umbilical cord blood-derived hematopoietic cells. The photochemical effect with laser irradiation were higher than with light irradiation and it′s effect on MCF-7 cells was higher gradually with the increase of HPD concentration.

△Np63α过表达乳腺癌细胞系的建立

目的建立稳定过表达△Np63α的乳腺癌细胞系,为研究△Np63α的功能奠定基础。方法利用MCF-7细胞系作为模型,通过表达△Np63α的PCDNA3.1质粒转染MCF-7细胞,利用质粒的抗药性筛选MCF-7细胞,从而获得稳定过表达△Np63α的MCF-7细胞,用Real-time PCR和Western blot方法检测验证目的基因表达。结果通过瞬时转染和药物筛选获得了稳定过表达△Np63α的MCF-7细胞。结论成功构建了过表达△Np63α的MCF-7细胞系和转染空质粒的MCF-7对照细胞系,为下一步研究NP63α的功能奠定了基础。

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率。结果 (1)cyclinG2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyc-lin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖。

人端粒酶逆转录亚单位(hTERT)基因特异性siRNA对MCF-7细胞生长抑制作用的研究

目的研究人端粒酶逆转录亚单位(hTERT)特异性siRNA对MCF-7细胞体外生长及体内肿瘤形成能力的抑制作用。方法设计并化学合成针对hTERT的siRNA,用脂质体转染法将其导入MCF-7细胞内,通过软琼脂克隆形成试验及接种裸鼠的肿瘤形成实验,观察hTERT-siRNA对人乳腺癌MCF-7细胞体外及体内的生长抑制作用。结果软琼脂克隆形成试验显示,hTERT-siRNA转染的MCF-7细胞克隆形成数量明显少于对照组,抑制率达到84.1%。裸鼠体内实验结果显示,hTERT-siRNA转染组肿瘤生长速度也明显慢于对照组。结论hTERT-siRNA在体内外均显示可以有效、特异地抑制肿瘤细胞的生长。

EGFR/CerbB-2/MAPK介导乳腺癌三苯氧胺耐药细胞的生长

目的探讨乳腺癌三苯氧胺(TAM)获得性抵抗细胞的生长调节途径及三苯氧胺(TAM)获得性抵抗的发生机制。方法构建TAM抵抗的人乳腺癌细胞系(MCF-7/TAMR),RT-PCR、Westernblot及免疫细胞化学方法比较MCF-7/TAMR与MCF-7/WT细胞系中EGFR(CerbB-1)、CerbB-2、CerbB-3、CerbB-4mRNA及蛋白表达的不同。结果与MCF-7/WT细胞相比,MCF-7/TAMR细胞中表皮生长因子受体EGFR的mRNA增加6倍(P<0.05),蛋白增加3倍(P<0.05);CerbB-2的mRNA增加3倍(P<0.05),蛋白增加1.5倍(P<0.05);CerbB-3在两种细胞中的表达相似;CerbB-4未能检测到;MCF-7/TAMR细胞中MAPK活化水平增高;基础条件下,MCF-7/TAMR细胞中磷酸化的EGFR/CerbB-2,EGFR/CerbB-3异二聚体与细胞外信号调节激酶磷酸化水平增高有关;Herceptin处理MCF-7/TAMR细胞,阻滞了CerbB-2受体异二聚体的形成及磷酸化,降低了细胞外信号调节激酶的活性,明显抑制了细胞的生长。结论表皮生长因子受体特异性配体的自分泌释放作用诱导EGFR/CerbB-2二聚体形成及下游细胞外信号调节激酶(MAPK)的活化引起MCF-7/TAMR细胞的生长。

新型大黄酸衍生物4F抑制MCF-7细胞增殖并通过旁凋亡途径诱导细胞死亡（英文）

目的:探讨大黄酸及其衍生物4F对MCF-7细胞增殖能力、亚显微结构的影响及诱导细胞死亡的分子机制。方法:采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞仪检测比较4F、大黄酸和顺铂对乳腺癌细胞MCF-7的抗肿瘤活性;采用透射电镜观察MCF-7细胞质空泡及线粒体;免疫印迹实验则用于测定旁凋亡、自噬和凋亡相关蛋p62、微管相关蛋白轻链3(LC3)、葡萄糖调节蛋白(Grp)78、cleaved caspase-9和caspase-7的表达水平。结果:4F比大黄酸具有更强的细胞毒性(P<0.05),但均对MCF-7细胞凋亡率无明显影响(P>0.05);4F处理的MCF-7细胞质中可观察到大量空泡及肿胀的线粒体;免疫印迹结果显示Grp78、p62及LC3表达水平增高(P<0.05),而凋亡相关蛋白cleaved caspase-9及caspase-7表达水平无显著改变(P>0.05)。结论:4F可能通过旁凋亡,一种非凋亡或自噬性死亡的方式,诱导MCF-7细胞死亡;4F有望成为克服凋亡耐药的候选药物。