十二碳烯酸对人乳腺癌细胞株BT-20环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷水平的影响

目的观察十二碳烯酸对人乳腺癌细胞株BT-20增殖及其环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响。方法选用甘肃地产猫儿眼(Euphorbia kansui L.),经提取分离制得十二碳烯酸。人乳腺癌细胞株BT-20传代培养后,分别给予0.2、0.6、1.8 mg/L 3个浓度的十二碳烯酸培养48 h作为实验1、2、3组;每孔加5-Fu(10 mg/L,PBS液配制)20μl培养48 h作为5-Fu组;加等量PBS液培养48 h作为空白对照组。用MTT法检测各组细胞的增殖抑制率,用放射免疫法检测各组细胞的cAMP、cGMP含量,观察十二碳烯酸对人BT-20细胞cAMP、cGMP水平的影响。结果经给予不同液体培养48 h后,与对照组(细胞增殖抑制率为0)比较,实验1、2、3组和5-Fu组人乳腺癌细胞株BT-20的增殖抑制率分别为57.15%、75.87%、88.78%和81.73%(P均<0.01);c AMP含量分别增加了13.23%、25.96%、47.59%和34.39%(P均<0.01);cGMP含量分别降低了12.59%、19.29%、33.49%和22.47%(P<0.05,P<0.01);c AMP/c GMP比值分别增加了29.32%、55.77%、121.55%和72.59%(P<0.05,P<0.01)。结论十二碳烯酸具有抑制人乳腺癌细胞株BT-20增殖和升高c AMP/c GMP比值的作用。

NUP88基因变化对乳腺癌细胞系BT-20增殖侵袭生物学行为的影响

目的:探讨NUP88基因表达量升高或降低对乳腺癌细胞系BT-20细胞增殖能力、凋亡能力与侵袭能力的影响。方法:构建NUP88重组腺病毒表达载体以及NUP88 RNA干扰腺病毒载体,分别转染乳腺癌BT-20细胞获得NUP88过表达BT-20细胞以及NUP88低表达BT-20细胞并检测NUP88 mRNA和蛋白表达情况,随后通过CCK-8检测各组BT-20细胞增殖能力,通过流式双染检测各组BT-20细胞凋亡情况及通过Transwell侵袭实验检测各组BT-20细胞侵袭能力,并通过Western blot检测凋亡和侵袭相关蛋白表达变化。结果:成功获得NUP88 mRNA及蛋白高表达和低表达BT-20细胞;NUP88基因过表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著高于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则降低(P<0.05);NUP88基因低表达导致细胞增殖能力和侵袭细胞数量显著低于正常BT-20细胞水平,而凋亡率则升高(P<0.05);NUP88基因过表达导致抗凋亡蛋白Bcl-2和黏附蛋白β-catenin水平显著高于正常BT-20细胞水平,而促凋亡蛋白Bax和黏附蛋白E-cadherin显著低于正常BT-20细胞水平(P<0.05);NUP88基因低表达导致Bcl-2和β-catenin水平显著低于正常BT-20细胞水平,而Bax和E-cadherin显著高于正常BT-20细胞水平(P<0.05)。结论:NUP88基因通过调控凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2和黏附蛋白E-cadherin与β-catenin水平调控BT-20细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。

野马追内酯O诱导三阴性乳腺癌BT-20细胞凋亡的作用机制研究

[目的]通过体内外实验探究野马追内酯O(eupalinolide O,EO)对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制。[方法]采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度,以确定EO浓度。将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5μmol·L^(-1)组、EO 10μmol·L^(-1)组,后两组以EO处理24 h,采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。24只裸鼠通过乳腺脂肪垫注射BT-20细胞,建立乳腺癌模型,并随机分为对照组、阿霉素组(7 mg·kg^(-1)),EO低剂量组(15 mg·kg^(-1))和EO高剂量组(30 mg·kg^(-1)),每组6只。除对照组外,各组裸鼠连续腹腔注射对应药物治疗21 d,期间测量体表肿瘤体积;结束后称取肿瘤质量,并采用免疫组化染色检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达。采用免疫印迹法检测细胞和裸鼠肿瘤组织中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X(Bcl-2 associated X protein,Bax)、聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved caspase-3)和活化的半胱氨酸蛋白酶-9(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9,cleaved caspase-9)蛋白表达。[结果]EO对BT-20细胞的抑制作用具有剂量-时间依赖性。与空白对照组比较,EO 5、10μmol·L^(-1)组细胞毒性和凋亡率增加(P<0.05,P<0.01),且EO 10μmol·L^(-1)组的细胞周期明显阻滞于G2/M期(P<0.01)。与对照组比较,阿霉素组、EO低剂量组、EO高剂量组的裸鼠肿瘤质量显著降低(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织内PCNA和Ki-67抗原表达显著降低(P<0.01),肿瘤体积随治疗进展显著缩小(P<0.01,P<0.05)。与空白对照组比较,各组细胞的Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05);与对照组裸鼠比较,各给药组的Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05)。[结论]EO在体内外抑制BT-20细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制可能与其抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax、PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达有关。

RNA干扰A20基因的表达对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和迁移的影响

目的利用RNA干扰技术靶向沉默A20基因,对MCF-7细胞株增殖、凋亡和迁移的影响进行研究,探讨A20基因作为乳腺癌治疗靶点的潜在价值。方法人工合成靶向A20基因的siRNA序列和阴性对照(NC)siRNA序列,利用脂质体转染技术将siRNA导入MCF-7细胞株,采用CCK-8细胞增殖实验、Annexin V、7-AAD双染流式细胞术检测凋亡实验和Transwell细胞迁移实验研究沉默A20基因对MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移的影响。结果靶向沉默A20基因表达能够有效抑制MCF-7细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡的发生。结论 A20基因在MCF-7细胞的增殖、凋亡和迁移过程中起重要作用,A20基因可能是针对乳腺癌抗肿瘤靶向治疗的潜在靶点。