华蟾素诱导人乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡与Bax/Bcl-2的关系

目的:观察华蟾素在诱导人乳腺癌MCF-7细胞株凋亡的过程中Bax和Bcl-2蛋白表达的变化及意义。方法:在人乳腺癌细胞株MCF-7中分别加入不同终浓度的华蟾素,24h、48h及72h后检测指标。应用MTT比色法检测细胞增殖活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化,TUNEL法检测细胞凋亡指数,Western blot法检测Bax/Bcl-2蛋白表达,共聚焦显微镜观察Bax蛋白分布。结果:华蟾素能显著抑制MCF-7细胞增殖;倒置显微镜下发现凋亡的MCF-7细胞固缩、核染色质凝聚;western blot发现华蟾素能上调MCF-7细胞Bax蛋白表达,但对Bcl-2蛋白表达无影响,正常MCF-7细胞内的Bax均匀分布于细胞质中,华蟾素处理后,Bax明显地聚集于线粒体,呈现线粒体的转位。结论:华蟾素诱导MCF-7细胞凋亡,并在该过程中导致的Bax蛋白表达上调并且向线粒体转位。

黄芩素联合U0126诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的分子机制研究

目的探讨黄芩素和U0126诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的分子机制。方法单独及联合使用20μmol黄芩素、10μmol U0126处理MCF-7细胞24 h;光学显微镜观察细胞数量变化,流式细胞术检测MCF-7细胞周期变化,CCK8法检测细胞增殖变化,TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡,实时聚合酶链反应(Real Time PCR)和Western blot检测凋亡相关因子m RNA和蛋白的表达水平。结果与黄芩素单独刺激MCF-7细胞相比,黄芩素联合U0126刺激MCF-7细胞时,S期细胞比例降低更明显;MCF-7细胞经不同浓度黄芩素或U0126处理后,增殖抑制,且具有浓度依赖性(P<0.05);与黄芩素单独处理MCF-7细胞相比,黄芩素与U0126联合处理时,细胞凋亡更加显著(P<0.05),早期凋亡和晚期凋亡均增多(P<0.05);与黄芩素或U0126单独处理MCF-7细胞相比,黄芩素和U0126联合处理MCF-7细胞时,凋亡抑制因子Bcl-2的m RNA水平降低(P<0.05),凋亡促进因子Bax的m RNA水平增高(P<0.05),ERK1/2、GSK-3β和P38的磷酸化水平降低(P<0.05),凋亡促进因子Bax表达量增高(P<0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达量降低(P<0.05)。结论黄芩素或U0126通过调控Bcl-2/Bax的表达水平以及ERK1/2、GSK-3β和P38的磷酸化水平抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡,且具有协同效应。因此,黄芩素和U0126可联合用于临床治疗乳腺癌,具有重要临床意义。

血管内皮生长因子C在人乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/Adr中的表达

背景与目的:血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC,VEGF-C)是近期发现的血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)家族的新成员。研究发现VEGF-C可特异性作用于淋巴管内皮细胞,并在多种人类肿瘤中表达。为探索VEGF-C在肿瘤发生、发展中的作用,我们分别检测了VEGF-CmRNA和蛋白在人乳腺癌细胞株MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr中的表达。方法:根据VEGF-C基因序列,设计合成地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,运用原位杂交方法检测培养的细胞株MCF-7和MCF-7/Adr中VEGF-CmRNA的表达,并运用免疫组织化学方法检测两种细胞中VEGF-C蛋白的表达,实验中用缓冲液分别代替杂交液和一抗作阴性对照。结果:原位杂交法检测到MCF-7和MCF-7/Adr细胞的胞浆中有阳性蓝色颗粒,免疫组化检测发现两种细胞的胞浆中均有阳性棕黄色颗粒,而阴性对照细胞的胞浆中则均无阳性颗粒。结论:人乳腺癌细胞株MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr细胞能够转录VEGF-CmRNA,并在其细胞浆中翻译合成相应的蛋白。

葡萄籽多酚对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADR的体内外耐药逆转作用

目的:研究葡萄籽多酚(grapeseedpolyphenol熏GSP)对人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF鄄7/ADR的体内外耐药逆转作用。方法:采用MTT法检测1.2mg/L和2.4mg/LGSP对MCF鄄7/ADR的体外耐药逆转倍数。建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,实验分为4组:对照组,GSP组,阿霉素穴adriamycin熏ADR雪组和ADR+GSP组,观察GSP对肿瘤细胞的体内耐药逆转作用;采用流式细胞术测定不同用药组P鄄糖蛋白穴Pgp雪表达变化。结果:体外1.2mg/LGSP即可有效逆转耐药,2.4mg/LGSP的逆转倍数为9.44;体内裸鼠抑瘤实验显示,GSP有一定抑瘤作用,联用ADR可显著抑制肿瘤生长,20mg/kgGSP可有效逆转CF鄄7/ADR细胞的耐药性,抑瘤率为54.64%。流式细胞术结果显示,联用GSP与ADR组肿瘤细胞Pgp表达明显低于单独使用ADR组。结论:GSP能在体内外逆转MCF鄄7/ADR细胞的耐药性,此作用可能是通过抑制Pgp表达实现的。

硼替佐米和3-甲基腺嘌呤对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑瘤效应

目的:研究蛋白酶体活性抑制剂硼替佐米(Bortezomib)对人乳腺癌细胞株MCF-7的自噬诱导和增殖抑制作用,以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)与Bortezomib联合应用对MCF-7细胞自噬及增殖的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖,蛋白质印迹法检测蛋白酶体活性及自噬相关蛋白LC3的表达。结果:Bortezomib能明显抑制MCF-7细胞增殖并诱导其自噬,3-MA与Bortezomib联合应用,可逆转Bortezomib诱导的细胞自噬,并增强Bortezomib对MCF-7细胞增殖的抑制(P<0.05)。结论:联合应用Bortezomib和3-MA可能对乳腺癌细胞自噬和增殖具有协同抑制作用。

聚束微波亚高温热疗诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的研究

目的:探讨亚高温热疗诱导人乳腺癌细胞株MCF-7发生凋亡作用的机制。方法:取对数生长期的人乳腺癌细胞株MCF-7细胞及空白对照组细胞,采用40～41℃,2h聚束微波亚高温热疗分别作用于两组细胞,用Annexin V-FITC/PI法检测两组细胞的凋亡率。结果:聚束微波亚高温(41℃,2h)热疗可以诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,凋亡细胞数随时间的延长而增多。结论:聚束微波亚高温热疗可能通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡发挥抗肿瘤作用。

RNA干扰hTERT基因对人乳腺癌细胞株MCF-7周期及凋亡影响的研究

目的观察载体介导的RNA干扰技术能否有效抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的hTERT的表达及其对细胞周期及凋亡的影响。方法构建2个针对hTERT基因表达短发夹状siRNA的真核表达载体(pshRNA-hTERT)并转染人乳腺癌细胞株MCF-7,通过RT-PCR检测该基因mRNA,Western blot蛋白质检测,端粒酶活性检测,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡等方法检测RNAi效果,从中筛选出基因沉默效果好的靶位点。结果转染乳腺癌细胞后,pshRNA-hTERT1,2质粒均能抑制hTERT基因表达,mRNA表达分别下调了54.6%,55.2%;蛋白表达分别下调46.6%,47.8%。端粒酶活性均明显下降。对乳腺癌细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加。结论 RNAi在体外明显抑制乳腺癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖。

化疗药物对人乳腺癌细胞株MCF-7的药效动力学研究

目的 :用MTT法研究化疗药物氟尿嘧啶 ( 5 FU)、阿霉素 (ADM )、丝裂霉素 (MMC)、甲氨蝶呤 (MTX)对人乳腺癌细胞株 (MCF 7)的药效动力学特征。方法 :MCF 7细胞株在含有不同药物浓度的培养基中孵育不同时间 ,用MTT法测定细胞的抑制率。结果 :MCF 7细胞株对化疗药物的敏感性依次为ADM、5 FU、MMC ,对MTX不敏感 ,低浓度时 5 FU +ADM及 5 FU +MTX的联合用药表现了很强的协同作用 ;相同孵育时间下 ,随着药物浓度的增加 ,ADM、5 FU和MMC对MCF 7细胞株的抑制率明显增加 ,MTX的抑制率没有明显变化 ;而相同浓度下 ,在 2— 2 4h内 ,随着孵育时间的延长 ,细胞的抑制率变化不明显。计算不同作用时间时 ,相同药时曲线下面积 (AUC)的细胞抑制率 ,也呈现下降趋势。结论 :MCF 7细胞株对不同化疗药物的敏感性不同 ,化疗药物的联合应用可明显提高对细胞株的抑制率 ;在影响药剂动力学的主要因素中 ,当药物作用时间大于 2h时 。

△Np73小干扰RNA表达质粒抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖

目的应用小干扰RNA技术抑制△Np73表达,探讨其对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响。方法制备△Np73小干扰表达质粒,脂质体法转染人乳腺癌细胞株MCF-7;荧光显微镜下观察转染细胞绿色荧光蛋白表达,计算转染效率;MTT法检测转染质粒后细胞增殖抑制率;实时荧光定量PCR检测细胞转染质粒后△Np73和TAp73 mRNA的表达;共转染pcDNA3-HA/DNp73α表达质粒与△Np73小干扰质粒,Western Blot检测细胞转染后△Np73和TAp73表达。结果成功构建并转染△Np73小干扰表达质粒,转染效率达62%。经△Np73质粒干扰的细胞增殖活性显著下降,与阴性对照组相比差异显著。△Np73小干扰质粒转染细胞能有效抑制内源性△Np73 mRNA和外源性△Np73蛋白表达,对TAp73无显著抑制作用。结论针对△Np73基因设计的小干扰RNA表达质粒能显著降低MCF-7细胞中△Np73 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞生长增殖,表明靶向沉默△Np73可能为未来人乳腺癌的治疗提供了一个有效途径。

阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响

目的探讨阿帕替尼对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞生物学行为的影响。方法取对数生长期的人乳腺癌MCF-7细胞,随机分为对照组和阿帕替尼组,对照组不予任何处理,阿帕替尼组分别给予浓度为2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的阿帕替尼进行处理。采用二甲基四氮唑蓝(MTT)法检测浓度分别为2.5μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的阿帕替尼对MCF-7细胞生长抑制的作用;采用丫啶橙(AO)/溴乙锭(EB)染色法,于倒置荧光显微镜下观察MCF-7细胞形态变化;采用酶联免疫吸附法测定阿帕替尼对MCF-7细胞上清液血管内皮生长因子(VEGF)含量的影响;采用流式细胞仪检测阿帕替尼对MCF-7细胞周期和凋亡率的影响。结果阿帕替尼对MCF-7细胞具有明显的生长抑制作用,其抑制率随着浓度的增加而升高,呈明显的时间-剂量依赖关系(P<0.05);对照组细胞结构正常,细胞核呈绿色;而阿帕替尼组细胞形态发生明显改变,染色质呈橘红色,呈凋亡状;与对照组细胞周期比较,干预组与对照组G 0/G 1期、S期、G 2/M期均值比率无明显统计学差异(P>0.05);干预组VEGF分泌量明显下降,阿帕替尼浓度越高,VEGF分泌量越低(P<0.05);阿帕替尼组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿帕替尼可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,且具有浓度依赖性,可能与减少VEGF的分泌有关。

莪术油对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖以及细胞周期阻滞的影响

目的:探讨莪术油对体外培养的人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用以及对其细胞周期的影响。方法:采用cck-8检测不同浓度莪术油对体外培养的人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响,并采用流式细胞仪检测其对MCF-7细胞周期的影响。结果:莪术油对MCF-7细胞的增殖存在抑制作用,抑制率与药物浓度呈正相关(P<0.05),且抑制率随着药物作用时间的延长而升高,加药后24 h、28 h、72h对MCF-7细胞的半数抑制浓度分别为335.42μg/mL、242.71μg/mL和155.93μg/mL。采用流式细胞仪观察分析,莪术油作用于MCF-7细胞可使G1期细胞比率增高,S期和G2期细胞数降低。结论:莪术油可对MCF-7细胞增殖产生抑制作用,并使细胞阻滞于G1期。

血管内皮生长因子C在人乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/Adr中的表达(英文)

目的 :检测血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC ,VEGF C)mRNA和蛋白在人乳腺癌细胞株MCF 7及其耐药株MCF 7/Adr中的定位、定性表达。方法 :根据VEGF C基因序列 ,设计合成地高辛标记的特异性寡核苷酸探针 ,运用原位杂交方法检测培养的细胞株MCF 7和MCF 7/Adr中VEGF CmRNA的表达 ;并运用免疫组织化学方法检测了两种细胞中VEGF C蛋白的表达。结果 :原位杂交检测到MCF 7和MCF 7/Adr细胞的胞浆中有阳性蓝色颗粒 ,免疫组化检测发现两种细胞的胞浆中均有阳性棕黄色颗粒 ,而阴性对照细胞的胞浆中则均无阳性颗粒。结论 :人乳腺癌细胞株MCF 7及其耐药株MCF 7/Adr细胞能够转录VEGF CmRNA并在其细胞浆中翻译合成相应的蛋白。

TNF-ɑ调控LRG1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究TNF-α对乳腺癌MCF-7细胞中LRG1蛋白表达的调控及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及相关分子机制。方法:MTT实验检测不同浓度TNF-α处理后MCF-7细胞活力;EdU实验、Transwell实验和划痕实验分别检测抑制LRG1表达后细胞增殖、侵袭以及迁移能力;Western blot检测细胞内MAPK信号通路中p-p38蛋白表达。结果:低浓度TNF-α处理乳腺癌MCF-7细胞,细胞活力增强;抑制LRG1表达后细胞增殖能力下降,侵袭细胞数、细胞迁移率以及p-p38蛋白表达均下降。结论:TNF-ɑ通过调控LRG1的表达促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,这一过程可能通过激活p38MAPK信号通路来实现。

毛酸浆内酯通过抑制STAT3诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

[目的]旨在探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)在毛酸浆内酯(PPB)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中发挥的作用。[方法]采用荧光染色法分析PPB诱导MCF-7细胞凋亡;使用生物信息学方法预测PPB抗乳腺癌的潜在机制;采用噻唑蓝(MTT)法考察STAT3抑制剂S3I-201以及STAT3小干扰RNA(siRNA)对PPB抑制MCF-7细胞生长的作用;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法考察PPB单独处理或STAT3 siRNA预处理后对MCF-7细胞中STAT3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、细胞色素c(Cytochrome c)以及多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的影响。[结果]MCF-7细胞经PPB作用后凋亡形态特征明显,凋亡比例上升;生物信息学结果显示PPB与乳腺癌疾病的共同靶点STAT3在乳腺癌组织中高表达,单基因GSEA结果提示STAT3高表达与凋亡信号通路呈负相关;Western Blot法检测结果显示PPB能够抑制STAT3的磷酸化;S3I-201抑制剂或siRNA敲降STAT3均能进一步促进PPB抑制MCF-7细胞生长;此外,敲降STAT3进一步增加PPB对促凋亡蛋白Bax、Cytochrome c、裂解的Caspase8(Cleaved-Caspase8)、裂解的Caspase9(Cleaved-Caspase9)以及裂解的PARP(Cleaved-PARP)的促进作用,并增加PPB对抗凋亡蛋白Bcl-2的抑制作用。[结论]PPB通过抑制STAT3诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡。

LMAN2在HR阳性乳腺癌组织中的表达与患者预后的关系及其对MCF-7细胞增殖和迁移的影响

目的:探究甘露糖结合凝集素2(LMAN2)在激素受体(HR)阳性乳腺癌组织中的表达水平与乳腺癌患者预后的关系及其对MCF-7细胞增殖和迁移的影响。方法:通过TCGA、Bc-GenExMiner、GEPIA和Kaplan-Meier Plotter数据库分析LMAN2在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的差异性表达及其与患者预后的关系。采用小RNA干扰技术将si-LMAN2#1、si-LMAN2#2及si-NC转染至MCF-7细胞,将过表达LMAN载体(pc-LMAN)及空载体pcDNA3.1阴性对照(pc-NC)转染至MCF-7细胞,实验分为si-LMAN2#1、si-LMAN2#2、si-NC、pc-LMAN2和pc-NC组。通过qPCR和WB实验检测各组细胞中LMAN2 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、WB等实验检测敲低和过表达LMAN 2对MCF-7细胞增殖、克隆形成、迁移及AKT信号通路相关蛋白表达的影响。结果:LMAN2在乳腺癌组织中的表达水平显著高于正常乳腺组织(P<0.001)。HR阳性乳腺癌组织中LMAN2表达水平显著高于HR阴性乳腺癌组织(P<0.001);LMAN2高表达与HR阳性乳腺癌患者不良预后有关联。敲低LMAN2可显著降低MCF-7细胞的增殖和迁移能力(P<0.01或P<0.001),过表达LMAN2可显著提高MCF-7细胞的增殖和迁移能力(均P<0.001)。敲低LMAN2组MCF-7细胞中PTEN和P21蛋白表达水平均显著升高,p-AKT蛋白表达水平显著降低(均P<0.01)。结论:LMAN2在乳腺癌组织和HR阳性乳腺癌组织中高表达,且与不良预后有关联。LMAN2高表达与MCF-7细胞增殖和迁移有关联,其作用机制可能涉及AKT信号通路。

羟基积雪草酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的探讨羟基积雪草酸(madecassic acid,MA)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法将MCF-7细胞分为阴性对照组、不同浓度的MA(80、100、120、140、160μmol/L)组、不同浓度的他莫昔芬(10、20、30、40、50、35μmol/L)组,干预24、36、48 h。初步确定MA发挥抗乳腺癌作用的最佳浓度和最佳时间后,采用MTT法检测细胞活力,计算相应的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值;流式细胞术检测细胞凋亡;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;Western blot法检测细胞增殖蛋白细胞核抗原蛋白(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、自噬蛋白苄氯素-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein1 light chain 3Ⅱ/Ι,LC3Ⅱ/Ι)、螯合体1(protein 62,p62)的蛋白相对表达水平。透射电镜检测自噬小体。结果发挥抗肿瘤作用的他莫昔芬最佳浓度为35μmol/L,MA最佳浓度为140μmol/L,最佳时间均为48 h。与阴性对照组相比,MA140μmol/L组和他莫昔芬35μmol/L组的细胞凋亡率,细胞荧光相对强度以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白相对表达水平均升高(P<0.05,P<0.01);PCNA、P62蛋白相对表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与MA 140μmol/L组相比,他莫昔芬35μmol/L组细胞凋亡率、细胞荧光相对强度以及Beclin-1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.01),PCNA蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。阴性对照组MCF-7细胞膜完整,核膜清晰,细胞形态良好;MA 140μmol/L组细胞膜、细胞核形态不规则,线粒体基质密度较高、嵴扩张,可见自噬小体;他莫昔芬35μmol/L组细胞膜局部溶解、破损,可见双核仁,线粒体肿胀、基质溶解,可见自噬小体。结论MA可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、诱导细胞凋亡和自噬。

菊藻丸含药血清调控PTEN对乳腺癌MCF-7细胞生长和转移的作用研究

目的 研究菊藻丸含药血清调控10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)对人乳腺癌MCF-7细胞生长和转移的作用。方法 8周龄、体重(200±20)g的SPF级Wistar雌性大鼠12只,采用随机数字表法分为菊藻丸组和对照组,各6只。各组分别以5.4 g/(kg·d)菊藻丸和等量生理盐水灌胃,制备含药血清和空白对照血清。将培养好的人乳腺癌MCF-7细胞分为20%空白血清组、5%含药血清组、10%含药血清组、15%含药血清组和20%含药血清组,分别使用含20%空白对照血清和含5%、10%、15%、20%含药血清的培养基进行培养干预。采用CCK-8检测细胞增殖、集落形成实验观察克隆形成能力、TUNEL染色检测凋亡、流式细胞术检测周期分布、划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,q PCR和Western blot检测PTEN m RNA和蛋白表达水平。结果 与20%空白血清组比较,10%、15%、20%含药血清组细胞增殖活性降低、克隆形成率减少、侵袭能力降低(P<0.05);5%、10%、15%、20%含药血清组细胞凋亡水平升高、迁移能力降低、细胞周期阻滞于G1期、PTEN的m RNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与5%含药血清组比较,10%、15%、20%含药血清组细胞增殖活性降低、克隆形成率降低、细胞凋亡水平升高、迁移能力降低、侵袭能力降低、细胞周期阻滞于G1期、PTEN m RNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论 菊藻丸含药血清能抑制MCF-7细胞生长和转移,其机制可能与激活PTEN的表达有关。

TO901317经LXRα/NF-κB抑制MCF-7乳腺癌细胞迁移

目的探究肝X受体(LXR)激动剂TO901317对MCF-7人乳腺癌细胞迁移能力的作用及机制。方法体外培养MCF-7细胞。先运用不同浓度的TO901317处理MCF-7细胞24 h,然后通过LXRαsiRNA转染或核因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC处理细胞,划痕愈合实验检测MCF-7细胞迁移能力的改变,同时运用蛋白免疫印迹法检测LXRα、NF-κB p65与IκBα的表达。结果随着TO901317处理浓度的增加,MCF-7细胞的迁移能力明显得到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);同时LXRα与IκBα的表达逐渐增强,而NF-κB p65的表达则显著降低。LXRαsiRNA可显著延缓TO901317的上述作用,PDTC处理则进一步增强TO901317对乳腺癌细胞迁移的抑制作用。结论TO901317可激活LXRα,下调NF-κB p65、上调IκBα的表达,抑制乳腺癌细胞迁移。

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之间可能存在着互相调控的关系。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的苦参碱诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬及其机制的研究

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及其相关信号通路的影响,为苦参碱的抗肿瘤作用提供更多依据。方法 采用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)法、透射电镜法(TEM)检测给药后细胞自噬水平的变化;Western blot检测苦参碱对自噬相关蛋白LC3、Beclin-1,信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达水平的影响。结果 随着苦参碱浓度的上升,细胞中的自噬水平也在逐渐升高,自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1的表达量呈上升趋势,通路相关蛋白PI3K、Akt、mTOR无明显变化,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达量均呈现下降趋势。结论 苦参碱可剂量依赖性升高MCF-7细胞的自噬水平,机制可能与PI3K/Akt/mTOR介导的信号通路有关。