乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR外泌体传递tTG参与MCF-7细胞耐药的研究

目的:研究乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR通过外泌体传递tTG参与敏感细胞MCF-7耐药的过程。方法:本实验首先培养MCF-7、MCF-7/ADR细胞,然后检测MCF-7、MCF-7/ADR细胞中外泌体的含量,并将外泌体提取后备用。MCF-7/ADR细胞外泌体(EXO/ADR)与MCF-7细胞共培养建立MCF-7的外泌体耐药细胞(MCF-7+EXO/ADR)。使用Western blot法检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中的tTG蛋白的表达水平,使用流式细胞术分别检测敏感细胞株外泌体(EXO/S)、耐药细胞株外泌体(EXO/ADR)中tTG的表达水平。使用CCK-8法分别检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的敏感性情况。结果:实验结果显示,在EXO/S、EXO/ADR中均可以表达CD63、TSG101,但是较低表达Calnexin。经过流式细胞术检测发现,EXO/S、EXO/ADR中的tTG表达水平分别为(18.3±3.63)%、(46.07±8.31)%,二者tTG的表达有明显差异。经过Western blot检测MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR细胞中tTG的表达情况,我们发现MCF-7+EXO/ADR细胞的tTG表达水平较MCF-7细胞升高。MCF-7、MCF-7/ADR和MCF-7+EXO/ADR细胞对阿霉素的IC50分别为(1.91±0.18)μg/mL、(82.11±3.51)μg/mL、(6.16±1.15)μg/mL。结论:MCF-7/ADR细胞可能经分泌外泌体来传递tTG参与MCF-7细胞对阿霉素耐药的过程。

灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用研究

目的探讨灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用。方法采用平板发酵粘质沙雷氏菌WA12-1-18生产灵菌红素,CCK-8测定灵菌红素的体外活性及MCF-7/ADR的耐药指数。构建裸鼠皮下移植瘤模型,灵菌红素高、低剂量组分别腹腔注射5.0、2.5 mg/kg灵菌红素,生理盐水对照位腹腔注射等体积生理盐水,每4天1次,连续用药24 d,观察移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量,HE染色观察移植瘤组织及裸鼠主要脏器的病理情况,免疫组织化学检测移植瘤Ki-67的表达。结果获得的灵菌红素质量分数为95.18%,对MCF-7和MCF-7/ADR的IC50分别为0.484μg/mL和0.264μg/mL。MCF-7/ADR耐药指数13,符合细胞耐药株的要求。灵菌红素处理组裸鼠移植瘤增长速度较生理盐水组慢,肿瘤细胞排列稀疏,核小且着色较浅,Ki-67染色后棕色明显减少。灵菌红素2.5 mg/kg组和灵菌红素5 mg/kg组,在荷MCF-7/ADR裸鼠中抑瘤率分别为37.23%和53.72%。另外,各组裸鼠体质量差异无统计学意义,主要脏器无明显病理变化。结论灵菌红素可抑制裸鼠体内耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的生长,对心、肝、脾、肺和肾等主要脏器无明显毒副作用,为灵菌红素在耐阿霉素乳腺癌的临床应用提供了实验依据。

GSTP1通过调控STAT3信号通路促进乳腺癌细胞增殖与阿霉素耐药

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与阿霉素耐药性的影响及其作用机制。方法 Western blotting检测野生型乳腺癌细胞MCF-7和阿霉素耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中的GSTP1表达量,通过在MCF-7细胞中转染Flag-GSTP1质粒过表达GSTP1,在MCF-7/ADR细胞中转染GSTP1敲低慢病毒(shGSTP1)干扰GSTP1表达;平板克隆形成实验、CCK-8法和流式细胞术检测转染后乳腺癌细胞的增殖能力、阿霉素耐药性及凋亡水平的变化。Western blotting检测GSTP1表达水平的变化对STAT3通路激活的影响。结果 GSTP1在MCF-7细胞中表达量极低,且显著低于MCF-7/ADR细胞系。GSTP1过表达的MCF-7/ADR细胞克隆形成数量显著多于野生型MCF-7细胞(P<0.05)。过表达GSTP1显著提升了MCF-7细胞的增殖能力,而在MCF-7/ADR细胞系干扰GSTP1表达水平后显著抑制了细胞增殖能力(P<0.05)。CCK-8结果显示,在0.1、1、10、50μmol/ml不同浓度的阿霉素处理下,GSTP1表达水平与MCF-7细胞对阿霉素的耐药性呈正相关(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,GSTP1过表达组(Flag-GSTP1)和对照组(Flag)的凋亡率分别为(11.41±1.16)%和(21.1±1.72)%,GSTP1过表达显著抑制了阿霉素诱导的细胞凋亡(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,GSTP1的过表达激活了STAT3信号通路,同时在MCF-7/ADR细胞系中抑制STAT3显著降低了GSTP1的表达水平(P<0.05)。结论 GSTP1通过上调STAT3表达调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖能力和对阿霉素的耐药性。

FOXM1转录激活HJURP介导有氧糖酵解促进乳腺癌细胞的阿霉素耐药性

目的本研究旨在阐明乳腺癌中有氧糖酵解调控阿霉素耐药的作用机制。方法生信分析乳腺癌组织中霍利迪连接识别蛋白(HJURP)和叉头核蛋白1(FOXM1)的表达及其相关性,并分析HJURP的富集通路;qPCR检测HJURP和FOXM1在乳腺癌细胞中的表达;及在阿霉素耐药细胞中的表达。双荧光素酶实验和ChIP实验验证FOXM1与HJURP的结合关系;CCK-8检测细胞活力和IC 50值;Western blot检测糖酵解代谢途径相关的特定基因的表达;Seahorse XP96分析不同处理组的胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR),试剂盒检测各处理组细胞中丙酮酸、乳酸和ATP水平。结果HJURP在乳腺癌中高表达,富集在糖酵解通路上。细胞功能实验发现HJURP能够通过调节有氧糖酵解促进细胞阿霉素耐药性。此外FOXM1靶向结合HJURP,并在乳腺癌中高表达,与HJURP呈正相关。回复实验发现HJURP过表达能够逆转FOXM1敲低对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的抑制作用。结论本研究结果证明转录因子FOXM1能够激活HJURP的转录调节有氧糖酵解促进乳腺癌细胞阿霉素耐药性。

CAFs分泌的PDGFC通过PI3K-mTOR信号通路促进乳腺癌细胞对阿霉素耐药

目的探讨肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)来源的血小板衍生生长因子C(platelet derived growth factor C,PDGFC)是否促进乳腺癌细胞对阿霉素(doxorubicin,DOX)耐药并探讨其机制。方法原代提取CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)并获取CAFs和NFs的条件培养基(conditional medium,CM),观察CAFs-CM是否影响乳腺癌细胞对DOX的敏感性;检测CAFs及其条件培养基中PDGFC的表达;Western blot检测乳腺癌细胞凋亡相关蛋白BAX/BCL2、耐药蛋白ABCG2、线粒体膜蛋白TOM20与COXⅣ及信号蛋白(p-)PI3K与(p-)mTOR的表达;DCFH-DA荧光染色、JC-1试剂盒分别检测乳腺癌细胞内ROS水平与线粒体膜电位。结果CAFs-CM减少乳腺癌细胞中DOX的含量,诱导对DOX耐药,同时乳腺癌细胞中BAX减少,Bcl2增加,ROS减少,线粒体膜电位升高及线粒体膜蛋白TOM20与COXⅣ表达增加。进一步研究发现,CAFs及CAFs-CM中PDGFC均高表达,重组人PDGFC产生了与CAFs-CM相似的促进乳腺癌细胞对DOX耐药的作用,PDGFRα的特异性抑制剂则显著抑制了CAF-CM诱导的耐药;进一步机制研究表明,CAFs分泌的PDGFC通过激活PI3K-mTOR信号通路诱导了乳腺癌细胞耐药。结论CAFs分泌的PDGFC通过PI3K-mTOR通路促进乳腺癌细胞对DOX耐药,这一发现为开发靶向CAFs的抗癌药物提供了新的思路。

人参皂苷 Rg3对人乳腺癌细胞紫杉醇化疗耐药的影响

目的:分析人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞紫杉醇化疗耐药的影响。方法:选择2021年1月至2022年12月为4研究时间段,经低浓度持续递增法建立乳腺癌紫杉醇(PTX)耐药细胞,稀释细胞浓度1×10^(4)个/mL,在96孔板中接种,在明确贴壁后,加入紫杉醇(150µM),分为5组,分别为空白对照组、PTX组、3组G-Rg3+PTX组,每组设3个平行样本。其中,3组G-Rg3+PTX组分别加入G-Rg3药物60µM、80µM、100µM,PTX组及G-Rg3+PTX组均加入PTX 150µM。待PTX组、加入不同浓度(60µM、80µM、100µM)的G-Rg3+PTX组,共4组人乳腺癌MCF-7细胞处理24 h后,检测4组吸光值(OD值),经Annexin-V/FITC和PI双染,流式细胞仪检测,利用GraphPad Prism 7.04计算半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI);其中,RI计算公式为RI=空白对照组耐药细胞IC50/亲本MCF-7细胞IC500。结果:经24 h处理后,空白对照组OD值(0.90±0.04),无IC50值、RI值;PTX组的OD值(0.40±0.06)、IC50值(725.60±5.85)µmol/L、RI值3.2;G-Rg3+PTX组60µM的OD值(0.21±0.06)、IC50值(686.68±5.36)µmol/L、RI值4.9;80µM的OD值(0.17±0.05)、IC50值(412.46±723)µmol/L、RI值6.7;100µM的OD值(0.14±0.04)、IC50值(235.87±5.93)µmol/L、RI值9.1。结论:人参皂苷Rg3能够影响人乳腺癌细胞紫杉醇的化疗耐药性,提升对癌症的抑制作用。

柴胡皂苷D对紫杉醇耐药乳腺癌细胞耐药性的逆转作用研究

目的:研究柴胡皂苷D对紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/PTX)耐药性的逆转作用及其机制。方法:采用噻唑蓝溴化四唑法(MTT法)测定不同质量分数(0、12.5、25、50、100、200 mg/L)PTX处理MCF-7/PTX细胞和MCF-7细胞48 h的细胞存活率,确定MCF-7/PTX细胞对PTX的耐药程度。采用MTT法测定不同质量分数(0.125、0.25、0.50、1.00 mg/L)柴胡皂苷D处理MCF-7/PTX细胞48 h的细胞增殖抑制率,确定柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞的安全性。采用MTT法测定确定0.125、0.25和0.5 mg/L柴胡皂苷D能否调节MCF-7/PTX细胞对PTX的敏感性。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和流式细胞术分别检测不同质量分数的柴胡皂苷D对Yes相关蛋白(YAP)和P糖蛋白(P-gp)表达的影响。进行罗丹明123(Rh123)积累和外流测定。结果:与0 mg/L PTX对比,MCF-7和MCF-7/PTX细胞存活率随PTX质量分数增加而降低,且呈现依赖性(P<0.05);确立100 mg/L PTX作为MCF-7/PTX细胞的给药质量分数。0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞无明显毒性,MCF-7/PTX细胞增殖抑制率随柴胡皂苷D质量分数增加而升高。与PTX组对比,0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D组MCF-7/PTX细胞IC 50、YAP和p-YAP蛋白、P-pg mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与PTX组对比,柴胡皂苷D处理的MCF-7/PTX细胞积累更多Rh123,降低Rh123外排速度(P<0.01)。结论:柴胡皂苷D可能通过下调Hippo/YAP通路逆转P-gp介导的乳腺癌耐药。

miR-339-5p调控EMT影响乳腺癌细胞化疗耐药的机制

目的分析miR-339-5p调控上皮细胞-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞化疗耐药的机制。方法于2023年2月至2024年2月体外培养正常乳腺上皮细胞系(MCF10A)及乳腺癌细胞系MCF-7,构建乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇,将MCF-7/紫杉醇细胞分别转染miR-339-5p模拟物(miR-339-5p mimics组)、miR-339-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-339-5p抑制剂(miR-339-5p inhibitor组)及miR-339-5p抑制剂对照(NC组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)对miR-339-5p水平予以检测,以噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,经流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western Blot法检测EMT相关蛋白[E-cadhesin(E-cad)、Vimentin(Vim)]的表达。采用独立样本t检验、ONE-WAY ANOVA分析及LSD-t检验对所获得的数据进行统计学分析。结果miR-339-5p在MCF-7细胞的表达水平低于MCF10A细胞[(0.36±0.07)比(0.73±0.08),P<0.05];转染48 h后,miR-339-5p mimics组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率高于miR-NC组[(45.86±4.92)%比(20.44±2.16)%、(16.54±1.67)%比(4.23±0.45)%,均P<0.05],miR-339-5p inhibitor组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率低于NC组[(9.74±1.05)%比(17.18±1.84)%、(2.28±0.46)%比(5.43±0.59)%,均P<0.05];miR-339-5p mimics组E-cad水平高于miR-NC组,Vim低于miR-NC组[(0.78±0.07)比(0.42±0.05)、(0.42±0.05)比(0.61±0.07),均P<0.05],miR-339-5p inhibitor组E-cad低于NC组,Vim高于NC组[(0.23±0.04)比(0.34±0.05)、(0.84±0.09)比(0.69±0.08),均P<0.05]。结论miR-339-5p可降低乳腺癌细胞化疗耐药性,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能是通过调控EMT相关蛋白E-cad、Vim而抑制EMT。

细胞因子诱导的杀伤细胞降低乳腺癌耐药细胞系对阿霉素的耐受效应

目的 :探讨细胞因子诱导的杀伤细胞 (cytokine inducedkiller,CIK)与化疗药物对多药耐药 (multidrugre sistance,MDR)肿瘤细胞产生协同杀伤效应的机制。方法 :用细胞培养法加细胞因子在体外诱导并扩增CIK细胞 ,应用MTT法测定CIK细胞、阿霉素及二者联合对靶细胞的杀伤活性 ,用流式细胞术检测靶细胞上P糖蛋白 (P gp)的表达和细胞内药物积累 ,用细胞免疫组化方法检测P gp在MDR靶细胞MCF7adr内的分布。结果 :CIK细胞可使MCF7adr细胞P gp的表达活性下降 82 .5 % ,耐药靶细胞内阿霉素积累增加 3.2倍 ,使联合杀伤率比单纯加阿霉素(同等剂量 )组增加 7.8倍 ,比单纯加CIK细胞 (相同效靶比 )组增加 1.3倍。结论 :CIK细胞可明显抑制MCF7adr肿瘤细胞系的P gp表达 ,可协同阿霉素提高对MCF7adr肿瘤细胞系的杀伤活性。

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞凋亡抗性的影响

目的 探讨甲基莲心碱 (neferine ,Nef)对耐阿霉素人乳腺癌细胞 (MCF 7/Adr)凋亡抗性的影响及其机制。方法 应用Tunel法和PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡 ,间接免疫荧光流式细胞仪检测P gp的表达 ,高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内阿霉素 (ADR)的浓度。结果 ①MCF 7/Adr细胞能耐受 5mg·L- 1 ADR诱导的凋亡 ,而 1 ,5 ,1 0μmol·L- 1 Nef可使 5mg·L- 1 ADR诱导的MCF 7/Adr细胞凋亡从 7 95 %分别增加至 2 1 3 % ,2 7 9% ,61 3 % ;② 1 0μmol·L- 1 Nef可使MCF 7/Adr细胞内ADR积累由 0 52 μg·(1 0 6 cells) - 1 增加到 1 50 μg·(1 0 6 cells) - 1 ;③ 1 0 μmol·L- 1Nef作用 2 4h后 ,MCF 7/Adr细胞P gp的表达明显下降。结论 甲基莲心碱能逆转MCF 7/Adr细胞的凋亡抗性 ,其作用机制可能与抑制P gp的功能和表达、增加ADR在MCF

华蟾素对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素蓄积的影响

目的:测定华蟾素(cinobufacine,Cino)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM内阿霉素(ADM)积累的影响,以探索Cino逆转MCF-7/ADM多药耐药(MDR)的可能机制。方法:MTT法检测CinoMDR的逆转作用,HPLC法检测Cino作用MCF-7/ADM后细胞内ADM的浓度的变化。结果:Cino15mg/L能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度(IC50)由38.14mg/L降至12.93mg/L,显著增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的浓度。结论:Cino能明显增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的含量,部分逆转MCF-7/ADM的MDR。

华蟾素对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转作用

目的以耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM为对象,验证华蟾素(cinobufacine,Cino)能否逆转其对阿霉素(ADM)的耐药性。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,高效液相色谱法检测细胞内ADM的浓度,流式细胞术测定P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)的表达。结果Cino15mg·L-1能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度(IC50)由38.14mg·L-1降至12.93mg·L-1;能提高ADM在MCF-7/ADM细胞内的浓度,降低MCF-7/ADM细胞P-gp的表达。结论研究表明Cino能部分逆转MCF-7/ADM细胞的MDR,其机制与抑制P-gp的功能与表达,增加细胞内ADM的含量有关。

中药R_3(补骨脂抽提剂)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF_7^(adr)多药耐药的逆转

耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF7adr具多药耐药（Multidxugresistance，MDR）表型。补膏脂抽提剂R3（粉剂）的无细胞毒浓度1：90（2mg／ml）、1：60（3mg／ml）及1：30（6mg／ml），可增加MCF7adr对可霉素（Adriamycin，ADM）的敏感性10．4倍、292倍及730倍。1：90R3＋异搏定（Vera－Pamil，VPL）10μM使MCF7adr对CAM敏感性由10．4倍增至122倍。提示二者有协同作用。流式细胞技术（FCM）显示R3可明显增加MCF7adr细胞内Rh0－123含量。免疫细胞化学技术结果示R3可完全抑制卜糖蛋白（P－glycoprotein，Pgp）表达，是时间依赖性，48小时后MCF7adr细胞Pgp表达完全消失。故提示Ra可能通过抑制Pgp功能，增加ADM在MCF7adr细胞中浓度调控MCF7adr的耐药性。

中药方剂R_1对耐阿霉素人乳腺癌细胞P糖蛋白表达的影响

免疫细胞化学技术和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证实ＭＣＦ７ａｄｒ细胞Ｐ－糖蛋白（ＰＧＰ）过量表达，而ＭＣＦ７细胞无ＰＧＰ表达。１：６０Ｒ１（复方Ｒ１）和１：９０Ｒ１处理细胞２小时、３小时均使ＭＣＦ２ａｄｒ细胞ＰＧＰ表达下降，并且与药物作用时间和浓度有关。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析示ＭＣＦ１ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ高表达，而ＭＣＦ７细胞无表达。１：６０Ｒ１、１：９０Ｒ１处理２小时或３小时均使ＭＣＦ７ａｄｒ细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达降低，且随着时间的延长而更加明显。浓度（１：６０Ｒ１，１：９０Ｒ１）改变对耐药细胞ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达下降的影响程度无明显差异。结果提示Ｒ１的逆转作用机理之一可能与其从蛋白质和ｍＲＮＡ水平使耐药细胞ＰＧＰ表达下降．从而增加细胞内药物聚集量和抗癌药细胞毒性有关。

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素积累的影响

目的 研究甲基莲心碱 (Nef)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF 7/Adr内阿霉素 (ADM )积累的影响。方法 MTT法检测Nef对多药耐药性 (MDR)的逆转作用 ,高效液相色谱 (HPLC)法检测细胞内阿霉素浓度。结果 Nef能降低阿霉素对MCF 7/Adr细胞IC50 值 ,能提高MCF 7/Adr细胞内ADM的浓度。结论 Nef逆转MCF 7/Adr细胞多药耐药的机制与其增加多药耐药细胞内抗癌药物积累有关。

甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转

目的:研究甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF7/Adr多药耐药multidrugresistanceMDR性的逆转作用及其机制。方法:采用MTT法检测药物细胞毒性作用,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素ADR的浓度,流式细胞术测定细胞P糖蛋白Pgp的表达。结果:甲基莲心碱1～10μmol·L-1能不同程度地降低ADR对MCF7/Adr细胞的IC50。10μmol·L-1甲基莲心碱能显著提高ADR在MCF7/Adr细胞内的浓度,降低MCF7/Adr细胞Pgp的表达。结论:甲基莲心碱能逆转MCF7/Adr细胞的MDR,其机理与抑制Pgp的功能及其表达,增加细胞内ADR的积累有关。

MiR-186-5p通过靶向调控RAB2A在乳腺癌细胞阿霉素耐药性中的逆转作用机制

目的探讨miRNA-186-5p在乳腺癌细胞阿霉素耐药性逆转作用中的分子机制。方法采用阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7,建立阿霉素耐药性细胞株,命名为MCF-7/ADR;采用双荧光素酶实验检测miR-186-5p与RAB2A的靶向结合情况;采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中miR-186-5p、RAB2A mRNA的表达及RAB2A蛋白的表达情况;特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,下调MCF-7中的miR-186-5p后,采用CCK-8和Western blot分别检测乳腺癌细胞增殖情况以及RAB2A蛋白的表达;采用Western blot和CCK-8分别检测共转染后,细胞增殖情况的变化及PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果双荧光素酶实验结果显示,RAB2A是miR-186-5p的直接靶点;qRT-PCR结果显示,在MCF-7/ADR细胞中miR-186-5p mRNA表达明显下调,而RAB2A mRNA表达没有明显变化,RAB2A的蛋白表达明显上调。特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,其增殖能力明显下降,RAB2A蛋白的表达明显下调;下调MCF-7中的miR-186-5p,其增殖能力明显增加,RAB2A蛋白的表达明显上调。Western blot和CCK-8结果显示,过表达miR-186-5p使PI3K/Akt信号通路表达明显减弱,且上调RAB2A逆转了上调miR-186-5p所致的增殖能力的减弱。结论 miR-186-5p通过靶向调控RAB2A,经PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞的阿霉素耐药和增殖。

山柰酚诱导人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素凋亡的研究

目的研究山柰酚对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素(ADR)的增殖与凋亡的作用机制。方法(1)将人乳腺细胞MCF-7分为2组:空白组(培养基)和实验组。实验组分别用含不同浓度的山柰酚(20,50,100,150,200,300,400,500μmol·L^(-1))的培养基干预。干预48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。(2)将MCF-7/ADR细胞分为3组:ADR组(ADR 0.1μmol·L^(-1))和低、中2个浓度山柰酚联合组(ADR 0.1μmol·L^(-1)+分别加山柰酚20,50μmol·L^(-1)),MTT法测定细胞存活率,计算半抑制浓度(IC_(50))。(3)将MCF-7/ADR细胞分为8组:空白组(培养基)、ADR组(ADR 0.1μmol·L^(-1))、低、中、高3个浓度的山柰酚组(山柰酚:20,50,100μmol·L^(-1))和低、中、高3个联合组(ADR 0.1μmol·L^(-1)+分别加山柰酚20,50,100μmol·L^(-1))。干预后,流式细胞术检测细胞凋亡率。(4)将细胞分为2组:MCF-7组与MCF-7/ADR组;再将MCF-7/ADR细胞分为4组:空白组合低、中、高3个浓度山柰酚组(山柰酚:20,50,100μmol·L^(-1))。干预后,蛋白质印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平(灰度值比值)。结果(1)根据细胞存活率选择低、中、高3个浓度(20,50,100μmol·L^(-1))的山柰酚进行以下实验。(2)ADR组和低、中2个浓度山柰酚联合组的IC_(50)分别为(43.68±0.71),(17.68±3.14)和(23.51±0.07)μmol·L^(-1)。低、中2个浓度山柰酚联合组与ADR组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(3)空白组、ADR组、3个浓度(由低到高)的山柰酚组和低、中、高3个联合组的细胞凋亡率分别为(0.17±0.24)%,(23.00±1.14)%,(9.53±1.24)%,(17.07±1.04)%,(22.20±1.15)%,(16.03±1.74)%,(21.43±2.21)%和(21.93±3.57)%。ADR组、山柰酚组和联合组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01),低剂量联合组与ADR相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)MCF-7组与MCF-7/ADR组的Bcl-2蛋白表达分别为1.47±0.33和0.56±0.20,这2组的Caspase-9蛋白表达分别为0.89±0.67和4.12±1.25。2组相比,上述蛋白表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。空白组和低、中、高3个浓度山柰酚组的Bcl-2蛋白表达分别为1.30±0.19,1.20±0.05,1.45±0.15和0.81±0.16;这4组的Caspase-9蛋白表达分别为1.02±0.09,0.96±0.07,0.79±0.07和0.40±0.18。高剂量组与空白组相比,上述2种蛋白表达的差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论山柰酚对MCF-7细胞有毒性作用,与ADR联合用药后降低ADR在MCF-7/ADR中的IC_(50),山奈酚提高MCF-7/ADR细胞的凋亡,可能与降低Bcl-2蛋白表达与升高Caspase-9蛋白表达有关。

c-Met对三阴性乳腺癌细胞增殖及阿霉素耐药性的影响

目的:研究c-Met对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231活力及对阿霉素耐药性的影响。方法:构建阿霉素耐药的MDA-MB-231/ADR细胞系,实时荧光定量PCR及Western blotting技术检测不同细胞系中c-Met mRNA及蛋白的表达。脂质体转染c-Met-siRNA及表达质粒或AKT-siRNA,Western blotting检测转染效率;四甲基偶氮唑法(MTT法)检测细胞的活力及对阿霉素的敏感性。结果:对阿霉素耐药的MDA-MB-231/ADR细胞中cMet的mRNA及蛋白表达均显著高于对照的MDA-MB-231细胞,转染高表达c-Met的质粒可增加MDA-MB-231细胞的活力并降低其对阿霉素的敏感性,而利用siRNA抑制耐药细胞株中c-Met的表达后,可以逆转MDA-MB-231/ADR细胞对阿霉素的耐药。此外,c-Met可以磷酸化激活细胞中的AKT,并通过该信号分子增加MDA-MB-231细胞活力并诱导耐药。结论:c-Met可作为一个重要的靶点应用于三阴性乳腺癌的治疗。

褪黑素逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM对阿霉素耐药的作用机制

目的：探讨生理浓度（10^-9mol/L）和药理浓度（≥10^-5mol／L）褪黑素对耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7／ADM耐药的逆转作用及其机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测经不同浓度的褪黑素孵育后，阿霉素对MCF-7／ADM细胞系半数抑制浓度IC50的改变。在电镜下观察单用阿霉素（20ug／ml）以及药理浓度的褪黑素（10^-5mol/l）孵育后再应用阿霉素（20ug／ml）后MCF-7／ADM细胞超微结构的变化。应用分光光度法测定MCF-7／ADM和MCF-7/s细胞内GSH水平及褪黑素孵育后MCF-7／ADM和MCF-7／s细胞内GSH水平变化。结果：褪黑素孵育前阿霉素作用于MCF-7／ADM的IC50值为24．41ug／ml。经生理浓度（10^-9mol／1）的褪黑素孵育后阿霉素IC50值为20．92ug／ml，两者经比较未见显著性差异（P=0．356）。经浓度为10^-5mol／L和10^-3mol／L的褪黑素孵育后阿霉素作用于MCF-7／ADMIC50值分别成为12．25ug／ml和10．46ug／ml，与孵育前阿霉素作用于MCF-7／ADM的IC50（24．41ug／ml）相比差异均具有显著性（P〈O．01）。在电镜下均可观察到，经药理浓度（10^-5mol／l）的褪黑素孵育后，阿霉素（20ug／ml）对细胞的损伤更为严重。经分光光度法测得MCF-7／ADM细胞内GSH水平明显高于MCF-7／s，生理浓度褪黑素并不能使MCF-7／ADM和MCF-7／s细胞内GSH水平明显降低（P=0．965），而药理浓度的褪黑素可以显著降低MCF-7／ADM和MCF-7／s细胞内GSH水平且具有一定的浓度依赖性（P〈0．01）。结论：生理浓度的褪黑素对MCF-7／ADM的耐药未见明显影响，药理浓度的褪黑素对MCF-7/的ADM耐药性具有较明显逆转作用，其逆转机制可能与褪黑素对细胞内GSH水平调控有关。