沙棘籽渣黄酮类化合物诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的研究

探讨了沙棘籽渣黄酮类化合物(flavonoids from seed residues of Hippophae rhamnoidesm L.FHR)对人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的影响和其作用机制.采用MTT法、Wright染色法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法,观察在不同浓度和作用时间时,FHR对Bcap-37细胞生长抑制和细胞凋亡效应.结果显示FHR在10～1000μg/mL等浓度范围内可以诱导人乳腺癌细胞Bcap-37产生典型的凋亡形态学变化;1000μg/mL FHR处理24 h、48 h和72 h后使Bcap-37细胞周期S期减少,G0/G1期增加;FHR处理实验组p53蛋白表达较对照组明显增加,bcl-2蛋白表达较对照组降低.提示FHR对人乳腺癌Bcap-37细胞的生长抑制主要通过诱导细胞凋亡,且p53蛋白的增加和bcl-2蛋白的减少是其诱导细胞凋亡的机制之一.

三种藻胆蛋白对人乳腺癌Bcap-37细胞的光动力杀伤效果

从高等红藻坛紫菜中提取R-藻红蛋白(R-PE)、R-藻蓝蛋白(R-PC),从低等蓝藻钝顶螺旋藻中提取C-藻蓝蛋白(C-PC).研究10、25、50和100μg/mL的R-PE、R-PC和C-PC介导的光动力效应对乳腺癌细胞Bcap-37的生存率的影响,MTT法测定结果,探讨这三种藻胆蛋白对癌细胞的光动力杀伤效应与其光敏性质差异的相关性.三种藻胆蛋白的光动力作用对Bcap-37细胞具有显著杀伤并显示出剂量效应,质量浓度在25μg/mL以上时,杀伤效果依次为:R-PE>R-PC>C-PC;仅用激光处理(497nm,632.8nm),Bcap-37细胞的生存率达到88.6%和91.3%;仅用藻胆蛋白处理,培养24h后,R-PE<25μg/mL,R-PC、C-PC<50μg/mL时,对Bcap-37细胞具有一定的促进生长作用,R-PE≥25μg/mL,R-PC、C-PC≥50μg/mL时,抑制细胞生长.

苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞发生自噬与自噬相关蛋白mTOR相关性研究

目的探讨苦参碱是否可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。方法苦参碱(终浓度为0、1、2mg/m L)±氯喹(chloroquine)(自噬抑制剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24h,运用免疫印迹(Western-blot)法检测PI3K/Akt信号通路自噬相关蛋白mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6、e IF4E表达。苦参碱(终浓度为0、1、2mg/m L)±Bafilomycin A1(自噬抑制剂)/Rapamcin(自噬诱导剂)处理乳腺癌Bcap-37细胞24h,Western-blot法检测e IF4E蛋白的表达。结果苦参碱剂量依赖性抑制mTOR、p70S6k磷酸化,同时降低e IF4E蛋白表达;当苦参碱联合氯喹(CQ)作用于乳腺癌Bcap-37细胞时,则对上述蛋白表达均无明显抑制作用。苦参碱联合Bafilomycin A1作用于Bcap-37细胞时,e IF4E蛋白表达同样无明显改变;苦参碱联合Rapamcin时,e IF4E蛋白表达则呈剂量依赖性降低。结论苦参碱可通过抑制mTOR活性阻断PI3K/Akt信号通路,从而诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬发生。

苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响及其作用机制探讨

目的:观察苦参碱对人乳腺癌Bcap-37细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:用MTT法检测苦参碱对Bcap-37细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:苦参碱对Bcap-37细胞增殖具有明显抑制作用,且具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,药物作用24、48、72h后,苦参碱组的凋亡率均明显增高(P<0.01),并以作用48h最明显。Caspase-3、Bax蛋白表达增高,Bcl-2蛋白降低。结论:苦参碱对Bcap-37细胞生长具有明显抑制作用,其作用机制可能与上调Caspase-3、Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡有关。

冬凌草甲素对人乳腺癌Bcap-37细胞的增殖抑制作用及其机制

目的观察冬凌草甲素对人乳腺癌细胞株Bcap-37细胞的生长抑制作用,初步探讨冬凌草甲素调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法 MTT比色法检测冬凌草甲素对Bcap-37细胞的增殖抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞周期分布,RT-PCR检测p21、cdc2和cyclin B1 mRNA表达。结果冬凌草甲素对Bcap-37细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖趋势(P<0.01);处理后的Bcap-37细胞发生明显的形态改变;作用24h后,Bcap-37细胞在G2/M期阻滞;冬凌草甲素作用Bcap-37细胞后,p21 mRNA水平的表达增加,而cdc2、cyclin B1 mRNA的表达降低(均P<0.05)。结论冬凌草甲素可抑制乳腺癌细胞的增殖,该作用可能与p21 mRNA表达上调及cdc2、cyclin B1 mRNA表达下调有关。

蒺藜皂苷对乳腺癌细胞Bcap-37的体外抑制作用

采用生长曲线法、MTT法、蛋白质含量测定以及形态学方法观察了蒺藜皂苷(STT)对于体外培养Bcap-37细胞抑制作用,结果显示:STT对于Bcap-37细胞增殖有较强的抑制作用,且呈明显的剂量与时间依赖关系,经STT作用后,细胞形态学表现为细胞变圆、皱缩,核固缩、浓聚。

苦参碱对乳腺癌Bcap-37细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨苦参碱对乳腺癌Bcap-37细胞增殖和凋亡的影响。方法 2 mg/mL苦参碱处理Bcap-37细胞后,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、c-Myc、生存素(Survivin)、p53蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53mRNA表达。然后,在苦参碱作用基础上以p53抑制剂Pifithrin-α处理Bcap-37细胞后,RT-PCR及Western blot检测p53表达水平,MTT法、流式细胞仪、Western blot检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达。结果苦参碱处理Bcap-37细胞后,细胞OD值、Cyclin D1、c-Myc、Survivin蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),凋亡率、p53蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。加入Pifithrin-α后,与单用苦参碱比较细胞OD值、Cyclin D1、c-Myc、Survivin蛋白相对表达量显著上调(P <0. 05),细胞凋亡率、p53蛋白相对表达量均显著下降(P <0. 05)。结论苦参碱可抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调p53基因表达有关。

大豆异黄酮抑制BCap-37乳腺癌细胞增殖的作用研究

采用二羟异黄酮、三羟异黄酮处理BCap - 37细胞 1～ 4d后 ,以生长曲线、3 H -TdR掺入试验反映其增殖活力 ,用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。结果显示 :1～ 9×10 5mol/L三羟异黄酮处理BCap - 37细胞 3～ 4d后 ,对BCap -37细胞有增殖抑制作用 ,且与剂量及培养时间成正相关 ,而在相同剂量条件下二羟异黄酮对BCap - 37细胞生长无抑制作用。三羟异黄酮处理BCap - 37细胞 4d后 ,BCap - 37细胞的增殖指数明显下降 ,细胞主要阻滞于G1期。提示 :三羟异黄酮对BCap -

亚硒酸钠对Bcap-37人乳腺癌细胞体外增殖及3种酶细胞化学的影响

目的 观察体外培养中亚硒酸钠的浓度变化和培养时间的延长对Bcap 37人乳腺癌细胞增殖及酶活性的影响。 方法 在体外培养Bcap 37人乳腺癌细胞中加入不同浓度的亚硒酸钠 ,常规染色显示其形态和增殖情况及各组Bcap 37人乳腺癌细胞内的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和非特异性酯酶活性。 结果 2 μmol L的亚硒酸钠对肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用 ,而 10 μmol L、5 0 μmol L的亚硒酸钠具有一定的细胞毒性。Bcap 37人乳腺癌细胞内的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、非特异性酯酶活性随着硒浓度的加大 ,培养时间的延长呈下降趋势 ,并且10 μmol L、5 0 μmol L亚硒酸钠培养 2d后 ,3种酶的活性完全消失。 结论 硒对肿瘤细胞的生长和酶的活性都具有抑制作用 ,并且两者之间存在着一致性。

Genistein对人乳腺癌细胞株BCaP-37的体外抑制作用

目的 :观察Genistein对乳腺癌细胞的抑制作用。方法 :采用MTT法、克隆形成实验、3 H TdR掺入实验测定Genistein对人乳腺癌细胞株BCaP 3 7的生长、克隆形成和DNA合成能力的抑制作用。结果 :Genistein能明显抑制BCaP 3 7细胞的生长、克隆形成和DNA合成 ,呈明显的剂量 效应关系 ,随作用时间延长其效果明显增强。结论 :Genistein通过抑制人乳腺癌细胞株BCaP 3 7DNA合成而降低其生长和繁殖能力。

促性腺激素释放激素类似物那法瑞林对人乳腺癌细胞BCaP-37生长的影响

目的：观察促性腺激素释放激素（ＬＨＲＨ）类似物那法瑞林对体外培养的人乳腺癌细胞ＢＣａＰ－３７生长的影响。方法：培养的ＢＣａＰ－３７细胞，经下列条件作用４ｄ后进行细胞计数：（１）加入１０－５～１０－９ｍｏｌ／Ｌ的那法瑞林；（２）加入１０－７～１０－１０ｍｏｌ／Ｌ的雌二醇（Ｅ２）；（３）在含１０－８ｍｏｌ／ＬＥ２的条件下，加入１０－６～１０－８ｍｏｌ／Ｌ的那法瑞林或他莫昔芬；（４）加入１０ｎｇ／ｍｌ或５０ｎｇ／ｍｌ的表皮生长因子（ＥＧＦ）；（５）在含１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ的条件下，加入１０－５～１０－７ｍｏｌ／Ｌ的那法瑞林。结果：那法瑞林在１０－５～１０－９ｍｏｌ／Ｌ浓度下对ＢＣａＰ－３７培养细胞的生长无显著抑制作用，在１０－６～１０－８ｍｏｌ／Ｌ浓度下可拮抗１０－８ｍｏｌ／ＬＥ２对ＢＣａＰ－３７细胞的生长促进作用，对１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ抑制ＢＣａＰ－３７细胞生长的作用无显著影响。他莫昔芬拮抗Ｅ２促进ＢＣａＰ－３７生长的作用与那法瑞林相似。结论：那法瑞林对人乳腺癌细胞ＢＣａＰ－３７体外培养生长无显著抑制作用。

纳米氧化铈对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨纳米氧化铈(nm-Ce O2)对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法建立人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为阴性对照组(等体积双蒸水)、阳性药组[九州虫草2 000 mg/(kg·次)]、nm-Ce O2高、中、低剂量组[300、100、33.33 mg/(kg·次)],共5组,各组荷瘤裸鼠均经口灌胃给药,每天1次,共17 d,观察各组裸鼠移植瘤生长情况,计算肿瘤体积(VT)、肿瘤生长抑制率,称量肿瘤重量,观察移植瘤组织病理变化,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal dexynucleotidyl transferase mediated d UTP nick end la beling,TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡率。结果与阴性对照组比较,nm-Ce O2各剂量组均具有抑制人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用,并能促进瘤细胞的变性、坏死和凋亡(P<0.05)。nm-Ce O2高剂量组的肿瘤生长抑制作用低于阳性药组(P<0.05),但nm-Ce O2高、中剂量组促进肿瘤细胞凋亡的作用高于阳性药组(P<0.05)。结论 nm-Ce O2对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤具有显著的生长抑制作用。

维生素E琥珀酸酯联合阿霉素对乳腺癌细胞株Bcap-37的生长抑制作用

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合阿霉素(ADM)对乳腺癌细胞生长抑制作用。方法以VES联合ADM作用于人乳腺癌Bcap-37细胞24h和36h,VES浓度为5、10、20mg/L,ADM的浓度分别为0.25、1、2mg/L。采用MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析药物联合作用前后乳腺癌细胞凋亡率的变化和对细胞表面Fas表达的影响。结果VES联合ADM对乳腺癌Bcap-37细胞具有显著的生长抑制和凋亡诱导作用。流式细胞仪分析细胞周期,Bcap-37细胞的自然凋亡率为0.7%,5mg/L和20mg/LVES作用24h后凋亡率分别为10.1%和19.2%,1mg/L和2mg/LADM作用24h后的凋亡率分别为16.0%和23.3%。5mg/LVES联合1mg/LADM以及20mg/LVES联合2mg/LADM作用24h后的凋亡率分别升高至31.1%和40.7%。VES联合ADM作用24h后Bcap-37细胞表面Fas表达增强。结论VES联合ADM对乳腺癌Bcap-37细胞具有显著的生长抑制作用,其机制可能与细胞表面Fas表达上调有关。

Cyclopamine对人乳腺癌细胞Bcap-37生长和增殖的影响

目的：研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人乳腺癌细胞Bcap-37生长和增殖的影响。方法：培养Bcap-37细胞系，加入Hedgehog（Hh）信号通路特异性抑制剂Cyelopamine作用72h，观察光镜下细胞形态学的变化；采用单四唑（Mar）和溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入的方法，检测Cyclopamine对Beap-37细胞系生长和DNA合成的影响；再用流式细胞仪检测Cyclopamine对Bcap-37细胞周期的影响。结果：与对照组相比，加入5×10^-6mol／L的Cyclopamine后在倒置显微镜下可见细胞立体感消失，细胞内空泡增多；5×10^-6mol／L的Cyelo-pamine使Bcap-37细胞的生长曲线下移，10^-7-10^-5mol／L的Cyelopamine可剂量依赖性地抑制Bcap-37细胞的生长；Bcap-37细胞系的DNA合成被Cyelopamine明显抑制，S期细胞比例降低，并出现了明显的G2期阻滞。结论：Cyclopamine可以有效地抑制Bcap-37细胞的生长和增殖，提示Hh信号通路可能在乳腺癌中被异常激活，抑制Hh信号通路的活性可能对乳腺癌的治疗起到一定的作用。

ING5基因对乳腺癌细胞Bcap-37恶性表型的影响

目的研究生长抑制因子5(ING5)基因对人乳腺癌细胞Bcap-37增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。方法稳定转染p EGFP-N1-ING5真核表达载体和p EGFP-N1空载体至Bcap-37细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR方法筛选ING5高表达细胞株。将Bcap-37-ING5细胞作为实验组,Bcap-37-GFP细胞为空载体组,Bcap-37为空白对照组。采用MTT法检测ING5对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况。结果稳定转染后获得稳定表达GFP标记的ING5蛋白的Bcap-37细胞株。ING5过表达可以抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖并导致G2期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移(P<0.05)。结论 ING5过表达可逆转乳腺癌Bcap-37细胞的恶性表型,可作为乳腺癌预后判断和基因治疗的分子靶标。

冬凌草甲素对乳腺癌Bcap-37细胞凋亡影响的研究

目的 通过体外无菌培养乳腺癌Bcap-37细胞,观察冬凌草甲素对Bcap-37细胞的活性以及凋亡的影响,探索冬凌草甲素的抗肿瘤机制.方法 无菌培养Bcap-37细胞,冬凌草甲素浓度为0、1、2、4、8、16、32、64μg/ml,作用12、24、36、48h时,采用MMT法检测冬凌草甲素抑制Bcap-37细胞活性;冬凌草甲素浓度为8μg/ml、32μg/ml,作用24h,流式细胞术检测冬凌草甲素对Bcap-37细胞凋亡的影响.结果 冬凌草甲素对乳腺癌Bcap-37细胞有增殖抑制以及诱导凋亡的作用.结论 冬凌草甲素可抑制乳腺癌Bcap-37细胞的增殖以及诱导细胞凋亡,为临床治疗乳腺癌提供了新的依据.

BCL—2蛋白不能抑制VP16诱导的乳腺癌细胞(Bcap37)凋亡

目的 为了解BCL—2在Bcap37细胞表达增高能否抑制足叶乙甙诱导的细胞凋亡,把重组的逆转录表达载体pLXSN—bcl—2和pLXSN—neo转染Bcap37细胞,经G418筛选获得表达细胞(Bcap37—bcl—2,Bcap37—neo)。方法 经RT—PCR和Western blotting检测bcl—2基因的表达,并用不同浓度的VP16处理两种细胞16小时,经细胞形态观察、细胞凋亡原位显示、MTT实验检测细胞的凋亡变化。结果 两种细胞的凋亡变化没有显著差异。结论 BCL—2高表达不能阻滞VP16诱导的Bcap37细胞凋亡,这与我们以前所做的关于BCL—2能阻滞VP16诱导的K562细胞凋亡作用相反,推测BCL—2的抗凋亡作用可能和细胞类型有关,可能还有其它因素参与BCL—2对细胞凋亡的调节。

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法:将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果:重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制(P<0.05);转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组(P<0.05),但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降(P<0.05),Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论:LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。

黄芩苷体外调控乳腺癌细胞表达TI MP2的实验研究

目的:探讨黄芩苷对Bcap37细胞生长及TIMP2表达的影响。方法:体外细胞培养、MTT法测定不同浓度黄芩苷对Bcap37细胞生长曲线的影响,RTPCR、Westernblot方法研究不同浓度黄芩苷对Bcap37细胞TIMP2的影响。结果:黄芩苷对Bcap37细胞的生长抑制呈浓度依赖关系;黄芩苷对Bcap37细胞TIMP2在mRNA水平、蛋白水平呈浓度依赖关系,小剂量上调,高剂量下调。结论:黄芩苷对人乳腺癌Bcap37细胞生长有抑制作用,可能与肿瘤细胞TIMP2的下调有关。

IL-37在浸润性乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨IL-37在浸润性乳腺癌(Invasive breast carcinoma, IBC)中的表达及临床意义。方法:回顾性分析2014年1月26日—2021年6月19日于东莞东华医院确诊为浸润性乳腺癌的104例患者的临床资料,免疫组化方法检测IL-37在浸润性乳腺癌中的表达,并分析其与Nottingham组织学分级、分子分型、组织学类型、雌激素受体(Estrogen receptor,ER)、孕激素受体(Progesterone receptor,PR)、细胞增殖核抗原(Cell proliferating nuclear antigen,Ki-67)、人表皮生长因子受体2(Human epidermal growth factor receptor 2,HER2)、表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)、年龄等的关系。结果:IL-37在IBC中的表达,IL-37阴性10例(9.61%)、低表达25例(24.04%)、高表达69例(66.35%)。IL-37在IBC中与ER(r=0.468,P<0.001)、PR(r=0.354,P=0.002)表达呈正相关,与Ki-67(r=-0.324,P=0.001)、EGFR(r=-0.388,P=0.001)表达及组织学分级(r=-0.557,P<0.001)、分子分型(r=-0.521,P<0.001)呈负相关,与组织学分型、HER2表达及年龄无明显相关性(P>0.05)。结论:IL-37的表达与浸润性乳腺癌的激素受体表达、组织学分级及分子分型等临床病理特征密切相关。