重组人gdnf在人乳腺肿瘤上皮细胞中表达的研究

为了在人乳腺肿瘤上皮细胞系中表达重组人胶质细胞源性神经营养因子（ GDNF ），本研究构建了牛β－casein基因启动子驱动的重组人GDNF乳腺上皮细胞特异表达载体，用脂质体介导法将其导入人乳腺肿瘤上皮细胞系Bcap－37细胞中，经G418抗性筛选8～10 d后，分离稳定表达红色荧光蛋白的转染细胞，PCR鉴定转基因细胞，用催乳素、胰岛素及氢化可的松诱导培养转基因细胞，RT－PCR和Western Blot检测重组人GDNF的表达分泌。结果表明：重组人GDNF乳腺上皮细胞特异表达载体被成功构建，转染Bcap－37细胞后，稳定整合到细胞染色体中，转基因细胞经激素诱导后能够表达分泌糖基化的 GDNF，为高效制备与天然人GDNF蛋白结构完全一致的重组人GDNF蛋白用于帕金森病临床治疗研究奠定了基础。

20(R)-人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞自噬作用的影响

目的 观察20(R)-人参皂苷Rg 3 对人乳腺癌细胞（MCF-7）自噬作用的影响，并探讨20(R)-人参皂苷Rg 3 诱导MCF-7 自噬作用的最佳剂量。方法 人乳腺癌细胞株分为20(R)-人参皂苷Rg 3 实验组及空白对照组。采用MTT 法观察20(R)-人参皂苷Rg 3 对MCF-7 细胞生长的抑制作用，并依据计算出的IC 50 值确定20(R)-人参皂苷Rg 3 的有效浓度。结果 当20(R)-人参皂苷Rg 3 浓度在37.5～600.0 mg/L 时，MCF-7 细胞的生长抑制率最高，并随其浓度的增加而增大，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在荧光显微镜下观察到细胞所含自噬泡明显增多，说明20(R)-人参皂苷Rg 3 可诱导乳腺癌细胞自噬。蛋白质印迹法检测结果显示：LC 3 蛋白，特别是LC 3-II 的表达量与细胞自噬程度呈正相关，随着20(R)-人参皂苷Rg 3 干预浓度的增大，LC 3-I 和LC 3-II 蛋白表达量亦明显升高，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 20(R)-人参皂苷Rg 3 能显著抑制MCF-7细胞的增殖，且呈现良好的剂量、时间依赖性；20(R)-人参皂苷Rg 3 有诱导MCF-7 细胞自噬作用。