谷胱甘肽过氧化物酶基因重组乳酸菌的优化培养及其抗逆功能

为获取谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)基因重组乳酸菌NZ9000/pNZ8148-GPx(简称NG1)的最优生长条件和在模拟胃肠道环境下的抗逆性情况,采用单因素试验和响应面分析法优化NG1的生长条件,同时对该重组菌的体外抗H_(2)O_(2)、抗胆汁酸盐和抗酸胁迫能力进行研究。结果表明,NG1的最优生长条件为培养温度36℃、初始pH7.6、Na_(2)SeO_(3)浓度59μg/mL;NG1对各胁迫因素的最高耐受值分别为过氧化氢(H_(2)O_(2))1.5 mmol/L、胆汁酸盐0.20%、酸度pH6.0;耐受能力排序为优化培养NG1>常规培养NG1>常规培养NG0(NZ9000/pNZ8148),说明GPx基因的导入对乳酸菌的抗H_(2)O_(2)和胆汁酸盐胁迫功能有增强作用,且在最优培养时得到强化,但对酸度耐受性无明显增强作用。

乳过氧化物酶的分离纯化和酶学性质研究

采用超滤-离子交换色谱分步洗脱法,对牛初乳中的乳过氧化物酶进行了分离和纯化。经SDS-PAGE测定,分离出的乳过氧化物酶显示为单一区带,相对分子质量为75035D。该酶酶活回收率为76.17%,其最适pH为5.0～5.5,最适温度为55℃。在70℃、75℃时LP酶活的热失活曲线呈现一般植物过氧化物酶失活的双相特征。

激活乳过氧化物酶体系对牛乳的保鲜

用硫氰酸盐和过碳酸钠为激活剂,对牛乳中乳过氧化物酶体系(Lactoperoxidase system,LPS)进行激活,研究了在30℃条件下不同激活浓度对牛乳的pH、乳酸度、细菌总数和大肠菌群的影响.结果表明,牛乳的保鲜期与添加激活剂的浓度有关,添加中(硫氰酸钠/过碳酸钠=70∶150mg/L)、高(硫氰酸钠/过碳酸钠=140∶300 mg/L)浓度激活剂对牛乳的保鲜效果优于低(硫氰酸钠/过碳酸钠=14∶30 mg/L)浓度激活剂的处理组.添加低浓度激活剂可使牛奶新鲜度保持12 h,而中、高浓度激活剂可使牛奶新鲜度最少保持15 h.

三种乳过氧化物酶检测方法的比较

本文比较了ABTS检测法、TMB检测法、愈创木酚检测法的线性关系、检出限、精密度,以及对原料乳及其乳制品中的乳过氧化物酶（LP）测定。研究表明,ABTS检测法中LP浓度在2-5.0 mg/L范围内线性关系良好,R2=0.9935;检出限为0.210 mg/L;批内和批间变异系数分别小于4%和7%。TMB检测法中LP浓度在2-12 mg/L范围内线性关系良好,R2=0.9897;检出限为0.612 mg/L;批内和批间变异系数分别小于4%和5%。愈创木酚检测法中LP浓度在8-20.0 mg/L范围内线性关系良好,R2=0.9857;检出限为1.095 mg/L;批内和批间变异系数分别约为6%和7%。ABTS法与TMB法的线性关系、检出限、精密度均较愈创木酚法好。因此,以ABTS与TMB作为检测LP的显色底物,更为简便、快速、准确。

乳过氧化物酶体系及其在乳品保鲜中的应用

本文主要介绍了乳中的一种天然抗菌活性体系—乳过氧化物酶体系(LPS),该体系由乳过氧化物酶、硫氰酸盐(SCN_)和过氧化氢(H2O2)共同组成。该体系3组分的浓度分别不低于0．5 ppm,12 ppm和8．5 ppm时,可表现出显著的抗菌效果;在30℃、25℃、20℃、15℃和3-5℃条件下,乳的保鲜期可分别达到7天、11天、16天、24天和120天。本文还介绍了乳过氧化物酶体系在乳品保鲜中的实际应用,对其应用前景进行了展望。

山羊乳过氧化物酶体系及其激活方案的研究

分析了8头西农萨能奶山羊乳中乳过氧化物酶活性和硫氰根含量,并测定了在25℃下不同激活剂浓度对羊乳24h滴定酸度的影响。结果表明,生鲜羊奶中乳过氧化物酶活性为(1.88±1.17)U/mL,硫氰根含量为(1.57±0.35)mg/L。在25℃贮藏温度下激活乳过氧化物酶体系可以对羊乳起到保鲜效果,硫氰根添加13.5 mg/L,过氧化氢添加1.1倍硫氰根摩尔浓度时,可以较低的保鲜剂添加量,获得较好的保鲜效果,平均酸度为25.6°T。

瞬变高压对鲜乳中乳过氧化物酶活性的影响

本研究基于连续高压射流形成的脉冲加压方式,通过单因素和二次回归正交组合试验考察瞬变高压对鲜牛乳中乳过氧化物酶(LP)的影响。结果表明:进料温度35℃、处理4min条件下,40～80MPa的瞬变高压能够显著激活LP酶;相同进料温度下,60MPa处理2～8min,LP酶活性随处理时间的延续显著降低(P<0.05);20MPa瞬变压力下,进料温度为45℃时LP酶活性达到最高;影响LP酶活性的主次顺序为:进料温度>处理压力>处理时间,而且该三个因素对LP酶活性的影响存在交互作用,并可用二次多项式模型Y=62.70-9.43A2-7.96B2+3.44C2加以描述。

莎能羊乳中乳过氧化物酶特性的研究

以西农莎能羊乳为原料,对羊乳中乳过氧化物酶的最适温度、热稳定性、最适pH、pH稳定性和光稳定性进行系统的研究。结果表明,乳过氧化物酶的最适温度为45～55℃,在较低温度20～50℃热稳定性较好;乳过氧化物酶的最适pH为5.5～6.0,在pH3.0～8.0比较稳定;光对乳过氧化物酶活性的影响较大,光照处理3h后的乳过氧化物酶活性比避光处理降低了24.00%。这些研究结果将为乳过氧化物酶体系对羊奶的保鲜提供依据。

乳过氧化物酶体系对生牛乳的保鲜作用及其营养成分的影响

在试验组生牛乳中添加15 mg／L NaSCN和9μL／L H2O2激活其中固有的乳过氧化物酶体系 (LPS),研究LPS对生牛乳的保鲜作用和各种营养成分的影响。结果表明,在30 C温度条件下,激活的LPS不但可延长生牛乳的保鲜期约4．5 h,而且对乳蛋白、乳脂、非脂乳固体及各种氨基酸的营养成分均没有影响。由此可知在缺乏冷却条件时,利用LPS保鲜生牛乳是一种安全而有效的理想方法。

一种检测乳过氧化物酶方法的建立

【目的】建立一种简便、快速、精确的乳过氧化物酶(LP)检测方法。【方法】以ABTS为底物,利用动力学方法,建立了检测LP含量的ABTS法,并以优化后的体系检验ABTS法的精确度。【结果】以ABTS法检测LP含量的最佳反应条件为:吸收波长416nm,作用时间100s,pH5.5,ABTS浓度2mmol/L,H2O2浓度5mmol/L,工作温度25℃(室温)。经检验,该法的批内变异系数为2.39%,批间变异系数为3.42%,相关系数(R2)为0.9953,准确误差均未超过5.00%。【结论】以ABTS法检测LP精密度和准确度均较好,且操作步骤比较简便、快速,实现了对LP的简便、快速、精确检测。

反相微乳液中辣根过氧化物酶催化反应的研究

研究了辣根过氧化物酶（ＨｏｒｓｅｒａｄｉｓｈＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＨＲＰ）在ＡＯＴ／水／异辛烷微乳液中的多底物酶促反应行为．实验结果表明，反相胶束中动力学反应机制与纯水中不同，并且利用紫外可见光度法研究了中间化合物Ⅲ在２种不同介质中的稳定性．

乳过氧化物酶系统对血型链球菌和变形链球菌生长的影响

目的：探讨乳过氧化物酶系统在口腔微生态环境中对链球菌族生长和菌种平衡的影响。方法：将血型链球菌３４和变形链球菌Ｉｎｇｂｒｉｔ（ｃ）分为纯培养和混合培养等实验组，用连续培养方法，给予乳过氧化物酶（ＬＰＯ）、硫氰酸盐、Ｈ２Ｏ２，采用活菌计数法检测两菌的生长状态。结果：血型链球菌３４在参入乳过氧化物酶因素的培养液中，其生长量较为平稳，有较强的抵抗力，而变形链球菌的生长量显著下降；混合培养中两菌的生长量均有所提高。结论：两菌的共生可以提高它们对乳过氧化物酶系统的抵抗力；血形链球菌ＬＰＯ系统的高抵抗力与其在早期牙菌斑中占优势是相一致的。

抗髓过氧化物酶及乳铁蛋白抗体对自身免疫性肝炎检测的临床研究

目的:探讨抗髓过氧化物酶抗体(AMPA)及抗乳铁蛋白抗体(ALA)对自身免疫性肝炎(AIH)检测的临床意义及评估。方法:对63例AIH(53例AIH-Ⅰ和10例AIH-Ⅱ)、206例非AIH患者和50例健康体检者均采用ELISA法检测AM-PA和ALA;间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA),观察临床评价指标,并对结果进行回顾性分析。结果:63例AIH和206例非AIH检测AMPA阳性率分别是61.9%(39/63)和3.40%(7/206),经χ2检验,P<0.01;AIH组中AIH-Ⅰ组阳性率73.6%(39/53)。63例AIH患者检测ALA阳性12例(19.0%),AIH-Ⅰ中阳性11例(20.8%)。AIH自身抗体临床评价指标显示ALA敏感性最低为19.05%,但其特异性最高为99.6%,AM-PA特异性为97.27%。结论:AMPA、ALA与AIH的发生发展存在相关性,两者联合其他自身抗体检测对AIH的诊断及其亚型的鉴别有重要意义。

利用乳过氧化物酶体系保存奶牛初乳的效果

为探索利用乳过氧化物酶体系保存奶牛初乳的效果,在试验组初乳中分别加入15 mg/L NaSCN和9μL/LH2O2混匀,以激活其中固有的乳过氧化物酶体系。结果,在(25±2)℃的自然生产条件下,激活乳过氧化物酶体系可显著抑制初乳酸度的升高(P<0.01)和细菌总数的增加,延长初乳的保存时间约9 d,并且对乳蛋白、乳脂、非脂乳固体的含量均没有影响(P>0.05),感官评定的总体可接受性较强,具有推广应用价值。

山羊乳过氧化物酶体系及其延长保鲜期的研究

分析了关中奶山羊羊奶中乳过氧化物酶活性和硫氰根质量浓度,对室温下应用化学法激活乳过氧化物酶体系保鲜羊奶进行研究。结果表明,羊奶中乳过氧化物酶活性为(1.88±1.17)U/mL,硫氰根质量浓度为(1.57±0.35)mg/L,均低于牛奶中的质量浓度。在25℃贮藏温度下,添加20 mg/L硫氰化钠添加20 mg/L比添加18.5 mg/L有明显优势。在添加20 mg/L硫氰化钠20 mg/L的基础上添加过碳酸钠比过氧化氢有更好的效果,差异显著(P<0.05)。在添加20 mg/L硫氰化钠20 mg/L的基础上添加58.2 mg/L过碳酸钠58.2 mg/L可以获得最佳保鲜效果,与空白对照相比差异显著(P<0.05),延长保鲜时间约6 h。

保鲜剂对莎能羊乳中乳过氧化物酶体系的影响

依据乳过氧化物酶体系(LPS)的抗菌机理,在鲜羊奶中分别添加保鲜剂(15 mg/L NaSCN和8.5 mg/L H2O2),研究了保鲜剂对羊乳中LPS的影响。结果表明,单独添加NaSCN或H2O2时,羊乳中LP活性、H2O2浓度、SCN-浓度以及OS-CN-浓度有一定的变化,尤其是OSCN-浓度随时间延长而逐渐上升。当添加混合保鲜剂后,OSCN-浓度随时间延长有较大提高。表明混合保鲜剂对羊乳有较好的保鲜作用。

牛乳中乳过氧化物酶体系及其利用

叙述了乳过氧化物酶体系（ＬＰ－体系）作为牛乳一种主要抗菌体系，并介绍了它的有效利用。

牛乳中乳过氧化物酶的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳过氧化物酶进行了分离和纯化,利用SDS-PAGE定性检测。结果表明,分离出的乳过氧化物酶显示为单一区带,相对分子质量为76186u。该酶酶活回收率为83.07%,纯化倍数达到44.63倍。

利用乳过氧化物酶体系保鲜生牛乳的试验研究

研究了在不同的保存温度条件下利用乳过氧化物酶体系保鲜生牛乳的效果。结果表明:在保存温度分别为15、20、25、30和35℃时,试验组牛乳的保鲜期分别为44、28.5、18、12和9h,比对照组分别延长了37.5%、42.5%、50%、60%和80%;另一方面,乳过氧化物酶体系均可提高保鲜牛乳1～2个卫生等级,并且对其营养成分没有影响。