人乳铁蛋白转基因山羊奶与非转基因羊奶中3种水溶性维生素含量的检测分析

目的测定人乳铁蛋白转基因羊奶及非转基因羊奶中VB1、VB2及尼克酰胺的含量,考察其在2种羊奶中是否存在显著差异。方法 HPLC法测定泌乳30 d、60 d及90 d采集的2种羊奶中各90个样品的上述3种维生素含量,并进行统计学分析。结果泌乳30 d、60 d及90 d采集转基因羊奶,VB1含量分别为0.151μg/ml、0.102μg/ml、0.068μg/ml,VB2含量分别为1.622μg/ml、0.784μg/ml、1.228μg/ml,尼克酰胺含量分别为23.28μg/ml、8.032μg/ml、5.346μg/ml。结论 60 d及90 d,转基因羊奶与非转基因羊奶的VB1含量存在显著差异,30 d及60 d,2种羊奶的VB2含量存在显著差异。在3个时间段采集的样品中,2种羊奶的尼克酰胺含量均差异具有统计学意义(P≤0.05)。

人乳铁蛋白转基因和非转基因山羊奶中蛋白质含量与必需氨基酸总量的检测与分析

目的测定人乳铁蛋白转基因山羊奶及非转基因山羊奶中蛋白质含量和7种必需氨基酸总量,考察两种羊奶的上述两种成分是否存在显著差异,为人乳铁蛋白转基因山羊奶的实质等同性评价提供依据。方法采用凯氏定氮法测定两种山羊泌乳30、60、90d采集的羊奶中各90个样本的蛋白质含量;采用OPA-FMOC柱前衍生高效液相色谱法测定山羊奶中的7种必需氨基酸总量,用SPSS软件对测定结果进行统计学处理。结果泌乳30、60、90d采集的样本中,转基因山羊奶的平均蛋白质含量分别为43.41、35.98、35.64g/L,7种必需氨基酸的平均总量分别为17.73、14.91、14.78g/L;非转基因山羊奶的平均蛋白质含量分别为52.22、49.06、41.26g/L,7种必需氨基酸的平均总量分别为21.38、21.39、18.09g/L。结论在3个时间段采集的样本中,转基因与非转基因山羊奶中的蛋白质含量均存在显著性差异(P≤0.05)。除30d天采集的样本外,60d及90d采集的样本中,两种羊奶的7种必需氨基酸总量均存在显著性差异(P≤0.05)。

转基因山羊羊乳中重组人乳铁蛋白性质的检定与研究

目的:检定与研究转基因山羊 CLF123-1羊乳中重组人乳铁蛋白(rhLF)及其分子特性。方法:利用 SDS～PAGE,West～ern-blotting 及 Edman 降解法测定分析转基因山羊羊乳中 rhLF 的相对分子质量、免疫学特性和 N-末端15个氨基酸残基;利用紫外分光光度法比较 rhLF、天然人乳铁蛋白(hLF)与 Fe^(3+)离子结合的动力学过程,测定 Fe^(3+)与 LF 发生结合反应达到平衡状态后在279 nm 和465 nm 的吸收度值,Fe^(3+)与 LF 的物质的量比值分别为:0:1,0.5:1,1:1,2:1,4:1。结果:rhLF 的相对分子质量为(8.06±0.15)万(2次实验,6条电泳谱带计算结果);Western-blotting 结果显示 rhLF 可特异地与兔抗人 LF 抗体发生特异性结合;rhLF 的 N-末端1～15个氨基酸残基的序列为 G R R R R S V Q W X T V S Q P;rhLF 和 hLF 与 Fe^(3+)结合特性与趋势几乎完全一致。结论:本文所研究的转基因山羊羊乳中的乳铁蛋白是与人乳铁蛋白分子特性一致的 rhLF。

人乳铁蛋白在转基因马铃薯块茎中的表达

人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)是人体非特异性免疫系统的重要成员之一,具有抗细菌、真菌和抗病毒活性及其他多种功能。报道将hLF基因的cDNA与马铃薯(Solanum tuberosum L.)块茎专一性表达patatin基因启动子融合后通过农杆菌介导导入马铃薯,PCR检测证实获得了多个转基因株系,RT-PCR阳性结果说明hLF mRNA在马铃薯植株中得到了表达。同时,经过ELISA及Western blot检测证实,转基因马铃薯表达了hLF并具有人乳铁蛋白的活性。

利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白研究

[目的]研究利用转基因牛生产重组人乳铁蛋白,为利用转基因动物生产药用或食用蛋白提供依据。[方法]对已获得的人乳铁蛋白转基因牛进行人工催乳,用乳成分分析仪分析了转基因对乳汁的影响,并利用放免法检测了重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中的表达。[结果]重组人乳铁蛋白在牛乳中获得了高效表达,表达水平为(3.429±0.417)mg/ml。通过转基因牛乳的乳成分分析发现,转基因牛乳与常乳在乳脂、总蛋白、乳糖和干物质的含量上没有明显变化。[结论]重组人乳铁蛋白在转基因牛乳中获得了高效表达,为大规模生产重组人乳铁蛋白奠定了基础。

转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的研究

利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因的重组质粒,并导入到山羊乳腺上皮细胞,经G418及PCR筛选获得阳性细胞;转染细胞增殖后经激素诱导,培养液上清通过Western blot检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,其分子质量为58 ku。

酪蛋白和巨细胞病毒复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中的表达

为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平，构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体，以比较其乳腺特异性表达效果。应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒（CMV）基因表达调控元件构建了乳腺特异性表达复合启动／增强子（Pcmv），以单一的酪蛋白启动子作为对照，与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体，并制备了转基因小鼠。经ELISA检测，复合启动／增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白（rhLF）表达水平（2．0～8．1g·L^-1）明显高于单一酪蛋白启动子构件（0—12mg·L^-1），而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF。结果提示：酪蛋白-Pcmv复合启动／增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平，而且具有良好的乳腺表达特异性。

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究

[目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、激活、体外培养后，2-8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内，囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近（输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%）；在GFF，输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近（分别为26.47%及25.00%），输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组（40.00%及26.67%，21.43%）。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大，但对于输卵管移植，受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外，该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。

转基因动物产品—人乳铁蛋白与测定方法

乳铁蛋白是一种分子量为７６．３８６ ｋＤａ的结合性糖蛋 白 ，在其多肽链上有两条碳水化合物侧链。乳铁蛋白存在于人乳及牛乳中，乳腺为主要分泌器 官。乳铁蛋白具有多种重要的生理 功能。在多种免疫细胞表面存在乳铁蛋白受体。编码人乳铁蛋白的基因全长２．３５８ ｋｂ，由 其 翻译的最初乳铁蛋白为７１１个氨基酸残基，成熟乳铁蛋白为６９２个氨基酸残基。人乳铁蛋白的 转基因研究已获成功，获得表达，并初步应用于临床治疗。乳铁蛋白的检测方法包括酶联免 疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），放射免疫（ＲＩＡ）、免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ）及免疫组化方法。还可应 用ＰＣＲ和核酸探针技术对人乳铁蛋白转基因肉品进行检测。

我国首只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊诞生

2011年4月9日，我国第一只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊“欣欣”在山东曹县五里墩顺利诞生，其转基因克隆鉴定工作随后将在南京农业大学实验室进行，这标志着我国生物新品种培育又获得重大突破。

科学家培育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊

据最新一期俄罗斯《科学信息》杂志报道，由俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的两只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，小山羊成年后所产的奶中将含有人乳的乳铁蛋白。人乳中的乳铁蛋白能在婴儿形成自身免疫系统前保护其免受细菌和病毒侵扰。这种蛋白质在生物制药领域有着广阔的应用前景。

俄罗斯、白俄罗斯科学家培育成可产含有人乳铁蛋白乳汁的转基因山羊

据东方网2007年12月6日援引最新一期俄罗斯《科学信息》杂志报道，由俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的两只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，小山羊基因组中转入了人的乳铁蛋白基因，日后所产的奶中将有人乳的乳铁蛋白。人乳中的乳铁蛋白能在婴儿形成自己的免疫系统前保护其免疫细菌和病毒侵扰，这种蛋白质在生物制药领域应用前景十分广阔。

科学家育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊

新俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的2只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，小山羊成年后所产的奶中将含有人乳的乳铁蛋白。人乳中的乳铁蛋白能在婴儿形成自身免疫系统前保护其免受细菌和病毒侵扰。这种蛋白质在生物制药领域有着广阔的应用前景。

俄白科学家培育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊

据俄罗斯《科学信息》杂志报道，由俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的两只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，

白科学家培育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊

据俄罗斯《科学信息》杂志报道，由俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的两只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，小山羊成年后所产的奶中将含有人乳的乳铁蛋白。

山东：我国首只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊诞生

4月9日凌晨1点,我国首批克隆牛诞生地——山东省曹县五里墩又传来喜讯,第一只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊＂欣欣＂在这里诞生,这标志着我国生物新品种培育又获得重大突破。

我国首只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊诞生

近日．第一只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊“欣欣”在我国首批克隆牛诞生地——山东省曹县五里墩诞生．这标志着我国生物新品种培育又获得重大突破．

我国首只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊诞生

2011年．4月9日凌晨1点．我国首批克隆牛诞生地－山东省曹县五里墩传来喜讯．第一只人乳铁蛋白转基因克隆奶山羊“欣欣”在这里顺利诞生，其初生体重为2．75kg，发育情况良好。这标志着我国生物新品种培育又获得重大突破。

俄-白俄培育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊

据俄罗斯《科学信息》杂志报道，由俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的2只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，小山羊成年后所产的奶中将含有人乳的乳铁蛋白。人乳中的乳铁蛋白能在婴儿形成自身免疫系统前保护其免受细菌和病毒侵扰，这种蛋白质在生物制药领域有着广阔的应用前景。