不同感染方式对狂犬病病毒在人二倍体细胞中增殖的影响

目的考察带毒传代感染、直接吸附感染、混种传代感染三种方式感染人二倍体细胞对狂犬病病毒增殖的影响。方法不同方式感染后,经过细胞工厂生产,获取狂犬病病毒收获液,经过滤澄清、浓缩、纯化、灭活制备疫苗原液。根据《中华人民共和国药典》(2020版)检测方法检测收获液病毒滴度及原液抗原含量。结果带毒传代组的收获液病毒滴度为(6.40±0.33)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.8±1.5)IU·mL^(-1);混种传代感染组的收获液病毒滴度为(6.35±0.18)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(34.3±2.1)IU·mL^(-1);直接吸附感染组收获液病毒滴度为(4.71±0.39)lgLD50·mL^(-1),原液抗原含量为(12.6±2.0)IU·mL^(-1)。结论试验证明狂犬病病毒PV株采用混种传代感染的方式感染人二倍体细胞MRC-5细胞,病毒增殖效果良好,毒种代次明确,工艺操作简单,更适合于狂犬疫苗的生产。

人二倍体细胞狂犬病疫苗不良反应发生率Meta分析

目的对狂犬病暴露后全程接种人二借体细胞狂犬病疫苗(human diploid cell rabies vaccine,HDCV)人群的不良反应发生率进行Meta分析,为狂犬病疫苗接种策略提供理论依据:方法通过检索中国知网、中国生物医学文献服务系统、维普期刊资源平台、万方数据知识服务平台、PubMed数据库,Google学术数据库.SeienceDireil数据库和Cochrane Library数据库中已发表的与HDCV接种不良反应相关的研究文献,检索时限为1970年01月-2018年07月;根据纳入与排除标准进行数据整理.并利用R软件对不良反应发生率进行Meta数据分析结果合计纳入19篇中英文文献,且所纳入的文献无明显的发表偏倚"纳入文献中接种HDCV的总调查人数为7239人,全身不良反应的合并发生率为16.63%,局部不良反应的合并发生率为34.07%;国外HDCV接种后全身不良反应发生率为20.76%,局部不良反应发生率为42.97%;国产HDCV接种后全身不良反应发生率为2.47%,局部不良反应发生率为4.22%;两组数据差异有统计学意义(P<0.01)。国外HDCV接种不良反应合并发生率为13.44%~29.19%,国产HL)CV接种不良反应合并发生率为0.23%~6.98%,两组数据差异有统计学意义(P<0.01)结论国产HDCV不良反应发生率低,具有良好的安全性。

人二倍体细胞狂犬病疫苗研究进展

狂犬病是一种人兽共患的病毒性传染病,在全球分布广泛,给人类健康带来巨大威胁。狂犬病是一种疫苗可预防疾病,其中人二倍体细胞狂犬病疫苗(human diploid cell vaccine,HDCV)是目前国际公认的安全性与免疫原性最好的狂犬病疫苗。随着科技的进步,疫苗的生产工艺在不断的发展创新,国产HDCV通过生物反应器微载体培养工艺培养人二倍体细胞,采用层析纯化工艺对疫苗进行纯化,提高了疫苗的质量指标,为人类抵抗狂犬病提供更安全、有效的防控手段。本文从HDCV的培养工艺、纯化工艺、临床安全性和免疫原性等方面,对HDCV进行分析评述。

500L生物反应器生产人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺的研究

目的通过500 L生物反应器培养人二倍体细胞,接种感染PM株狂犬病毒,监测人二倍体细胞生长情况和病毒表达情况,确定一套可行的疫苗生产放大工艺。方法采用一定细胞传代接种比例培养人二倍体细胞、同时按照一定的病毒接种比例感染细胞,监测细胞病毒培养过程中的细胞密度及病毒表达情况,从而确定生产工艺的可行性。结果经过50 L和500 L生物反应器培养MRC-5细胞,接种感染狂犬病毒PM株毒种后,细胞生长良好,细胞密度、病毒滴度表达水平及表达持续时间均能达到疫苗生产要求。结论用500 L生物反应器培养MRC-5细胞,生产人二倍体细胞狂犬病疫苗,该生产放大工艺是可行的。

悬浮吸附法在人胚肺二倍体细胞(KMB17)中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒

目的研究在KMB17细胞中培养脊髓灰质炎减毒活疫苗病毒及其用于生产疫苗的可行性。方法应用悬浮吸附和添加血清的方法,在KMB17细胞上培养SabinⅠ、Ⅱ、中Ⅲ2型病毒,用微量法检测病毒滴度。结果在悬浮吸附加10%血清培养条件下,SabinⅠ滴度可达8.125 LgCCID50,SabinⅡ滴度可达7.5 LgCCID50,中Ⅲ2滴度可达7.583 LgCCID50。与传统的猴肾原代细胞培养的病毒滴度比较,差异无显著意义(P>0.05)。结论可进一步研究应用KMB17细胞进行疫苗生产。

53例人二倍体细胞狂犬病疫苗临床应用分析与评价

目的探讨人二倍体细胞狂犬病疫苗(HDCV)对狂犬病暴露者的应用价值。方法将选择接种HDCV方案的53例狂犬病暴露患者设为应用组,将选择接种冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)58例狂犬病暴露患者设为对照组。对两组患者每季度电话随访1次,比较其疫苗接种安全性、接种依从性、副反应发生情况。结果两组患者狂犬病疫苗保护情况和异常副反应情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。应用组全程接种5针次52例,接种依从性率为98.11%;对照组全程接种5针次49例,接种依从性率为84.48%;应用组的接种依从率明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。应用组一般副反应发生率为7.55%,低于对照组的20.69%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HDCV具有高安全性,高保护率,患者的接种依从性高,疫苗副反应发生率低,值得在狂犬病暴露患者中推广应用。

应用人二倍体细胞2BS株生产脊髓灰质炎活疫苗研究

脊髓灰质炎是我国广泛流行的疾病,1964年是发病最多的一年,发病率达6.21/10万,患者有5～6万人,绝大部分留有瘫痪后遗症。我国经普服脊髓灰质炎活疫苗以后,到1988年发病率降至0.05/10万,人数在500多人。60年代初,已查明制备疫苗的恒河猴肾细胞,带有90多种病毒,尤其是SV-40病毒,检出率高达70～90％,有实验证明SV-40有致癌性,虽然至今感染SV-40的儿童,未发现有致癌证据,但必竟是严重和亟待解决的问题。国外60年代已禁止用恒河猴肾细胞生产疫苗,改用非洲绿猴,国内无法解决。

学龄前儿童接种人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析

目的探讨学龄前儿童接种人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性,并对其进行对比分析。方法回顾性分析2019年10月至2020年10月在中山市博爱医院急诊科接种狂犬疫苗的学龄前患儿203例,将接种Vero细胞纯化狂犬疫苗者列为对照组,接种人二倍体细胞狂犬疫苗者列为观察组。3级暴露者建议联用人狂犬病免疫球蛋白。对照组共收集病例118例,观察组共收集病例85例。比较两组患儿的不良反应发生情况以及联用免疫球蛋白的不良反应发生情况。结果对照组总不良反应发生率为22.03%,观察组总不良反应发生率为2.35%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组患儿不良反应主要表现是全身发热,其次为注射部位红肿、疼痛,而观察组不良反应则明显较少,差异有统计学意义(P<0.05)。联用人狂犬病免疫球蛋白者不良反应发生率为4.44%,未联用者不良反应发生率为4.43%,两组之间不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论在学龄前儿童人群中,接种人二倍体细胞狂犬疫苗的安全性显著高于接种Vero细胞纯化狂犬疫苗,具有较高的临床推广价值。

狂犬病病毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株的适应传代

目的：建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞，连续传代，检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Walvax-2细胞，通过连续带毒传代至第7代，病毒滴度可达6．78lgLD50/mL，并在第10～15代内滴度维持在7．0lgLD50/mL以上，15～30代滴度稳定在7．0lgLD50/mL左右。以15代适应毒株CTN-1V-HDCP15制备的疫苗原液，各项指标均符合《中华人民共和国药典》三部（2010版）的要求，疫苗效力在6．0IU/剂以上。结论所获人胚肺二倍体细胞Walvax-2株传代适应狂犬病毒固定毒株CTN-1V-HDC可用于人用狂犬病疫苗的生产开发。

口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)的稳定性研究

目的评价细胞工厂工艺连续生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）的稳定性。方法疫苗在-20℃放置24个月,检测病毒滴度、外观、抗生素残留量、无菌性,及对病毒血清型进行鉴别;2~8℃放置12个月检测疫苗稳定性;室温放置7周、37℃放置7 d检测加速热稳定性并冻融的稳定性。结果该疫苗-20℃可贮存24个月以上,2~8℃有效期可延长至12个月,且冻融不会影响疫苗的稳定性。结论疫苗质量稳定,各项检测结果均符合《中华人民共和国药典》三部（2010版）及企业《口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）注册标准》。

MRC-5人二倍体细胞培养OKa株水痘病毒的研究

取自美国菌种保藏中心(ATCC)的MRC-5人二倍体细胞建立工作细胞库。按生物制品《人二倍体细胞建株、检定及制备疫苗规程》要求进行全面检定,证实其不携带外源因子,无致肿瘤源性,染色体正常,在该细胞上连续传代及培养的OKa株水痘病毒,其繁殖特性甚佳,细胞病变规律,病毒滴度稳定,是用于制备疫苗的良好细胞基质。

人二倍体甲型肝炎灭活疫苗纯化技术的研究

研究人二倍体细胞甲型肝炎灭活疫苗的纯化方法。经人二倍体细胞培养的病毒液经澄清、浓缩后制成粗制疫苗,采用Sephacryl S400、DEAE-Sepharose FF、Sephadex G-10等柱层析手段进行纯化。试验证明甲型肝炎病毒粗制疫苗经以上3种层析柱纯化后,抗原组分单一,收率达到85%,杂蛋白去除率达85%以上,蛋白总含量、牛血清残留量各项指标符合中国药典要求,适用于大规模生产。

人二倍体细胞乙型脑炎灭活疫苗毒种的质量评价

目的:对人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种进行质量评价。方法:通过鉴别试验对毒种进行鉴别,以鉴别是否为乙脑病毒;通过脑内滴定法对毒种进行病毒滴度检测,以评估其在人二倍体细胞(ZFB-3)上的适应性和增殖能力;对毒种进行无菌检查、支原体检查、外源病毒因子检查,以检测是否有外源性污染。结果:证明毒种为乙脑病毒,且具有较高的病毒滴度,在人二倍体细胞(ZFB-3)上已较好地适应,且无细菌、真菌、支原体、外源病毒因子污染。结论:人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种质量符合要求,可应用于疫苗的生产。

狂犬病毒CTN-1株在Vero细胞上的适应传代研究

本文报导了用我国狂犬病毒固定毒人二倍体细胞适应株（ＣＴＮ－１）进行Ｖｅｒｏ细胞适应传代研究。通过连续传代培养，滴度可达８．０ｌｏｇＬＤ_（５０）ｍｌ，达到了ＷＨＯ规定的不需浓缩的标准。病毒用０．０１ＭＯＩ感染细胞其产量与１Ｍｏｌ感染量相仿。病毒增殖高峰在４－５天，维持达１５天无明显下降，且可连续收获４－５次。因此，该毒种符合ＷＨＯ提出的疫苗生产毒种要求，可用于狂犬病疫苗生产。

不同细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗质量比较

目的 比较人二倍体细胞 2BS株与鸡胚细胞制备的麻疹减毒活疫苗质量。方法 观察两种细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗的病毒滴度、稳定性、抗体阳转率及GMT。结果 两种细胞基质制备的麻疹减毒活疫苗的病毒滴度分别为 4 75、4 6 4和 4 83LgCCID50 ml,热稳定性良好 ,低温保存 2 0年的滴度无明显下降 ;人体免疫接种后均未出现局部与全身反应 ,抗体阳转率均为 10 0 % ,GMT分别为 36 14、2 8 38和 78 76。

人二倍体细胞在人用狂犬病疫苗中应用的研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的以中枢神经系统症状为主的一种动物源性传染病,病死率几乎100%。疫苗是预防狂犬病最主要的手段。目前,人用狂犬病疫苗生产使用的细胞基质包括鼠脑、猴肾细胞、原代地鼠肾细胞和人二倍体细胞(human diploid cell,HDC),其中HDC已成为WHO认可的更安全的疫苗生产用细胞,该细胞无致癌性、无外源因子污染、且细胞性状比较稳定,已广泛应用于人用疫苗的研发与生产。本文就HDC在人用狂犬病疫苗中应用的研究进展作一综述。

国产冻干人二倍体细胞狂犬病疫苗预防接种不良事件发生率和影响因素

目的 分析一种国产冻干人二倍体细胞狂犬病疫苗(Human diploid cell based rabies vaccine, RabV-hdc)预防接种不良事件发生率及其影响因素。方法 选择2018年6月至2020年9月在陕西省13个区县狂犬病暴露预防处置门诊接种RabV-hdc的受试者,观察每剂次接种后0-3d发生的不良事件,分析不良事件发生率和影响因素。结果 共入组31 623例受试者,累计接种148 851剂次RabV-hdc,发生不良事件352例次,总发生率为2.36‰。局部、全身不良事件发生率分别为1.38‰、1.06‰;1级、2级、3级、4级不良事件发生率分别为0.95‰、1.13‰、0.28‰、0.00‰。多因素Logistic回归分析显示,女性受试者不良事件发生率高于男性受试者,0-4岁、5-14岁受试者高于≥60岁受试者,免疫机能低下或过敏体质受试者高于其他受试者,Ⅲ级暴露受试者高于Ⅰ/Ⅱ级暴露受试者[OR(95%CI):1.51(1.19-1.92)、6.49(2.85-14.79)、2.69(1.17-6.20)、6.09(2.64-14.04)和1.81(1.30-2.51)]。结论 本研究RabV-hdc接种后不良事件发生率在预期范围内,以女性、0-14岁人群、免疫机能低下或过敏体质人群和暴露等级Ⅲ级者发生风险高;建议加强RabV-hdc接种后护理。

不同生产工艺的人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)受试者血清总IgE分析

目的探讨不同生产工艺对人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)可能存在的致敏反应的影响。方法在4种不同生产工艺人用狂犬病疫苗免疫后的临床血清中随机选取360份血清样本,ELISA法检测不同生产工艺疫苗和不同采血时间点血清样本中的总IgE水平,采用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果总IgE检测结果显示,4种疫苗免疫后的血清总IgE阳性率均为20%(6/30),总IgE的均值最低为9 IU/ml,最高为210 IU/ml,重复测量的方差分析显示不同时间采血检测的总IgE水平差异无统计学意义(P=0.284),多步浓缩纯化的人二倍体细胞疫苗的总IgE水平明显低于Vero细胞疫苗(P=0.024)。结论免疫剂量的增加不会导致总IgE水平的升高,人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)的生产工艺能够对可能的致敏性杂质进行去除,具有良好的安全性。

人二倍体细胞狂犬病疫苗接种后安全性观察研究

目的观察各年龄段人群接种人二倍体细胞狂犬病疫苗后的不良反应发生情况,为临床选择安全有效的狂犬病疫苗提供依据。方法以2016-07/2016-12前往石家庄市疾病预防控制中心接受狂犬病暴露后预防或暴露前预防,并且使用了人二倍体细胞狂犬病疫苗的接种者为观察对象。狂犬病疫苗接种按照《狂犬病暴露预防处置工作规范(2009版)》操作,使用"Essen"程序接种,在第0 d、3 d、7 d、14 d、28 d各接种一剂人二倍体细胞狂犬病疫苗,接种后观察每针次接种后局部和全身反应。结果在1 040名观察对象中,总共有9例轻微不良反应,其中局部不良反应5例,为接种部位瘙痒、疼痛、局部皮疹,全身不良反应4例,为轻微发热,总不良反应发生率0.86%。反应程度均为轻微反应,在48 h之内自行恢复。不同组别的不良反应发生率中,与青壮年组0.59%的发生率相比,婴幼儿组1.48%(χ2=0.748,P>0.05),少儿组0.53%(χ~2=0.232,P>0.05),老人组1.43%(χ~2=0.640,P>0.05)虽存在一定差异但差异无统计学意义。结论在临床使用中,人二倍体细胞狂犬病疫苗不良反应率低,反应程度轻微,体现出这种疫苗良好的安全性,且婴幼儿、儿童、老人与青壮年各组安全性表现无明显差异,推荐全年龄段人群采用人二倍体细胞狂犬病疫苗进行狂犬病暴露前和暴露后的预防接种。

国产冻干人用狂犬病疫苗(人二倍体细胞)的安全性及免疫原性观察

目的观察人二倍体细胞（human diploid cell,HDC）培养制备的国产冻干人用狂犬病疫苗（HDCV）的安全性及其免疫原性。方法选取江苏省淮安市涟水县年龄在10~60岁的常住高危狂犬病感染的健康人,随机分为试验组和对照组,每组600人,按照＂Essen＂暴露后接种程序,分别于第0、3、7、14和28天经上臂三角肌肌内各注射1剂疫苗,试验组接种国产冻干人用狂犬病疫苗（HDCV）,对照组接种进口冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）。所有受试者在每次接种后留观30 min,观察即时反应,并在第6、24、48、72 h观察局部和全身反应情况。在首剂免疫前和免疫后7、14、42 d采集全血标本,分离血清,采用WHO推荐的快速免疫荧光灶抑制试验（rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT）检测血清中和抗体,计算抗体阳转率及几何平均滴度（GMT）。结果所有受试者接种疫苗后反应轻微,均未发生Ⅲ级及Ⅲ级以上不良反应,所有不良反应均在72 h内恢复。试验组和对照组局部反应总发生率分别为7.67%和6.83%,全身反应总发生率均为5.00%,两组间比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。试验组和对照组首剂免疫后7、14、42 d的抗体阳转率分别为28.77%、100%、100%和28.72%、98.96%、100%,两组间比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;血清中和抗体GMT分别为0.274 8、19.744 3、37.575 0 IU/ml和0.247 4、17.327 4、37.723 1 IU/ml,两组间比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论国产冻干人用狂犬病疫苗（HDCV）接种反应轻微,且具有良好的免疫原性。