人伴肌动蛋白相关锚定蛋白基因cDNA的克隆与功能分析

小鼠伴肌动蛋白相关锚定蛋白 (N RAP)是已知的与肌纤维生成有关的细胞骨架蛋白 ,但是 ,与此对应的人类N RAP基因的cDNA序列及其功能一直是未知的 .为了明确N RAP基因在人类中所起的作用 ,利用生物信息学分析工具和分子生物学技术 ,成功地克隆了人N RAP基因 .人N RAP基因cDNA序列含有一个 5 0 88bp的开放读码框 ,与小鼠N RAP基因有 86 %的相似性 .染色体定位分析表明 ,人N RAP基因定位于 10 q2 5～q2 6之间 ,编码区由 4 1个外显子组成 ,与HABP2和CASP7紧密连锁 .电子表达谱分析表明 ,肌肉、心脏、脑、脊髓和前列腺有人N RAP基因不同长度的cDNA序列 .人N RAP与小鼠N RAP蛋白质序列有 88%的相似性 ,与人Nebulin有约 6 3%的相似性 ,与小鼠Nebulin有约 5 9%的相似性 .结构域分析发现 ,N端为LIM结构域 ,从第170位氨基酸开始 ,连续出现 4 0个Nebulin相关重复序列 .RT PCR实验表明 ,人N RAP基因在成人脑、骨骼肌和心脏组织中都有表达 ,在骨髓中不表达 .亚细胞定位研究显示 ,人N RAP基因表达于胞浆 .基于序列相似性、结构域分析、表达谱分析和亚细胞定位研究 ,可以推测人N RAP与小鼠N RAP同属Nebulin家族 。

伴肌动蛋白相关锚定蛋白(N-RAP)在颈椎后纵韧带骨化中的表达及意义

目的：从蛋白质及核酸水平研究伴肌动蛋白相关锚定蛋白（N—RAP）在颈椎后纵韧带骨化中的表达．探讨其存在的临床意义。方法：选择2006～2010年间行手术治疗的20例颈椎后纵韧带骨化症患者（OPLL组）及10例因外伤行颈椎手术患者（对照组）的颈椎后纵韧带标本。所有标本福尔马林固定、石蜡包埋，以N—RAP兔抗人多克隆抗体作为I抗免疫组化SP法制片，DAB显色。选择染色满意的标本切片，观察表达N—RAP的细胞（棕黄染色）在两组样本中的数量及分布特点。5例骨化样本及5例对照样本冰浴匀浆、提取总RNA，行实时定量PCR检测。观测后纵韧带骨化症患者及对照病例后纵韧带组织中N—RAPmRNA的表达情况。结果：20例骨化韧带标本中，16例染色满意：10例对照组后纵韧带标本中，6例染色满意。免疫组化结果显示N—RAP表达于韧带组织中细胞的胞浆中，呈棕黄色染色。在OPLL组的后纵韧带组织中，可见多个黄染细胞及少量蓝色无N—RAP表达的细胞。而在对照组后纵韧带中，仅可见蓝色无N—RAP表达的细胞。实时定量PCR检测发现N—RAP在对照组标本中平均表达量为14．29±4．70，在OPLL组标本中为161．29±60．14，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：颈椎OPLL韧带组织中存在较高水平的N—RAP，其可能参与了韧带骨化的发生、发展过程。

伴肌动蛋白相关锚定蛋白特异性siRNA筛选及效能评价

目的设计、合成人伴肌动蛋白相关锚定蛋白(Nebulin related anchoring protein,NRAP)的特异性siRNA,转染人成纤维细胞筛选最佳干扰序列。方法设计并合成4条针对NRAP的siRNA,以不同浓度转染人成纤维细胞。通过Westernblot、RT-PCR法检测其对NRAPmRNA及蛋白表达的抑制效果。结果siRNA50mol/L及Lipofectamine2000 1 l有较高的转染效率。4种siRNA干扰成纤维细胞24小时后,NRAP的mRNA及蛋白表达量均有显著下降,其中siRNA47抑制效果最为显著。结论成功筛选出可有效抑制成纤维细胞NRAP表达的siRNA,为观察阻断NRAP表达后应力诱导OPLL细胞成骨的变化奠定了基础。

伴肌动蛋白相关锚定蛋白的功能及临床研究进展

伴肌动蛋白相关锚定蛋白(nebulin-related-anchoring protein,NRAP)是一种多结构域骨架蛋白,特异性表达在心肌闰盘和骨骼肌肌腱的连接处。在肌原纤维的组装过程中起到重要作用,并参与将肌原纤维的末端肌动蛋白丝锚定在细胞膜上,使张力从肌原纤维传递到细胞外基质。迄今为止有关NRAP临床研究报道多见于肌肉病变,但近年来有新的研究发现NRAP基因突变与扩张型心肌病有关。本文就NRAP的结构、生物学功能以及相关疾病的研究进展作一阐述。