抗反转录病毒疗法对结核病/人体免疫缺陷病毒双重感染患者生存预后的影响

目的分析抗反转录病毒治疗(ART)对结核病(TB)/人体免疫缺陷病毒(HIV)双重感染患者生存预后的影响。方法选取2020年1月至2022年4月抚州市第一人民医院感染科收治的72例TB/HIV双重感染患者作为研究对象,根据是否接受ART分为ART组(n=40)与对照组(n=32)。对照组给予常规抗结核对症治疗,ART组在对照组基础上2周内给予ART方案,比较两组治疗前后CD4+T淋巴细胞数、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、HIV载量及治疗后转阴率、治疗失败结局。结果治疗后1、3、6、12个月,ART组CD4+T淋巴细胞数均多于前一个时间点,对照组CD4+T淋巴细胞数均少于前一时间点,且ART组均多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,ART组IL-10、TNF-α水平均低于治疗前,对照组IL-10水平高于治疗前,且ART组IL-10、TNF-α水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,ART组HIV载量少于治疗前,对照组多于治疗前,且ART组少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1、3、6、12个月,ART组转阴率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ART组治疗失败率为17.50%,低于对照组的100.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ART对TB/HIV双重感染患者的治疗具有积极意义,可增加CD4+T淋巴细胞数,减少HIV载量,提高转阴率,改善患者生存预后。

整合酶抑制剂治疗人免疫缺陷病毒1型的临床疗效及对患者病毒载量和CD4^(+)T细胞的影响

目的探讨整合酶抑制剂治疗人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)患者的临床疗效及对患者病毒载量和CD4^(+)T细胞的影响。方法选取2020年8月至2022年2月九江市第三人民医院收治的88例HIV-1患者作为研究对象,按照随机抽签方式分为观察组与对照组,每组44例。对照组采用常规HIV-1治疗方案,观察组采用整合酶抑制剂治疗。比较两组临床疗效、CD4^(+)T细胞计数、病毒载量水平及治疗安全性。结果观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后1个月、3个月、6个月、1年、1.5年,观察组CD4^(+)T细胞计数水平均高于对照组,病毒载量水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良事件发生率比较差异无统计学意义。结论整合酶抑制剂治疗HIV-1患者的临床疗效显著,能更大程度地降低病毒载量和提升CD4^(+)T细胞水平,且安全性较高,值得推广应用。

针对人类免疫缺陷病毒结构蛋白Gag-Pol的抑制剂及其作用机制研究进展

Gag-Pol蛋白是人类免疫缺陷病毒(HIV)重要结构蛋白之一,其组成成分包含了HIV的基本骨架蛋白和生命周期中所需要的功能酶,目前以Gag-Pol上不同的功能区为靶点开发的抑制剂包括衣壳(CA)抑制剂、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和整合酶抑制剂等。CA抑制剂通过抑制CA的成熟或者破坏CA的组装进而影响HIV复制。蛋白酶抑制剂主要的作用机制是抑制蛋白酶对切割位点CA-间隔多肽1(SP1)的切割,逆转录酶抑制剂通过模仿逆转录底物,阻断HIV的逆转录过程,整合酶抑制剂通过靶向整合酶活性中心—锌指结构影响整合酶活性。本文总结了针对HIV Gag-Pol蛋白的抑制剂及其作用机制,并对已批准上市成药的用法用量进行综述,为今后临床联合用药和针对HIV Gag-pol蛋白的新型抑制剂开发提供参考。

鲤疱疹病毒二型(CyHV-Ⅱ)疫苗研究进展

鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,CyHV-Ⅱ)对任何发育时期的金鱼、鲫鱼及其杂交品种均具有感染能力,能够引起金鱼疱疹病(goldfish haematopoietic necrosis, GFHN),是一种传染性强且死亡率极高的疫病,给我国金鱼和鲫鱼养殖业造成巨大经济损失,鱼用疫苗的研发是预防和治疗该疫病最有效的办法。综述了CyHV-Ⅱ灭活疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗和纳米递送疫苗的研究进展,并对鱼用疫苗纳米材料的应用前景进行了探讨,以期为金鱼疱疹病害防治和鱼用疫苗研究提供新技术方法和新思路策略。

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72单克隆抗体的制备及应用

鲤疱疹病毒Ⅱ型是引起鲫造血器官坏死病的重要病原。为建立基于抗原水平的免疫检测方法,通过原核表达方法制备鲤疱疹病毒Ⅱ型核衣壳蛋白ORF72,将纯化的ORF72蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术筛选获得单克隆抗体1B3、4B1、4C2、5F4和5H9。免疫印迹分析显示,上述5株单抗均可特异性识别重组蛋白ORF72;免疫荧光分析显示,仅单抗4C2可与感染鲤疱疹病毒Ⅱ型的鲫脾脏发生阳性反应。利用单抗4C2通过间接免疫荧光技术对鲤疱疹病毒Ⅱ型感染鎏金金鱼鳍条细胞系(RyuF-2)后ORF72蛋白表达情况进行检测,结果显示,感染后36 h可检测到阳性信号,并且随着感染时间的延长,细胞中ORF72的表达量明显增加。本试验制备的单克隆抗体4C2为体外进一步探究鲤疱疹病毒Ⅱ型在细胞内的复制机制及建立病鱼免疫检测手段奠定了基础。

人类免疫缺陷病毒感染者合并2型糖尿病的诊疗研究进展

人类免疫缺陷病毒(HIV)感染导致人体免疫功能降低,严重威胁人类健康。但随着抗反转录病毒治疗(ART)的问世,将HIV感染从一种致命性疾病转变为一种可控的慢性疾病,显著延长HIV感染者(people living with HIV,PLWH)的生命,但该群体慢性合并症(糖尿病、肾病、骨质疏松、心脑血管疾病)的问题也日益凸显。我国的糖尿病以2型糖尿病(T2DM)为主,1型糖尿病和其他类型糖尿病少见,本文中涉及的PLWH合并糖尿病的相关研究指的是T2DM。

人Ⅱ型免疫缺陷病毒gag基因在大肠杆菌中的表达

目的：表达ＨＩＶ２型基因工程ｇａｇ抗原。方法：将编码ＨＩＶ２型ｇａｇ的部分和全部ｐ５５ｇａｇ１／２基因，克隆到载体ｐＥＴ１７ｂ后，分别在Ｅ．ＣｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。结果：表达产物为５１和６１ｋＤ融合蛋白，并可与ＨＩＶ２病人血清发生特异性反应。表达量分别为菌体总蛋白的１２．２％和６．２％。结论：上述两种ｇａｇ重组蛋白可在Ｅ．Ｃｏｌｉ中得到表达，且有良好的抗原性。

人免疫缺陷病毒Ⅱ型(HIV-2)gag蛋白基因在毕赤酵母中的克隆表达

目的:实现HIV-2ROD gag重组蛋白的分泌表达,为研究HIV-2ROD gag蛋白结构与功能及亚单位蛋白疫苗研究打下基础。方法:将HIV-2ROD gag蛋白基因片段,与分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9重组,构建了相应的重组表达质粒pPIC9-gag,转化GS115酵母菌,经MD/MM表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆,以甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE分析及Western blot证实。结果:获得了HIV-2ROD gag重组蛋白在巴斯德毕赤酵母系统中的分泌表达,表达产物可被HIV-2抗血清识别,分子量约为57kD。结论:pPIC9-gag重组质粒在甲醇营养型酵母菌中可经甲醇诱导产生HIV-2ROD gag蛋白,该蛋白具有强免疫学活性。

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法

根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。将p ET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本大耳兔,制备了多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1∶50 000,Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白。间接免疫荧光检测结果表明:该多克隆抗体可与由Cy HV-2感染引起细胞病变的异育银鲫脑组织细胞(GICB)发生特异性的结合。

猪圆环病毒Ⅱ型ORF3基因缺失突变毒株对仔猪的致病性及免疫原性研究

15头28～30日龄健康仔猪分成A、B、C3组（5头／组），分别肌注接种PCV2ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C、亲本毒株PCV2-CD以及生理盐水。用PCR-RFLP和PCR方法，分别从A组和B组屠宰仔猪的腹股沟淋巴结中特异性检测到mPCV2-C和PCV2-CDDNA，发现mPCV2-C能够在仔猪体内复制增殖。组织病理学结果表明；A组和B组腹股沟淋巴结、肝细胞及肺泡壁上皮细胞呈现病变，其中B组病变较严重，证实ORF3基因缺失未改变PCV2的组织嗜性。外周血T淋巴细胞亚群含量动态检测结果表明：与C组相比，A组、B组外周血CD3^＋、CD4^＋细胞百分含量降低，而A组CD8^＋细胞于免疫后第14天回升，高于B组和C组，表明ORF3基因缺失使病毒对T淋巴细胞亚群的影响有所减弱，并有诱导仔猪细胞免疫应答的趋势。上述结果提示ORF3缺失致使病毒的致病力有降低的趋势。PCV2抗体动态检测发现：mPCV2-C明显诱导了仔猪的体液免疫，具有良好的免疫原性。mPCV2-C可作为PCV2基因缺失疫苗候选毒株。

复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究

目的 对 1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究。方法 通过灌胃和滴鼻 2种途径对BALB/c小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析。结果 初次免疫后 ,2组小鼠均有应答 ,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,显示出明显的加强效果。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA ,灌胃组仅在肠道检测到SIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较 ,发现IgG的应答水平明显高于SIgA。免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明 ,抗体可长期持续至少半年以上。 结论 重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果 ,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础。

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者CD4^＋ CD25^＋调节性T细胞的研究进展

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者常常以自身免疫系统的过度活化为其显著特征,并且HIV疾病进展与自身的免疫活化程度密切相关。调节性T细胞(Treg)在维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面发挥着重要的作用。在HIV-1感染者中,Treg不仅限制机体的过度免疫活化,而且可能抑制针对HIV-1特异的细胞免疫应答;因此,Treg对HIV疾病进展的影响是利是弊,至今尚无定论。对此,深入了解HIV感染者中Treg"量"和"质"的变化及其在HIV感染中的作用,不仅有助于解决目前有关"Treg在HIV病程进展中作用"的争论,而且将有助于设计抗HIV的方案,以期为今后艾滋病的治疗和疫苗的研究提供新的靶点以及提供新的思路和理论参考。

天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒1型研究

目的检测用基因工程方法制备的天花粉蛋白抗人免疫缺陷病毒1型的活性。方法将人免疫缺陷病毒1型在细胞系中培养,加入天花粉蛋白后,观察细胞病变情况,检测P24抗原及逆转录酶的活性。结果加入天花粉蛋白的细胞始终未见细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阴性;阴性对照组细胞在第7 d以后均出现人免疫缺陷病毒1型感染典型细胞病变,P24抗原及逆转录酶检测均为阳性;阳性对照组始终未见HIV-1感染典型细胞病变,逆转录酶的活性检测和P24抗原检测结果均为阴性。结论天花粉蛋白在培养细胞系中可以有效地抑制人免疫缺陷病毒1型。

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25截短蛋白的多克隆抗体制备与免疫原性分析

鲫(Carassius auratus)造血器官坏死症是我国养殖鲫中新出现的一种传染性病毒性疾病,其病原为鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cy HV-2),为研制针对该病的有效诊断试剂和疫苗,分析了Cy HV-2 ORF25基因编码蛋白的抗原表位,利用原核表达系统对Cy HV-2 ORF25编码蛋白富含抗原表位的区域进行截短表达,制备了抗Cy HV-2 ORF25编码蛋白的多克隆抗体,通过间接免疫荧光和免疫保护力测定等实验研究了截短表达蛋白的免疫原性。结果显示,原核表达的截短蛋白t ORF25分子质量约为28 k W,蛋白纯化后免疫日本大耳兔制备的多克隆抗体可特异性识别在Gi CB上增殖的Cy HV-2。将截短表达蛋白t ORF25免疫异育银鲫后,感染Cy HV-2,其相对免疫保护率达47%。

Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV

不同人类免疫缺陷病毒感染途径群体中戊型肝炎病毒的流行情况

本研究旨在了解不同人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染途径群体中戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）抗体情况，探讨HEV疫苗接种的必要性。采集HIV感染者的血清或血浆，利用酶联免疫吸附试验（enzyme—linked immunosorbent assay，ELISA）检测HEVIgG抗体、IgM抗体及抗原，荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测HEV核酸，Roche高纯化HIV-1核酸定鼍检测试剂盒（PCR荧光法）检测HIV感染者的HIV载量。比较分析不同HIV感染途径群体中HEV流行率的差别。结果显示，HIV感染者中HEV IgG抗体的阳性率为37．4％，静脉吸毒、成分献血和传播途径不明HIV感染群体的HEVIgG抗体阳性率分别为49．3％、39．5％和30．4％。HEV核酸荧光PCR检测结果均为阴性。3种HIV感染群体之间HEV IgG抗体阳性率差异无统计学意义（x2=2．978，P〉0．05）。HEVIgG阳性与阴性感染者之间HIV载量差异无统计学意义（P〉0．05）。结果提示，为保护HIV感染者免受HEV感染，应考虑接种HFV疫苗。

人类免疫缺陷病毒1型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中的表达

目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Negative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5′端分别引入EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中。为了便于蛋白检测,在下游引物5′端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分别瞬时转染BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测Nef基因的表达情况。结果:成功构建了含Nef基因的重组真核表达质粒,核酸序列分析显示,克隆的Nef基因序列全长651bp,与GenBank中登记的Nef基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在Nef预期位置检测到特异性条带。结论:HIV-1Nef基因在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中获得了正确表达。

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗的免疫研究

目的 构建新型单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗 ,鉴定其在哺乳细胞中的表达 ,检测其激发动物产生免疫反应的能力。方法 RT -PCR鉴定gD基因在COS - 7细胞中的表达 ,ELISA检测血清中中和抗体水平 ,用病毒攻击后检测其保护效率。结果 pVAX -gD能在COS- 7细胞中表达 ,并可激发免疫动物产生高滴度中和抗体 ,有效保护动物免受致死量病毒的攻击。

北京地区部分人类免疫缺陷病毒基因型分析

To investigate HIV genotypes isolated from blood donors in Beijing, the samples positive for anti-HIV antibody with ELISAwere confirmed by HIV blot. All 26 samples were confirmed positive for anti-HIV antibody. RNA from those samples were detected with RT-PCR. 20 of them were positive for HIV RNA. The purified PCR products were cloned. The sequences were determined and analyzed. The results showed that 10 of 20 isolates were CRF BC, 9 of them were genotype B, 1 of them were CRF AE. 6 of 9 genotype B belong to B’(Thailand B), the remaining 3 isolates may belong to western genotype B. The results indicated that several different genotypes of HIV which are predominant in China may exist in Beijing. This result may be helpful for the development of HIV vaccine in Beijing.