固相萃取-液相色谱-串联质谱测定人体尿液中有机磷酸酯及其二酯和羟基代谢物

尿液中的有机磷酸酯二酯代谢物(di-OPEs)是现阶段识别和量化人体暴露于有机磷酸酯(OPEs)的首选生物标志物.目前鲜有研究同时对OPEs及其二酯代谢物、羟基代谢物(OH-OPEs)进行分析测定,且关注的目标化合物种类较少.本研究对尿液前处理过程中常用的净化浓缩方法进行了优化,建立了人体尿液样品中14种OPEs、7种di-OPEs和3种OH-OPEs的高效液相色谱-串联质谱分析方法(HPLC-MS/MS).取2 mL样品经β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶酶解6 h后,加入2%甲酸/水调节pH,然后用STRATA-X-AW固相萃取柱进行净化,收集固相萃取过程中的2%甲酸/甲醇淋洗液和2%氨水/甲醇洗脱液氮吹浓缩后分别进行OPEs、OH-OPEs和di-OPEs的HPLC-MS/MS测定,OPEs和OHOPEs的质谱检测选用电喷雾正离子模式电离,di-OPEs选用负离子模式,在多重反应监测模式(MRM)下测定.尽管尿液样品中多数目标物质在检测时存在基质效应(均值24%-159%),但通过合适的同位素内标进行校正,可以抵消部分基质影响.在优化的条件下,24种目标物质在0.05-40 ng·mL^(−1)范围内线性关系良好(r>0.99),方法检出限(MDL)0.0008-0.32 ng·mL^(−1),加标回收率60%-131%,RSD为4%-22%.采用本方法对实际人体尿液样本进行分析,7种di-OPEs和3种OH-OPEs的总含量为0.07-7.04 ng·mL^(−1),中位含量为0.54 ng·mL^(−1),14种OPEs的总含量为<MDL-0.68 ng·mL^(−1),中位含量为0.05 ng·mL^(−1).两种具有直接工业生产应用的di-OPEs(磷酸二苯基酯DPHP和磷酸二丁酯DBP)检出率高于60%,其来源值得追溯.一种新型有机磷酸酯阻燃剂3-异丙基苯基二苯基磷酸酯(3IPPDPP)的检出率为66.7%,应该引起关注.

合成大麻素ADB-BUTINACA在人体尿液及体内外代谢模型中的代谢比较

本研究采用液相色谱-高分辨质谱法分析人体尿液样本、斑马鱼体内代谢模型以及肝微粒体体外代谢模型中N-(1-氨甲酰基-2,2-二甲基丙基)-1-丁基吲唑-3-甲酰胺(ADB-BUTINACA)的代谢情况。结果表明,共检测到45个ADB-BUTINACA代谢物,包括37个Ⅰ相代谢物和8个Ⅱ相代谢物,涉及9种代谢途径,其中有7个Ⅰ相代谢物为首次报道。通过对比代谢模型和人体尿液样本中的代谢物发现,斑马鱼体内代谢模型产生的代谢物更接近人体尿液样本,但无论是体内还是体外代谢模型,其代谢物排名与人体尿液样本具有较大差异,仅凭体内外代谢模型得到的代谢物数据难以直接用于真实样本的分析。通过对人体尿液样本中代谢物峰面积排名分析,建议将ADB-BUTINACA原型、M36、M19以及M16作为ADB-BUTINACA的生物标志物。

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中16种羟基多环芳烃

建立固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中16种羟基多环芳烃(OH-PAHs)的含量。试样经过β-葡萄糖苷酸酶/硫酸酯酶酶解,HLB小柱富集净化,氮吹浓缩后0.1%维生素C乙腈溶液复溶,Agilent Eclipse PAH(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,负离子多反应监测模式测定。各羟基多环芳烃线性范围良好,相关系数均>0.99,方法检出限范围为0.015~0.06 ng/mL,平均加标回收率范围为71.25%~114.07%。30份人体尿样检测结果显示2-OHNap、1-OHNap、2-OHFlu等10种均有检出,其检出率范围为23.33%~100%。该方法具有操作简便、灵敏度高、准确性好、适用性强、检测效率高、检测成本低等特点,可满足人体尿液中16种羟基多环芳烃含量的同时准确测定需要。

吖啶橙荧光探针法测定人体尿液中的DNA

因吖啶橙(Acridine Orange,简称AO)在十二烷基苯磺酸钠(Dodecylbenzene Sulfonic Acid Sodiumsalt以下简称SDBS)介质中存在形态之间的平衡,而DNA(deoxyribonucleic acid)的加入所起作用也象表面活性剂一样起到有序化介质的作用,即DNA的加入可使AO的平衡发生移动,导致体系荧光增强,其荧光强度与DNA的浓度在一定的范围内呈线性关系,从而建立了测定DNA的新的灵敏方法。本法的荧光激发波长为506 nm,发射波长为529 nm,激发和发射狭缝均为5 nm。对于鱼精子DNA(Fish sperm DNA以下简称fsD-NA),线性范围为0-10 μg·mL-1,方法的最低检出限为0.088μg·mL-1,本法成功应用于人体尿液中DNA的临床测定。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定人体尿液中3种甜味剂

建立了超高效液相色谱-串联质谱法快速测定人体尿液中甜蜜素、糖精钠和安赛蜜3种甜味剂的方法。样品经过冷冻、解冻和高速离心后上清液用水直接稀释测定。目标化合物采用Waters ACQUITY UPLCHSS T3色谱柱(50×2.1mm,1.8μm)分离,以甲醇和含0.002mol/L乙酸铵的水溶液为流动相进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源电离、负离子多反应监测模式检测。甜蜜素、糖精钠和安赛蜜的平均回收率分别为101%、99.8%和108%,相对标准偏差分别为1.25%、2.00%和1.78%,检出限(S/N=3)分别为0.015μg/L、0.10μg/L和0.01μg/L。应用本方法测定200份尿液样品,甜味剂总检出率为97%。

核磁共振电信号内标法在人体尿液定量分析中的应用

研究了Varian谱仪核磁共振电信号内标法在人体尿液代谢物浓度测定上的应用,通过实验证明了该方法进行定量分析的可靠性。NMR电信号内标法原理上是通过Varian谱仪去耦通道在常规一维谱图上产生一个参考信号,并利用谱仪软件程序来调整该信号在频谱上的强度、频率、衰减速率等参数。避免了代谢组学中NMR定量实验需要添加已知浓度物质(例如TSP)作为内标而引起的内标物与样品相互作用、谱峰重叠、内标物不溶及弛豫时间太长等问题。研究结果表明,Varian谱仪去耦通道产生的电信号稳定可靠(标准偏差0.36%),能够用于定量分析;当样品浓度大于20mmol/L或小于2mmol/L时,该方法测定的相对误差分别为1%和5%。通过配制低浓度的尿液模型样品,验证了电信号内标法测量人体尿液代谢物的浓度的可行性,最后使用该方法测量真实的人体尿液中常见代谢物的浓度,测定结果与医院常用生化分析仪器的测定结果相符。

反相高效液相色谱法有效分离和同时测定人体尿液中7种喹诺酮

目的建立一种同时检测人体尿液中吡哌酸与依诺沙星、氟罗沙星、培氟沙星、洛美沙星、环丙沙星和恩氟沙星7种氟喹诺酮类药物的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为ZY1104型C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,流动相为乙腈∶0.02mol/L四丁基溴化铵(体积比为9∶91),以三氟乙酸缓冲液调pH2.87,流速1.0ml/min,检测波长282nm,进样量20μl。结果7种药物的校准曲线在0.5～100μg/ml浓度范围内呈良好的线性,相关系数r≥0.9996,检出限为0.036～0.088μg/ml,样品的平均加标回收率在91.6%～99.5%,RSD<7%(n=5)。结论所提出的方法简便,快速,可靠,能有效分离和同时测定人体尿液中的多种喹诺酮。

固相萃取-高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法检测人体尿液中的异黄蝶呤

建立了固相萃取-高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培法(SPE-HPAEC-IPAD)测定人体尿液中异黄蝶呤的分析方法。尿液经ENVI-18与732型阳离子交换柱串联萃取后,除去了大量干扰物质。采用IonPacAS21分析柱(250mm×2mm),以0.025mol/LNaOH溶液为淋洗液,流速为0.40mL/min,在优化的安培检测波形条件下,异黄蝶呤的质量浓度在0.005～0.200mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.9984,检出限为0.003mg/L。健康人及癌症病人尿液在2mg/L和5mg/L两个添加水平的平均回收率在95.4%～96.8%之间,相对标准偏差小于5%。此方法环保、快速、准确,可用于健康人与癌症病人尿液中异黄蝶呤的测定。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸

建立了高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸分析新方法。采用乙腈-0.1%甲酸溶液(10:90,V:V)为流动相,流速为0.3mL·min^(-1)。在全扫描模式下,将m/z为182.2、205.2的离子分别确定为酪氨酸和色氨酸的母离子,m/z136.1与188.0分别为定量子离子。在质谱的多反应监测正离子模式下进行分析,酪氨酸和色氨酸的检测限分别为0.10和0.25ng·mL^(-1)。在已优化的色谱和质谱条件下,待测样品经过简单的离心、过滤后即可直接进样检测。在3个不同添加水平的回收实验中,酪氨酸和色氨酸的平均回收率为74.0%~124.0%,RSD值小于7.97%,表明该方法可满足实际样品检测要求。该方法操作简单、快速、灵敏度高,可用于人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸的同时测定。

表面增强拉曼散射光谱对人体尿液成份的初步研究（英文）

作为人体体液之一的尿液中含有多种人体新陈代谢的产物以及体内排出的毒素,如果能够对这些组分进行定性分析,就能够在一定程度上有效反映人体器官的健康状况,这是临床医学中重要的研究途径。该实验分别以785和1 030nm激光作为源激发,以具有电磁场增强的金纳米粒子作为基底,利用表面增强拉曼散射光谱(SERS)对临床实验研究中所用的人体新鲜尿液的成份进行快速、无损分析。通过控制金纳米溶胶与尿液原液的混合比例从而来制备一系列具有不同配比的实验样品,并且通过实验我们获得其相应的SERS光谱。由实验结果分析可知,我们能够有效地得到尿液中尿酸、次黄嘌呤等多种成份的SERS光谱。与此同时,我们还研究了在不同波长激光条件下的尿液的SERS光谱。相较于1 030nm的激光,785nm的激光得到的SERS光谱具有较高的分辨率以及较低的背景值。与此同时,利用具有1 030nm激光的便携式拉曼仪对实验样品进行快速、无损分析,有望为临床医学现场、快速分析诊断提供帮助和支持。而且相信,SERS能够在人类健康甚至生物组织的检测等方面提供更加详细的信息。

人体尿液中阿昔洛韦和更昔洛韦的反相高效液相色谱法同时测定

研究简单的流动相甲醇-水体系,可同时对人体尿液中阿昔洛韦(ACV)和更昔洛韦(GCV)两种抗病毒药物的最优化分离,建立了通过UV检测药物的新方法。实验结果表明,流动相为甲醇-水(10/90,v/v),流速为0.5mL/min,柱温为室温,紫外检测波长254nm,使用Diamoncil C18柱对两种药物分离最好。两种药物的回收率在98.7%～101.4%之间,ACV和GCV的定量下限分别为0.08μg/mL和0.2μg/mL,信噪比为3时,最低检出限分别为0.02μg/mL和0.06μg/mL,日内、日间精密度(RSD)均小于4.8%,准确度(RE)在±5.6%之内。本方法可对样品进行灵敏、准确的定性及定量分析。

在线固相萃取-高效液相色谱法测定人体尿液中的N-乙酰-S-(N-甲基甲氨酰)半胱氨酸

建立了在线固相萃取-高效液相色谱法测定人体尿液中的N-乙酰-S-（ N-甲基甲氨酰）半胱氨酸（ AM-CC）的分析方法。左泵以AminoPac PA柱作为在线固相萃取柱、5 mmol/L KH2 PO4溶液为流动相,将AMCC与样品基质分离；然后通过控制阀切换时间仅将含AMCC的部分样品溶液在线洗脱至Acclaim PAⅡ C18分析柱上,右泵以0.1％ H3 PO4溶液（含5％乙腈）和乙腈为流动相对AMCC进行梯度洗脱分离和分析测定。结果表明,AMCC在1.0～100 mg/L范围内线性关系良好,相关系数r〉0.999；上样量为10μL时,方法定量限为0.2 mg/L；回收率在85.9％～82.9％之间；相对标准偏差（n=6）分别为0.2％（保留时间）和4.0％（峰面积）。与传统的离线固相萃取-高效液相色谱法相比,本方法更为简便环保、高效稳定。用本方法测定了7份人体尿液,结果满意。

HPLC法测定人体尿液样品中的4′-羟基黄烷酮和6-甲氧基黄烷酮

报道一种快速测定人体尿液中4’-羟基黄烷酮和6-甲氧基黄烷酮的HPLC方法。采用自制的大蒜新素键合硅胶填充柱（DTSP，4．6mmi．d．×15mm，10μm），以乙腈／1．5％三乙胺-甲酸（65：35，v／v，pH=3．0）为流动相，流速设定为1．0mL·minn^-1，检测波长为257nm时，实现了人体尿样品中上述黄烷酮化合物的良好分离。4’-羟基黄烷酮的线性范围为5～100mg·L^-1，r=0．9920；6-甲氧基黄烷酮线性范围为5～100mg·L^-1，r=0．9991，它们的最低检出限分别为1．03ng和1．56ng，平均回收率分别为99．02％～99．26％和98．21％-98．62％，相应的RSD分别小于0．354％和0．605％（n=5）。该方法快速、简便、可靠，适用于人体尿液样品中上述黄烷酮分离分析。

高效液相色谱-荧光分析法测定人体尿液中的墨蝶呤

建立了人体尿液中墨蝶呤的高效液相色谱-荧光分析方法。尿液经乙腈处理,过0.45μm水相滤膜后定容,可进行液相色谱分析。色谱柱为Diamonsil C18柱,以水-甲醇(80:20,v/v)为流动相,流速为1.0 mL/min,荧光检测波长为λex=425 nm,λem=530 nm。墨蝶呤含量在0.005～1.0μg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,线性回归方程为y=106x-328.02(r=0.999 0),检测限是0.002μg/mL。其加标平均回收率在98.7%～106.8%之间,相对标准偏差小于7.34%。该方法简便,应用于胃癌病人和健康人尿样中墨蝶呤测定,结果较好。

高效液相色谱-荧光检测法同时测定人体尿液中的多种蝶呤类化合物

建立了高效液相色谱-荧光检测法同时测定人体尿液中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤。尿液在酸性条件下经碘-碘化钾溶液氧化30 min,滴加抗坏血酸还原液后,可进行液相色谱分析。色谱柱为Diamonsil C18柱,用体积比9∶10的水-甲醇为流动相,流速为1.0 mL/min,荧光检测波长为λex=360 nm,λem=445 nm。新蝶呤、生物蝶呤、蝶呤和墨蝶呤的线性范围分别是0.005～1.5μg/mL、0.05～2.0μg/mL、0.01～1.0μg/mL和0.3～10.0μg/mL,检出限依次为0.003μg/mL、0.002μg/mL、0.001μg/mL和0.15μg/mL。加标平均回收率在84.8%～120.0%之间。用该方法测定了健康人、普通病人和癌症病人尿样中的蝶呤、新蝶呤、生物蝶呤和墨蝶呤,发现癌症病人尿样中的新蝶呤水平与健康人和普通病人相比有所升高,生物蝶呤水平有所降低。该方法准确,可行,适用于临床上尿样中蝶呤类化合物的检测。

固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定尿液中8种双酚类物质

建立固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿液中8种双酚类物质(bisphenols,BPs)的含量。尿液经β-葡萄糖苷酸酶/硫酸酯酶酶解,HLB小柱富集净化,SB-C18柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,负离子多反应监测模式测定。方法线性范围为0.25~10 ng/mL,r2≥0.99,方法检出限范围为0.007~0.30 ng/mL,方法平均回收率范围为81.7%~117%,相对标准偏差范围为0.9%~6.3%,65份人体尿样检测结果显示BPA、BPS、BPF、BPAF四者均有检测,检出率分别为76.9%、73.8%、40.0%和7.7%。该方法具有操作简便、灵敏度高、准确性好、重复性佳等特点,可满足人体尿液中8种双酚类物质含量的测定需要。

漂浮固化分散液液微萃取/液相色谱法测定人体尿液中的6种羟基多环芳烃

建立了漂浮固化分散液液微萃取(DLLME-SFO)/液相色谱法(LC)同时测定人体尿液中6种羟基多环芳烃(OH-PAHs)的分析方法,并对萃取剂、分散剂、尿液p H值、盐浓度以及萃取时间等参数进行了优化。优化结果表明:尿液调节p H值为5.0,酶解后,加入20%氯化钠调节盐浓度,再加入40μL正十一醇作萃取剂和400μL丙酮作分散剂,涡旋后,3 000 r/min离心5 min,于-20℃冰箱中冷却10 min,待正十一醇凝固后,取出置于细胞瓶中,室温下溶解后,进液相色谱分析。在最优的条件下,该方法对6种OHPAHs的回收率为70.4%~129%,相对标准偏差为1.7%~14.8%;线性范围为2.5~150.0μg/L,相关系数(r2)为0.999 1~0.999 8;检出限和定量下限分别为0.5~1.0μg/L和1.5~3.0μg/L。该方法操作简单快速,可满足流行病学上大样本量尿液的检测需求。

气相色谱-质谱法同时测定人体尿液中16种邻苯二甲酸酯

建立人尿中16种邻苯二甲酸酯的离子阱气相色谱-质谱方法。该方法采用正己烷萃取,经HP-5MS色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)分离,使用GC-MS选择离子扫描模式进行分析测试。结果表明:16种邻苯二甲酸酯在0.05～4 mg/L范围内线性良好,r2>0.99,方法检出限为0.001～0.017 mg/L,定量下限(LOQ)为0.002～0.056 mg/L,加标回收率在80%～120%之间;RSD(n=8)小于10%。并采用该方法测定了90份人尿中的16种邻苯二甲酸酯,检出10种邻苯二甲酸酯,其中DIBP检出率高达50%,DEHP检出率也达到22%。

高效液相色谱-紫外检测法测定人体尿液中的蝶呤-6-羧酸

建立了人体尿液中蝶呤-6-羧酸的高效液相色谱-紫外分析新方法。运用Lichrospher C18柱（250×4．6mm，5μm），甲醇-水（70：30，V／V）为流动相，流速为0．4mL／min，可较好地将尿液中蝶呤-6-羧酸与其它共存干扰物质分离。在355nm检测波长下，蝶呤-6-羧酸在0．19～4．8μg／mL范围内与色谱峰面积呈良好线性关系，相关系数为0．9999，方法检出限为0．015μg／mL。尿液经0．45μm滤膜过滤后，可直接进样分析，方法简便，应用于癌症病人和健康人尿样中蝶呤-6-羧酸测定，结果较好。方法的加标回收率为94．6％～100．2％，相对标准偏差为0．81％～5．07％。

人体尿液对化学振荡反应的影响

本文报道了用Belousov-Zhabotinskii反应装置的化学振荡器,对健康人与病人的尿液在相同条件下分别进行了检验,发现不同对象尿液对该反应有一定的规律性,作者根据B-Z振荡反应的机理对实验结果做了初步的探讨。