枸杞原汁、枸杞多糖诱导人正常肝细胞L-O2及卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910凋亡的实验研究

目的:对比研究枸杞原汁、枸杞多糖对人正常肝细胞L-O2及人卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910的生长抑制,及诱导凋亡的作用及其机制。方法:枸杞原汁、枸杞多糖作用L-O2、SKOV3、HO8910,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率并分析细胞周期分布的变化。结果:枸杞原汁组:L-O2、SKOV3、HO8910生长抑制率分别为-58%,-49%,-84%;L-O2、HO8910凋亡细胞含量明显少于空白对照组,正常细胞数明显多于空白对照组;枸杞原汁对L-O2、HO8910无细胞周期阻滞,各期细胞分别较对照组均匀;枸杞多糖组:枸杞多糖(500,1000,2000)mg/L作用下,L-O2生长抑制率分别为28%,31%,20%;SK-OV3为-1%,40%,35%,HO8910为13%,48%,41%;不同浓度LBP对L-O2及HO8910均有诱导凋亡作用,凋亡细胞数以1000mg/L为最大;1000mg/L组L-O2、HO8910细胞周期均阻滞于S期,S期细胞比例高于对照组。结论:枸杞原汁在体外对L-O2、SKOV3、HO8910有促进生长作用,且对HO8910的作用最大;对L-O2、HO8910无诱导细胞凋亡作用。枸杞多糖在体外对L-O2、SKOV3、HO8910都有抑制生长作用,且对HO8910作用最大;对L-O2、HO8910有诱导细胞凋亡作用,以浓度1000mg/L为最大,并未表现出剂量依赖效应。枸杞多糖诱导细胞发生S期阻滞,并且诱导S期细胞发生凋亡是其体外抑制细胞生长的可能机制之一。

磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯对L-02肝细胞氧化应激及凋亡损伤机制

在各类环境介质及生物体甚至人体中都检测到有机磷阻燃剂磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(tris(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate,TDCPP)的存在,为探究TDCPP对人体健康的毒性作用,选取人体正常肝细胞L-02细胞作为模型,考察在体外暴露条件下TDCPP对L-02细胞的细胞存活率、凋亡、氧化应激以及p53通路相关基因方面的影响。MTT结果显示,24 h、48 h、72h的半数致死浓度(LC50)分别为:116.56μmol·L^(-1)、81.89μmol·L^(-1)、65.11μmol·L^(-1)。TDCPP暴露24 h条件下,随着TDCPP暴露浓度的增加,细胞的凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平也逐渐增加,100μmol·L^(-1)浓度条件下凋亡高达25.58%±1.61%,ROS水平是对照组的2.07±0.07倍。实时荧光定量PCR法检测线粒体凋亡通路相关基因的表达情况,在TDCPP刺激下,Bax、caspase-3、caspase-9、p53和Apaf-1相对表达量增加,Bcl-2相对表达量减少。蛋白免疫印迹法检测发现Bax/Bcl-2和caspase-3均随浓度增加而递增。本研究为综合评估TDCPP的生物和环境健康毒理效应提供了实验数据及理论支持。

ATPase6,8在纳米氧化锌诱导HL-7702细胞线粒体能量代谢障碍中作用

目的分析ATPase6,8在纳米氧化锌(ZnO NP)诱导正常人肝细胞(HL-7702)线粒体氧化磷酸化能量代谢障碍中的作用,为ZnO NP疾病防控提供基础数据。方法透射电镜和马尔文粒径分析仪测定ZnO NP颗粒表征;ZnO NP染毒24 h后,3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二甲苯溴化四唑(MTT)法检测细胞活性及剂量选择;激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位改变;高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)的含量;紫外分光光度计检测线粒体呼吸链复合体Ⅴ(MRCCⅤ)活性;qRT-PCR检测ATPase6及ATPase8 mRNA表达量。结果 ZnO NP(2.5、5、10、20、40、80、160和320μg/mL)染毒24 h后,随着ZnO NP剂量增加,细胞存活率逐渐降低(r=-0.859,P<0.05),80、160、320μg/mL剂量组细胞存活率显著低于对照组(P<0.05),根据细胞存活率>70%,最终选择染毒剂量为0、2.5、10、40μg/mL;与对照组相比,10和40μg/mL剂量组红/绿色荧光比值明显减少(P<0.05),说明细胞线粒体膜电位(MMP)下降;同样40μg/mL剂量组细胞ATP、总腺普酸含量(TAN)、能荷值(EC)水平均明显下降,10~40μg/mL剂量组细胞AMP水平和2.5~40μg/mL剂量组细胞ATP/ADP水平也均明显下降(P<0.01);与对照组相比,2.5~40μg/mL剂量组细胞MRCCⅤ活性明显降低而ATPase6和ATPase8 mRNA表达水平均显著上升(P<0.01)。结论 ZnO NP能诱导HL-7702线粒体能量代谢障碍,可能是通过影响细胞线粒体ATPase6,8 mRNA的表达水平,进而引起MRCCⅤ活性降低及线粒体MMP下降,氧化磷酸化无法正常进行,ATP生成过程受到抑制,最终导致线粒体能量代谢障碍。