DMB衍生-高效液相色谱法测定重组人促卵泡激素中的唾液酸含量

目的建立采用4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(DMB)衍生-高效液相色谱-荧光检测器(HPLCFLD)法(DMB衍生法)同时测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中2种唾液酸组分N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)和N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)含量的方法。方法将DMB衍生法与邻苯二胺衍生-高效液相色谱法(邻苯二胺衍生法)进行对比研究,对DMB衍生法中的水解条件进行优化并确定最终方法为rhFSH原液经酸水解后,采用DMB进行衍生,经Agilent ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,采用荧光检测器检测。结果与邻苯二胺衍生法相比,DMB衍生法能够实现Neu5Gc与Neu5Ac相关杂质的有效分离。该方法Neu5Gc和Neu5Ac分别在0.5~5.0μg·mL^(-1)(r=0.9999)和25~250μg·mL^(-1)(r=0.9998)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;Neu5Gc和Neu5Ac的检测限分别为11.07、10.30 ng·mL^(-1),定量限分别为33.21、20.60 ng·mL^(-1),两者回收率分别为(99.63±1.33)%(n=9)和(100.62±1.58)%(n=9),RSD分别为1.3%(n=9)和1.5%(n=9)。结论该方法专属性强、灵敏度高、精密度和准确度良好,可用于准确测定rhFSH中唾液酸Neu5Gc和Neu5Ac的含量。

助孕者使用重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力的量化评估

目的通过比较经验评估法和量化评估法在临床上的应用效果,探索评估助孕者是否具备使用重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力的可靠方法,提高助孕者自行注射预充式注射笔的安全性。方法参考文献,建立助孕者重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力量化评估法,包含注射相关知识和注射操作两个量化评估表,均设置单项否定因素。在百色某三级甲等医院生殖医学中心,选取2020年1月—2023年3月体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)第一周期经护士同质化注射宣教指导,且促排卵第1天采用两种不同方法1次评估具重组人促卵泡激素注射液预充式注射笔自行注射能力的助孕者212例作为观察对象,采用经验评估法的104例设为对照组,采用量化评估法的108例设为观察组。比较两组本周期内下次复诊日的注射相关知识得分、注射操作得分及人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)注射日注射并发症发生情况。结果注射相关知识得分、注射操作得分、注射相关知识和注射操作20个项目中13个单项得分,观察组均明显高于对照组(P<0.001);观察组注射并发症低于对照组(P<0.05)。结论相比经验评估法,量化评估法更全面客观,能激励助孕者正性学习态度,其掌握注射相关知识和注射操作动作更正确规范,提高助孕者自行注射安全性;利用单项否定因素初步分流,对判断助孕者是否具备使用预充式注射笔自行注射能力具有临床实用价值。

重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表信效度检验

目的构建助孕者重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表,并进行信效度检验。方法通过参考文献、专家咨询形成初稿,经预调查结果修改初稿得到重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表终稿,包含注射相关知识和注射操作两个子表。在百色市某三级甲等医院生殖医学中心,选取2020年1月-2023年3月体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)第一周期采用评估表评估重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力的助孕者328例(531例次)作为调查对象。分析评估表的内部一致性信度(Cronbach’sα系数)、重测信度、条目水平的内容效度指数(item-level content validity index,I-CVI)、平均量表水平的内容效度指数(average scale-level content validity index,SCVI/Ave)、随机一致性概率(random consistency probability,Pc)、Kappa值,并进行层次分析、KMO和巴特利特球形检验(kaiser-meyer-olkin and Bartlett sphericity test,KMO和Bartlett球形检验)、探索性因子分析(exploratory factor analysis,EFA)和项目分析。结果评估表总体的Cronbach’sα系数为0.832,重测信度为0.885;各条目I-CVI为0.80~1.00,S-CVI/Ave为0.70~1.00,Pc为0.031~0.156,Kappa值为0.76~1.00,CR值为0;KMO值为0.792,近似χ^(2)值为4331.941(P<0.001);探索性因子分析共提取得到6个公因子,各条目共同度在0.424~0.934,累积方差解释率为75.604%;项目分析显示20项均具有良好的区分性(P<0.001)。结论重组人促卵泡激素注射笔自行注射能力评估表具有良好的信度和效度,可作为生殖医学专科护士对助孕者自行注射能力的测评工具。

人促卵泡激素光激化学发光免疫分析法的建立及性能评价

目的利用光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)建立人促卵泡激素(hFSH)的快速检测试剂。方法使用2株配对的hFSH单克隆抗体,一株hFSH单克隆抗体用生物素标记,另一株hFSH单克隆抗体包被于受体微球上,与包被有链霉亲合素的供体微球共同构成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果自制hFSH试剂分析敏感性和功能敏感性分别为0.09和0.12 U/L,线性测量范围为0.09～192.00 U/L,试剂的分析内变异系数(CV)和分析间CV分别为4.2%～7.1%和7.5%～8.3%,均<10.0%,与人黄体生成素(hLH)、人促甲状腺素(hTSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的交叉率分别为0.16%、0.08%和0.02%。100份临床血清样本用本试剂与西门子Immulite 2000促卵泡生成激素化学发光(CLIA)检测试剂盒检测,其相关系数为0.979(P<0.001)。结论自制hFSH AlphaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本hFSH浓度的测定。

重组人促卵泡激素(rhFSH)肽图分析方法研究

目的建立重组人促卵泡激素(rh-FSH)的标准肽图分析方法。方法通过超滤、透析、冷冻干燥法富集制备rh-FSH对照品。通过尿素变性、二硫苏糖醇(DTT)还原、碘乙酸酰基化制备供试品溶液。采用N型-糖苷酶F(PNGaseF)酶解去除rh-FSH糖侧链,经SDS-PAGE验证切糖结果后,用胰蛋白酶水解,酶解所得肽段通过RP-HPLC分析,得到rh-FSH肽图。结果利用国外原研厂rh-FSH制剂富集制备的rh-FSH结构完整,可用作rh-FSH肽图分析的对照品。国产样品的肽图谱与对照品一致。结论建立的肽图分析方法可作rh-FSH产品的结构确证。

人促卵泡激素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立人血清促卵泡激素（hFSH）的检测试剂。方法采用双抗体夹心法建立hFSH—TRFIA检测试剂，对试剂的各项指标进行评价。结果hFSH—TRFIA检测试剂的测量范围为1～256U／L，灵敏度为0．08U／L，分析内和分析间的精密度分别为2．6％～4．2％，6．1％～8．6％，与人黄体生成素（hLH）、人促甲状腺素（hTsH）和人绒毛膜促性腺激素（hCG）的交叉率分别为0．14%，0．08％和0．01％。30份异常血样用该试剂与进口的同类试剂同时检测，其相关系数为0．993。结论试剂各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品。

重组人促卵泡激素联合人工受精治疗多囊卵巢综合征不孕患者的临床观察

目的 探讨重组人促卵泡激素联合人工受精治疗多囊卵巢综合征不孕患者的临床疗效。方法 选取自2014年1月-2015年4月在我院进行治疗的96例多囊卵巢综合征不孕患者进行研究分析,根据患者选择治疗方法 的不同分为观察组和对照组。采用重组人促卵泡激素联合人工受精进行治疗的56例患者为观察组,采用口服克罗米芬进行治疗的40例患者为对照组。治疗后对两组患者的体检指标、内分泌水平、卵泡相关指标及受精情况进行对比分析。结果 观察组患者的各项体检指标明显优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组患者的LH、FSH、LH/FSH、T水平明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组患者的卵巢体积及窦卵泡个数均少于对照组;而观察组优势卵泡的个数明显多于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;观察组患者的受精情况明显优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 采用重组人促卵泡激素联合人工受精治疗对PCOS不孕症进行治疗的疗效及安全性好,值得推广使用。

注射用重组人促卵泡激素联合二甲双胍对多囊卵巢综合征患者内分泌指标及子宫内膜容受性的影响

目的:探索注射用重组人促卵泡激素联合二甲双胍对多囊卵巢综合征(PCOS)患者内分泌指标及子宫内膜的容受性影响。方法:采用随机数字表法将九江市妇幼保健院2020年8月-2021年8月收治的124例PCOS患者分为对照组和试验组,各62例,对照组进行二甲双胍治疗,试验组采用注射用重组人卵泡刺激素联合二甲双胍治疗。治疗3个月后比较两组临床治疗有效率、生殖内分泌激素[雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)、睾酮(T)]水平、糖代谢指标[空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]水平及子宫内膜受容性[子宫内膜螺旋动脉阻力数值(RI)、搏动数值(PI)、子宫内膜的厚度]。结果:试验组总有效率高于对照组(P<0.05);治疗3个月后试验组生殖内分泌激素水平均低于对照组(P<0.05);治疗3个月后两组FPG、FINS、HOMAIR均低于同组治疗前(P<0.05),且试验组糖代谢指标均低于对照组(P<0.05);治疗3个月后两组RI、PI均低于同组治疗前(P<0.05),且试验组RI、PI均低于对照组(P<0.05);治疗3个月后两组内膜厚度高于同组治疗前(P<0.05),且试验组内膜厚度高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:注射用重组人卵泡刺激素联合二甲双胍能改善POCS患者内分泌水平与子宫内膜容受性,同时缓解胰岛素抵抗状态,安全性良好,具有临床推广应用价值。

PDCA在提高患者对重组人促卵泡激素注射笔正确使用率中的应用

目的总结开展PDCA循环在提高助孕患者对重组人促卵泡激素注射笔正确使用率的效果分析。方法2019年3-11月成立PDCA持续质量改进小组,选定提高助孕患者对重组人促卵泡激素注射笔正确使用率为活动主题,应用PDCA循环模式中的计划、实施、检查、处理四个步骤对患者使用重组人促卵泡激素注射笔发生的不正确使用事件进行原因分析,找出要因,并根据要因,制定改进措施,组织实施,检查评价实施结果。结果通过PDCA循环工具的使用,患者自行使用重组人促卵泡激素注射笔发生的不正确事件:注射手法不当、针头处理不当、针头溢液、调节计量不当、皮肤消毒不当,改善前后的差异有统计学意义(P<0.05)。结论开展PDCA循环活动提高了助孕患者自行使用重组人促卵泡激素注射笔的正确使用率。

脱氢表雄酮联合重组人促卵泡激素在卵巢储备功能低下患者体外受精-胚胎移植中的应用研究

目的:探讨脱氢表雄酮联合重组人促卵泡激素注射液在卵巢储备功能低下患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的应用价值。方法:选取2015年1月~2017年10月我院收治的卵巢储备功能低下行IVF-ET患者84例,按照随机数字表法分为观察组和对照组,各42例。对照组给予重组人促卵泡激素注射液治疗,观察组在行对照组治疗前服用脱氢表雄酮3个月。比较两组治疗前后卵巢储备功能及临床结局。结果:治疗前,两组血清FSH、AMH水平及AFC比较无显著性差异(P>0.05);治疗后,观察组血清AMH水平及AFC高于对照组,FSH水平低于对照组(P<0.05);观察组获卵数、受精率、可利用胚胎数及临床妊娠率均高于对照组(P<0.05);两组流产率比较无显著性差异(P>0.05)。结论:脱氢表雄酮联合重组人促卵泡激素注射液,可显著提高卵巢储备功能低下患者卵巢储备功能,有利于改善IVF-ET临床结局。

重组人促卵泡激素与重组促卵泡素β在控制性超促排卵中的疗效

目的比较重组人促卵泡激素注射液与重组促卵泡素β注射液在控制性超促排卵过程中的疗效和临床结局。方法选择139例行IVF-ET/ICSI的不孕患者作为研究对象,共143个治疗周期。按促性腺激素(Gn)种类不同,用药分为A、B两组:A组69周期,B组74周期。分别予重组人促卵泡激素注射液与重组促卵泡素β注射液促排卵,比较两组Gn启动剂量、Gn总量、用药时间、HCG日≥14 mm卵泡数、获卵率、优胚率、临床妊娠率、流产率、卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率。结果 A组Gn启动剂量低于B组,HCG日≥14 mm卵泡数及OHSS发生率高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05),其余各项差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在IVF-ET超促排卵中,无论采用重组人促卵泡激素注射液还是重组促卵泡素β注射液都能获得同样的妊娠成功率,但重组人促卵泡激素注射液卵泡募集数及OHSS发生率较高,提示需更谨慎地选择启动剂量和调整用量;低反应的患者选用重组人促卵泡激素注射液促排可能会增加成熟卵泡数。

柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素中的单糖

目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法定量测定重组人促卵泡激素(rhFSH)中的单糖。方法:采用20%TFA 水解rhFSH,释放单糖,用邻氨基苯甲酸衍生化,采用反相高效液相色谱法测定。色谱柱为 Jupiter C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相 A 为含0.15%正丁胺、0.25%磷酸、0.5%四氢呋喃的水溶液,流动相 B 为流动相 A 与乙腈比例为1:1的溶液,梯度洗脱,流速0.85 mL·min^(-1);柱温30 ℃;荧光检测器:激发波长为230 nm,发射波长为425 nm。结果:葡萄糖胺、半乳糖、甘露糖、岩藻糖进样量分别在0.39～3.94 nmol(r=0.9994),0.29～5.85 nmol(r=0.9998),0.24～4.90 nmol(r=0.9998),0.05～1.03nmol(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率(n=9)分别为104.1%,104.2%,104.2%,98.0%;RSD 分别为9.3%,1.8%,0.61%,6.0%。结论:该方法灵敏,专属性强,重复性好,可定量测定重组人促卵泡激素中的单糖。

人促卵泡激素体外生物学活性测定方法的建立

目的:建立人促卵泡激素(FSH)体外生物学活性检测方法,并对方法进行验证。方法:以人卵巢颗粒细胞KGN为基质细胞,用不同浓度的FSH与KGN细胞表面的FSH受体结合,刺激细胞产生不同浓度的孕酮,通过测定细胞培养上清中的孕酮含量来评价FSH的生物学活性,结果用国际标准品进行校正;对方法的专属性、线性与范围、回收率、精密度、耐用性进行验证;对市售FSH产品进行检测,并与传统动物体内活性检测结果进行比较。结果:KGN细胞对FSH有很好的剂量反应关系,方法专属性符合要求;线性范围为0.1~200 ng/m L,相关系数R2≥0.99;回收率为80%~120%;经3次重复测定,3批市售样品和3批自制样品的活性分别为(13.4±0.4)^(13.5±0.8)和(12.9±0.7)^(14.3±1.2)IU/μg,变异系数在15%之内;结果显示该方法有很好的耐用性。测定3批市售重组人FSH产品和1批尿源FSH国家标准品,其体外活性测定结果与传统动物体内活性测定结果一致。结论:建立并验证了一种利用KGN细胞体外测定FSH生物学活性的方法,有望代替传统的动物体内活性测定方法,可用于FSH的生物学活性评价和质量控制。

重组人促卵泡激素对比尿促卵泡素在体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植中促排卵治疗的快速卫生技术评估

目的:比较重组人促卵泡激素(r FSH)和尿促卵泡素(u FSH)在体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)中促排卵治疗的有效性、安全性和经济性,为r FSH和uFSH的临床合理使用提供循证证据。方法:计算机检索PubMed、Embase、Cochrane图书馆、中国知网、维普网、万方数据以及专业的卫生技术评估(HTA)数据库,收集rFSH对比uFSH在IVF/ICSI-ET中促排卵治疗的HTA、系统评价/Meta分析和经济学研究。筛选文献、提取资料、评价质量后,采用定性描述的方法汇总纳入研究的结论。结果:共纳入7篇文献,包括2篇系统评价/Meta分析和5篇经济学评价,未检索到HTA报告,所有研究均来自国外报道。系统评价/Meta分析发现,rFSH组在控制性促排卵中的获卵数较u FSH组多;而两组的持续妊娠率、临床妊娠率、活产率、流产率和卵巢过度刺激综合征发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。经济学研究显示,rFSH可能更具成本-效果优势。结论:目前可获得的证据支持将rFSH用于IVF/ICSI-ET的促排卵治疗,u FSH的疗效和安全性与其相当,且rFSH可能更具成本-效果优势。

重组人促卵泡激素预冲笔注射示意卡的设计及应用

近年来,随着医疗卫生事业的发展,辅助生殖技术为广大不孕症患者带来了福音。作为辅助生殖技术促排中的药物重组人促卵泡激素注射液也在临床中广泛应用。我中心年IVF-ET周期将近6 000周期,大约四分之三周期患者使用重组人促卵泡激素（简称大果）预冲注射笔。如何让患者更有效地注射此药物,同时避免药物的浪费,我们特设计并制作了重组人促卵泡激素预冲笔注射示意卡,经临床应用,效果显著,现报告如下。

重组人促卵泡激素研究进展

重组人促卵泡激素(rhFSH)是目前人类辅助生殖技术中常用的药物。由于糖基化作用的原因,原核表达系统难以生产出rhFSH。迄今为止,全球仅有两家公司的rhFSH药物上市。rhFSH高表达细胞株的构建、蛋白产量的提高以及糖基化的均一性是目前需要重点解决的问题。本文综述了rhFSH及其突变体的研发现状和未来的发展趋势,为后续的重组卵泡刺激素研究奠定基础。

不同剂量重组人促卵泡激素注射后针头皮下停留时间研究

目的观察重组人促卵泡激素注射液不同注射剂量、不同皮下停留时间与针头滴液的关系。方法将200例患者按医嘱注射剂量分为75U、150U、225U、300U四组,每组注射后分别停留10s、12s、15s、18s、20s,观察针头滴液情况并记录。结果相同注射剂量不同停留时间针头滴液阳性率比较,差异有统计学意义（均P〈0.01）;随着针头停留时间的增加,针头滴液率下降,但即使停留20s,不同剂量针头滴液率仍为8.0%-12.0%。结论结合临床工作实际,认为不同剂量重组人促卵泡激素注射液注射后针头停留〉20s为宜,以减少药液浪费。

重组人促卵泡激素联合地屈孕酮对多囊卵巢综合征不孕患者卵巢功能的影响

目的探究重组人促卵泡激素联合地屈孕酮对多囊卵巢综合征不孕患者卵巢功能的影响。方法选取2019年5月至2020年5月恩施土家族苗族自治州中心医院收治的106例多囊卵巢综合征患者作为研究对象,按照随机分组法分为地屈孕酮组(n=53)与联合治疗组(n=53)。地屈孕酮组采用地屈孕酮治疗,联合治疗组采用重组人促卵泡激素联合地屈孕酮治疗。对两组性激素、卵巢血流动力学指标,瘦素(LEP)、内脂素(VF)水平,腰臀比,卵巢体积、卵泡个数,治疗有效率及不良反应进行比较。结果治疗后,与地屈孕酮组比较,联合治疗组雌二醇(E2)、收缩期峰值流速(PSV)、搏动指数(PI)水平较高,黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、阻力指数(RI)、LEP、VF、腰臀比均较低(P<0.05)。与地屈孕酮组比较,联合治疗组治疗有效率较高(P<0.05)。结论地屈孕酮联合重组人促卵泡激素对多囊卵巢综合征不孕患者进行治疗,能够改善卵巢功能障碍,促进排卵,抑制糖脂代谢紊乱,改善卵泡发育障碍,具有一定临床应用价值。

重组人促卵泡激素与来曲唑联合治疗多囊卵巢综合征的效果

目的探讨注射用重组人促卵泡激素与来曲唑联合治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的效果。方法选取2016年3月至2017年10月河南(郑州)弘大心血管病医院收治的90例PCOS患者,按随机数表法分为对照组和观察组,各45例。对照组患者接受来曲唑治疗,观察组患者接受来曲唑联合注射用重组人促卵泡激素治疗。治疗3个月经周期,比较两组患者治疗效果。比较两组患者治疗前和治疗后血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E_2)水平。结果对照组和观察组患者治疗总有效率分别为75.56%(34/45)、93.33%(42/45)。观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者LH、FSH、E_2水平均低于治疗前,观察组患者LH、FSH、E_2水平均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论注射用重组人促卵泡激素与来曲唑联合治疗PCOS的效果显著,可改善患者血清性激素水平。

重组人促卵泡激素联合重组人促黄体激素与尿促性素在卵泡期长方案促排卵中的临床效果比较

目的比较重组人促卵泡激素联合重组人促黄体激素与尿促性素在卵泡期长方案促排卵中的临床效果。方法回顾性分析赣州市妇幼保健院2018年5月—2019年12月收治的140例接受试管受精(IVF)助孕的卵泡期长方案促排卵患者的临床资料,按照治疗方案不同分为A组(73例)与B组(67例)。A组采用重组人促黄体激素(rLH)联合重组人促卵泡激素,B组采用尿促性素联合重组人促卵泡激素,比较两组的临床观察指标、治疗结局、生理指标。结果两组患者的促性腺激素(Gn)总量、Gn使用天数、正常受精率、优质胚胎率、囊胚形成率、妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组患者治疗前的内膜厚度、雌二醇、孕酮和促黄体生成素(LH)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);两种治疗后的内膜厚度,雌二醇,LH水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后的内膜厚度、LH、孕酮、雌二醇水平高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于卵泡期长方案促排卵的患者,采用重组人促卵泡激素+重组人促黄体激素与重组人促卵泡激素+尿促性素均可有效助孕,具有临床应用价值。其中尿促性素便宜,且可减少重组人促卵泡激素的用量,能够减轻患者的经济负担,值得临床推广应用。