人内源性博尔纳样核蛋白-1的原核表达及纯化

目的原核表达人内源性博尔纳样核蛋白-1(endogenous Borna-like N element-1,EBLN-1),并进行纯化及鉴定。方法以人工合成的EBLN-1基因为模板,PCR扩增EBLN-1基因,克隆至载体pET-41a中,构建重组表达质粒pET-41aEBLN-1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)和Rosetta中,分别于18℃和37℃下进行IPTG诱导表达。采用包涵体稀释复性法对表达蛋白进行复性,经His亲和层析纯化后,SDS-GAGE和Western blot法鉴定纯化产物。结果重组表达质粒pET-41a-EBLN-1经菌落PCR及测序鉴定构建正确。重组表达蛋白相对分子质量约48 000,以包涵体形式表达。在大肠埃希菌Rosetta中37℃诱导时表达量最高,占菌体总蛋白的30%以上,纯化后蛋白纯度可达90%,可与HRP标记的His探针特异性结合。结论成功表达并纯化了重组EBLN-1蛋白,为后续深入研究EBLN-1在人体中的生理作用及其与精神疾病的相关性奠定了基础。

阿尔茨海默病患者脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L水平变化及意义

目的观察阿尔茨海默病(AD)患者α-突触核蛋白、β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)、总牛磺酸(T-tau)、磷酸化牛磺酸(P-tau)、轻链蛋白(NF-L)水平变化,并探讨其临床意义。方法 AD患者43例(AD组),血管性痴呆(VD)患者51例(VD组),健康体检者30例(对照组),检测各组脑脊液α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L,应用多因素分析联合5个指标区分AD和VD的灵敏度、特异度。结果与对照组比较,AD组脑脊液α-突触核蛋白、T-tau、P-tau、T-tau/P-tau、NF-L水平升高,Aβ1-42水平降低(P均<0.05);与对照组比较,VD组脑脊液α-突触核蛋白、T-tau、P-tau、T-tau/P-tau、NF-L水平升高(P均<0.05);与VD组比较,AD组脑脊液Aβ1-42、T-tau、T-tau/P-tau水平升高(P均<0.05)。联合5个指标区分AD和VD的灵敏度为93%、特异度为88%。结论α-突触核蛋白、Aβ1-42、T-tau、P-tau、NF-L在AD中表达升高或降低,联合检测五种指标有可能早期诊断AD及鉴别VD。

HO-1对SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白和PLK2表达影响

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白与Polo样激酶2(PLK2)水平的影响。方法采用Western blot方法,检测转染携带HO-1基因片段质粒48h后的SH-SY5Y细胞α-突触核蛋白的表达。给予不同浓度的HO-1激动剂钴原卟啉(CoPPIX)48h后,检测SH-SY5Y细胞PLK2的表达。结果高表达HO-1可降低细胞内α-突触核蛋白水平(t=2.672,P<0.05),10和25μmol/L的CoPPIX通过激活HO-1使PLK2表达上调(F=30.75,q=7.64、10.78,P<0.01)。结论 HO-1可使SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白表达下调,此过程可能与调控PLK2水平有关。

Caveolin-1与Ki-67在宫颈癌中的表达及与HPV16/18的相关性

目的:研究Caveolin-1和Ki-67在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样变(CIN)以及宫颈癌中的表达情况及其与人乳头状病毒(HPV)16/18感染的相关性,探讨上述指标作为宫颈癌诊治的一种新的有效指标的可行性。方法:采用免疫组化方法检测15例正常宫颈组织、35例CIN组织、50例宫颈癌组织中Caveolin-1、Ki-67及HPV16/18的表达情况。结果:Caveolin-1和Ki-67在宫颈癌组织中的阳性表达率与CIN、正常宫颈组织差异有统计学意义。在宫颈癌组织Caveolin-1的阳性表达率表现为高临床分期低于低临床分期,中、高分化程度高于低分化程度;而Ki-67的阳性表达率与之情况相反;此外,无淋巴结转移患者Caveolin-1的阳性表达率高于有转移患者。HPV16/18在宫颈癌组织中的阳性表达率高于正常宫颈和CIN组,但不同临床分期、病理分级、年龄和淋巴结有无转移差异无统计学意义。Caveolin-1与Ki-67在宫颈癌组织的异常表达与HPV16/18感染有关。结论:联合检测Caveolin-1、Ki-67和HPV16/18可作为筛查宫颈癌和判断预后的有利指标。

胰岛素样生长因子-1经鼻给药对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)经鼻靶向中枢给药对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠内源性神经干细胞(NSCs)的保护性治疗作用。方法取90只7日龄SD新生大鼠随机分为假手术组、模型对照组、IGF-1干预组。采用Rice法制作新生大鼠HIBD动物模型。模型对照组于缺氧缺血后1 h鼻腔递送9 g·L-1盐水0.1 mL;IGF-1干预组于缺氧缺血后1 h鼻腔递送IGF-1 2.5μg(溶于9 g·L-1盐水0.1 mL);假手术组仅分离颈总动脉,不结扎不行缺氧处理。术后1、3、5、7、14 d取其脑组织,采用单、双标免疫组织化学方法检测其侧脑室室管膜下区(SVZ)BrdU阳性细胞和巢蛋白(Nestin)阳性细胞、双阳性细胞的表达;并计算BrdU阳性细胞数、Nestin阳性细胞数及BrdU-Nestin双阳性细胞数;HE染色观察其脑损伤组织形态结构变化。结果模型对照组:术后1 d SVZ区BrdU、Nestin、BrdU-Nestin阳性细胞开始增加,第3天达高峰,术后7 d明显减少,术后14 d SVZ仅有少量细胞;IGF-1干预组:术后1 d SVZ 3种阳性细胞明显增多,术后3 d增加急剧,术后5 d达高峰,术后7 d开始减少,术后14 d减少明显,每个时间点IGF-1干预组均高于模型对照组(Pa<0.05);假手术组无明显增殖现象,与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论经鼻腔导入IGF-1对HIBD大鼠内源性NSCs具有明显的保护作用。

β淀粉样蛋白_(1-42)寡聚体和人重组α-突触核蛋白对原代培养神经元突触的影响

目的探讨α-突触核蛋白(α-Syn)和β淀粉样蛋白(Aβ1-42)寡聚体对小鼠原代皮质、海马神经细胞突触功能和活性的影响。方法分别采用二甲基亚砜、Aβ42-1寡聚体、α-Syn、Aβ1-42寡聚体、α-Syn+Aβ42-1寡聚体、α-Syn+Aβ1-42寡聚体干预小鼠原代皮质和海马神经元,按不同干预方法分为6组。干预24 h后用免疫荧光、FM1-43染色法检测神经元的突触数量及活性,同时用Western blot法检测半胱氨酸伸展蛋白α(CSPα)表达。结果与其余5组比较,α-Syn+Aβ1-42寡聚体组可使突触相关CSPα表达明显下降(P<0.01)、与突触数目相关的突触蛋白Ⅰ明显降低(P<0.01),同时突触活性也明显下降(P<0.01)。结论α-Syn和Aβ1-42寡聚体可协同作用于神经元,减少CSPα表达,降低细胞突触数目及其功能。

β淀粉样蛋白_(1-42)促进α-突触核蛋白在Ser129位点磷酸化和聚集

目的:通过转染人α-突触核蛋白(α-syn)A53T突变基因的PC12细胞(A53T-PC12细胞)模型,探讨β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)对A53T-PC12细胞在Ser29位点α-syn磷酸化(Pα-syn)水平、聚集程度的影响。方法:分别予H2O2、PBS、Aβ1-42干预A53T-PC12细胞(将A53T-PC12细胞分为:PBS干预组;5μmol.L-1Aβ1-42干预组;5μmol.L-1Aβ1-42+300μmol.L-1维生素C干预组;200μmol.L-1H2O2干预组),观察细胞内活性氧自由基(ROS)水平变化。并通过双重免疫荧光染色观察A53T-PC12细胞内α-syn聚集情况,并通过Western blot半定量分析A53T-PC12细胞内Ser129位点磷酸化Pα-syn水平。结果:Aβ1-42增加细胞内ROS。免疫荧光染色提示Aβ1-42干预后促进A53T-PC12细胞内α-syn聚集;Western blot半定量分析显示Pα-syn较PBS干预组升高(P<0.001,P<0.05)。结论:Aβ1-42促进A53T-PC12细胞内α-syn在Ser129位点磷酸化和聚集。

β淀粉样蛋白_(1-42)促进转染人α-突触核蛋白A53T突变基因的PC12细胞内α-突触核蛋白的表达

目的:探讨β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)促进转染人α-突触核蛋白(α-Syn)A53T突变基因的PC12细胞(A53T细胞)内α-Syn的表达及维生素C对A53T细胞保护作用的机制。方法:对高表达α-Syn的A53T细胞分别采用PBS、Aβ1-42和Aβ1-42+维生素C干预。用MTT法检测细胞活性和Western blot检测不同干预后A53T细胞α-Syn表达量。结果:①随着Aβ1-42浓度增加,细胞活性呈浓度依赖性降低;维生素C可减轻细胞损伤。②Western blot检测结果提示维生素C可减轻α-Syn的谱带密度;Aβ1-42干预后A53T细胞内α-Syn表达量相对值为(0.76±0.13),维生素C干预后α-Syn表达量相对值为(0.23±0.08),两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Aβ1-42可导致高表达α-Syn的A53T细胞损伤,并促进α-Syn的表达;维生素C可部分拮抗该效应,对神经细胞具有一定的保护作用。

血清CKLF1、TSPO、Apelin-13对重症颅脑损伤患者手术预后的预测价值

目的:探讨血清趋化素样因子-1(CKLF1)、转运蛋白(TSPO)、血管紧张素IⅡ受体样1内源性配体13(Apelin-13)对重症颅脑损伤(sTBI)患者手术预后的预测价值。方法:选取2020年1月一2023年1月我院收治的120例sTBI患者,均行外科开颅手术治疗,根据预后情况分为预后良好组(n=88)和预后不良组(n=32)。比较两组一般资料及血清CKLF1、TSPO、Apelin-13水平,分析血清CKLF1、TSPO、Apelin-13与格拉斯哥昏迷量表评分(GCS)的相关性,分析预后不良独立影响因素及预测价值。结果:两组GCS评分、急性生理学和慢性健康状况IⅡI(APACHEI)评分、颅内血肿量比较(P<0.05)。入院7d后,预后不良组血清CKLF1、TSPO水平高于预后良好组,Apelin-13水平低于预后良好组(P<0.05)。血清CKLF1、TSPO与GCS评分均呈正相关,Apelin-13与GCS评分呈负相关(P<0.05)。入院7d后,血清CKLF1(≥34.79pg/ml)、TSPO(≥5.26 ng/L)、Apelin-13(<23.26ng/L)水平是sTBI患者预后不良独立危险因素(P<0.05);血清CKLF1、TSPO、Apelin-13联合预测sTBI患者术后预后不良的AUC明显高于各单一指标(P<0.05)。结论:血清CKLF1、TSPO、Apelin-13水平与sTBI患者病情显著相关,还能影响预后,联合检测可作为临床早期预后的重要辅助途径。

血清α-syn、Aβ1-42、SSA在帕金森病患者中的表达及与认知功能损害的关系

目的:探讨血清α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid 1-42,Aβ1-42)、淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SSA)在帕金森病患者中的表达及与认知功能损害的关系。方法:收集本院2018年7月2020年11月收治的136例帕金森病患者为病例组,依据Hoehn-Yahr(H-Y)分级分为早期组(n=76)与中晚期组(n=60);依据蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment Scale,Mo CA)分为认知功能正常组(n=94)与认知功能损害组(n=42)。另选同期本院体检正常者105例纳入对照组。对比各组血清α-syn、SSA、Aβ1-42水平及Mo CA,并用Pearson相关系数分析病例组患者血清α-syn、SSA、Aβ1-42水平与Mo CA的相关性,用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清α-syn、SSA、Aβ1-42水平对帕金森病和认知功能损害的诊断价值。结果:病例组血清α-syn、SSA水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);病例组Aβ1-42、Mo CA评分低于对照组(P<0.05)。病例组晚期患者血清α-syn、SSA水平高于早期患者(P<0.05);病例组晚期患者Aβ1-42、Mo CA评分低于早期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。病例组有认知功能损害患者血清α-syn、SSA水平高于认知功能正常患者(P<0.05);病例组有认知功能损害患者Aβ1-42、Mo CA评分低于认知功能正常患者(P<0.05)。病例组患者血清α-syn、SSA与Mo CA均呈正相关(P<0.05),Aβ1-42与Mo CA呈正相关(P<0.05)。血清α-syn、SSA、Aβ1-42水平对帕金森病诊断的曲线下面积分别为0.858、0.821、0.785;血清α-syn、SSA、Aβ1-42水平对帕金森病认知功能损害预测的曲线下面积分别为0.877、0.825、0.783。结论:帕金森病患者血清α-syn、SSA、Aβ1-42水平较健康者变化明显,且可能和帕金森病的诊断、病情进展和认知功能损害有一定关系。

急性肾损伤相关新型生物标志物的研究进展

急性肾损伤(AKI)是严重的临床综合征,由肾灌注减少、肾小管毒性或阻塞性损伤、肾小管间质炎症和水肿或肾小球滤过能力降低引起。目前早期检测和准确诊断AKI的主要研究进展是新型生物标志物的应用,包括白细胞介素-18、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、中期因子、血幼素、肾损伤分子-1、神经轴突导向因子-1、内源性哇巴因和几丁质酶-3样蛋白-1。这些肾损伤标志物与AKI的发病机制密切相关,将在血清肌酐发生可检测变化之前迅速识别AKI,从而提供实施治疗干预的机会之窗。本文旨在综述近年来AKI有关的新型生物标志物的生物学功能、研究现状及应用前景。