人内皮生长抑素基因在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

目的 获得具有抑制血管内皮细胞生长活性的人重组内皮生长抑素 (endostatin)蛋白 ,以研究其在治疗肿瘤及血管性疾病中的潜在应用价值。方法 从人的胎盘中分离总RNA经反转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,得到en dostatin的全基因 ,并将其与质粒pUCm T重组 ,测序证明获及的人内皮生长抑素基因的序列与先前报道一致后 ,用限制性内切酶将其切下与表达载体pET 1 1a重组 ,转化受体菌BL 2 1 (DE3)中 ,用IPTG诱导以包涵体形式表达 ,经层析纯化 ,鸡绒毛尿囊膜血管 (CAM)检测活性。结果 经SDS PAGE检测 ,重组人内皮生长抑素蛋白的分子量为2 0KD ,表达量约占蛋白总量的 40 %。纯化后的内皮生长抑素对鸡的绒毛尿囊膜血管的生长有明显的抑制作用。结论 得到了具有生物活性的重组人内皮生长抑素蛋白 。