人凋亡相关半胱氨酸肽酶4基因在川崎病中的表达及与核转录因子-κB信号通路的相关性

目的探讨人凋亡相关半胱氨酸肽酶4基因（Caspase4，Casp4）在川崎病中的表达及与核转录因子-κB（nuclearfactor-kappaB，NF-κB）信号通路的相关性。方法收集上海市第六人民医院东院儿科2012年1月至2015年1月的15例川崎病患者血液样本然后提取单核细胞，采用mRNA定量检测血液中单核细胞Casp4及NF-κB信号通路相关因子表达情况，同时用酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）和免疫蛋白印迹方法检测Casp4蛋白及NF-κB信号通路相关因子表达情况，并对结果进行生物统计学的分析。结果mRNA定量、ELISA和及免疫蛋白印迹方法结果表明川崎病患儿血液CASP4基因表达与健康对照组相比显著升高，NF-κB信号通路相关因子表达也发生变化。数据分析证明川崎病患儿血液中NF-κBp65和Casp4基因mRNA表达情况存在线性关系。结论婴幼儿在受到环境因素和遗传因素影响后，NF-κB信号通路激活，NF-κB被释放进入细胞核内，引起Casp4基因变化，CASP4基因在川崎病中的高表达及与NF-κB信号通路相关。

瑞舒伐他汀抑制同型半胱氨酸诱导的内皮祖细胞凋亡涉及Nox4氧化应激途径

目的研究瑞舒伐他汀(Rosu)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的内皮祖细胞(EPCs)活性氧(ROS)产生以及凋亡的影响。方法从外周血中分离EPCs与Hcy共孵育,或经Rosu、不同的应激信号通路抑制剂甲羟戊酸(100μmol/L)、乙酰半胱氨酸(NAC,10μmol/L)、NADPH氧化酶(Nox)抑制剂(DPI,10μmol/L)、内皮一氧化氮合成酶抑制剂(LNMA,1 mmol/L)预培养后再加入Hcy共孵育。采用流式法检测细胞凋亡率,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐法(H2DCF-DA)检测细胞内ROS水平,光泽精化学发光法检测Nox活性,RT-PCR检测Nox4 mRNA的表达。结果 Rosu显著抑制了Hcy诱导的ROS蓄积和EPCs凋亡,拮抗了Hcy诱导的Nox激活以及Nox4 mRNA表达。Nox4 siRNA转染EPCs可以产生相似的效果。结论 Rosu对EPCs的保护作用可能是通过Nox4途径抑制Hcy诱导的Nox激活、ROS蓄积和EPCs凋亡来实现。

鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中细胞质凋亡抑制蛋白2和半胱氨酸蛋白水解酶4的表达

目的 通过检测细胞质凋亡抑制蛋白 2 (cytoplasmicInhibitorofapoptosisprotein 2 ,c IAP2 )和半胱氨酸蛋白水解酶 4 (caspase 4 )在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )组织中蛋白质水平的表达情况 ,研究其表达的相关性 ,探讨此 2种凋亡相关基因控制蛋白在鼻腔鼻窦鳞癌发生、发展中的作用和机制。方法 选取已确诊的 4 1例鼻腔鼻窦鳞癌患者的标本为实验组 ,10例正常鼻黏膜标本为对照组 ,以免疫组化法检测caspase 4和c IAP2在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达 ,光镜下计数。 结果①c IAP2在 4 1例鼻腔鼻窦鳞癌患者中 36例阳性表达 ,阳性率为 87 8% ,其中 14例表达 (+++) ,15例 (++) ,7例 (+) ,5例表达缺失 (- ) ,与对照组相比差异有显著性 (实验组平均秩 =2 9 11,秩和T1=1194 0 0 ,对照组平均秩 =13 2 0 ,秩和T2 =132 0 0 ,统计量Z =- 3 14 1,双侧渐近概率为0 0 0 17) ,且c IAP2的表达与临床分期无关 (P >0 0 5 ) ,与病理分期 (P <0 0 1)及临床预后 (P <0 0 1)有相关性 ;②caspase 4在 4 1例鼻腔鼻窦鳞癌患者中 17例表达缺失 (- ) ,13例低表达 (+) ,与对照组差异有显著性 (实验组平均秩 =2 3 76 ,秩和T1=974 0 0 ,对照组平均秩 =35 2 0 ,秩和T2 =35 2 0 0 ,统计量Z =- 2 2 6 7,双侧渐近概率为 0 0 2 77) ,?

脂肪酸结合蛋白4对高同型半胱氨酸血症小鼠足细胞凋亡的影响

目的脂肪酸结合蛋白4(FABP4)可能对足细胞凋亡有调控作用,但具体机制目前报道较少。文章旨在探讨FABP4在高同型半胱氨酸血症(HHcy)引起小鼠足细胞凋亡中的作用。方法实验采用9只野生型雄性C57BL/6J小鼠(Cbs^+/+)为对照组;9只以C57BL/6J背景的胱硫醚β合酶基因敲除杂合子(Cbs^+/-)雄性小鼠为模型组。两组同时给予含2%高蛋氨酸饲料,连续饲养8周,以复制HHcy模型,采用透射电镜观察两组小鼠肾小球足细胞超微结构。同时,体外培养肾小球足细胞,未干预组采用0μmol/L Hcy处理48 h,同型半胱氨酸组采用80μmol/L Hcy处理48 h,Ad-GFP组足细胞感染GFP荧光标签腺病毒,Ad-FABP4组足细胞感染FABP4腺病毒,Hcy+Ad-FABP4组足细胞感染FABP4腺病毒后处理同同型半胱氨酸组。通过qRT-PCR、Western blot检测FABP4在小鼠肾组织中的表达,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-12的变化,流式细胞仪技术分析细胞凋亡率。结果与对照组比较,模型组小鼠肾组织足细胞损伤程度加重、并发生细胞凋亡。同时,模型组中FABP4的mRNA表达量(3.20±0.42)和蛋白表达量(4.98±1.12)均较对照组(2.09±0.13、3.04±0.11)升高(P<0.05);同型半胱氨酸组中FABP4的mRNA表达量(5.34±0.28)和蛋白表达量(11.94±0.22)均较未干预组(4.00±0.17、5.10±0.20)升高(P<0.05)。感染FABP4腺病毒后,Ad-FABP4组FABP4的mRNA表达量(4.59±0.28)和蛋白表达量(10.07±0.82)均较Ad-GFP组(3.05±0.22、4.07±0.20)升高(P<0.05)。同型半胱氨酸组Bax/Bcl-2值(3.15±0.65)和Caspase-12蛋白表达量(4.30±0.89)较未干预组(2.19±0.10、3.06±0.07)升高(P<0.05);Hcy+Ad-FABP4组Bax/Bcl-2值(5.42±0.55)和Caspase-12蛋白表达量(7.87±1.27)均较Hcy+Ad-GFP组(3.19±0.47、4.34±0.64)升高(P<0.05)。流式细胞仪分析凋亡结果显示,同型半胱氨酸组总凋亡率为(10.85±1.25)与未干预组(3.77±0.12)比较升高(P<0.05);Hcy+Ad-FABP4组(15.72±1.60)较Hcy+Ad-GFP组(11.22±0.43)升高(P<0.05)。结论FABP4在HHcy引起的小鼠足细胞凋亡过程中起促进作用。

同型半胱氨酸在心肌细胞凋亡和增殖中的作用及其机制

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠心肌细胞凋亡、增殖的作用及其可能机制。方法将大鼠心肌细胞分为对照组与Hcy组(用终浓度为3 mmol/L的Hcy刺激24 h),采用Western blotting检测TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB),凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。将TLR4干扰片段转染心肌细胞,采用Western blotting检测TLR4表达情况,对干扰片段进行筛选和验证。将心肌细胞分为干扰片段空载体组(si-NC+Hcy组)与干扰TLR4组(si-TLR4+Hcy组),并加入3 mmol/L的Hcy干预24 h,采用Western blotting检测心肌细胞MyD88、NF-κB、p-NF-κB,凋亡相关蛋白Bax、cleavedcaspase-3及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,EdU染色观察心肌细胞增殖情况。结果Western blotting检测结果显示,与对照组比较,Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组TLR4、MyD88、p-NF-κB及凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3的表达水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率明显增高(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。EdU染色结果显示,与对照组比较,Hcy组EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01);与si-NC+Hcy组比较,si-TLR4+Hcy组EdU阳性细胞率明显增高(P<0.01)。结论Hcy可诱导大鼠心肌细胞凋亡,抑制心肌细胞增殖,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。

红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响

目的:观察红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响,并探讨可能机制。方法:取对数期T24细胞,随机分为对照组(常规培养)、红芪多糖组(加入红芪多糖0.8μg/L)、SP600125组(加入SP60012510μmol/L)、联合组(加入红芪多糖0.8μg/L、SP60012510μmol/L)。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;JC-1法检测细胞线粒体损伤;免疫印迹法检测细胞相关蛋白表达。结果:与对照组比较,红芪多糖组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量降低;凋亡率,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达量,p-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/JNK、p-c-Jun/c-Jun升高(均P<0.05)。SP600125组24、48、72 h吸光度值,线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低(均P<0.05)。与红芪多糖组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低(均P<0.05)。结论:红芪多糖可抑制膀胱癌T24细胞增殖,并通过介导线粒体途径促进其凋亡,作用机制可能与激活JNK/c-Jun信号通路有关。

X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。

N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用

目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h)、NAC组(5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养),采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化情况。结果:与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率(P<0.05),同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论:NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。

N-乙酰半胱氨酸对单侧肾积水大鼠造影剂肾损害的保护作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对单侧肾积水大鼠造影剂肾损害的保护作用。方法雄性SD大鼠64只,制备可复性完全性左侧输尿管梗阻动物模型,模型成熟后随机分为3组,NAC组,生理盐水(NS)组与模型对照组。3 d后NAC组和NS组大鼠注射造影剂,模型对照组注射等量生理盐水,注射药物1 d后,各组取半数大鼠处死取材检测肾脏形态学变化、血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾小管细胞凋亡率及肾组织Bcl-2 mRNA表达;剩余大鼠手术解除输尿管梗阻,3 w后处死,同样作上述项目检测。结果注射造影剂的NAC组和NS组用药后第1天,大鼠肾脏体积、肾实质厚度和重量差异显著(P<0.05),血清NGAL均较模型对照组显著升高(P<0.05),NAC组较NS组NGAL水平显著降低(P<0.05),三组左肾小管细胞凋亡率及Bcl-2 mRNA表达比较无显著性差异(P>0.05);解除梗阻后3 w,各组NGAL水平较前均无显著性变化(P>0.05);NAC组左肾小管细胞凋亡率及Bcl-2 mRNA表达均高于模型对照组,但低于NS组(P<0.05)。结论 NAC对单侧肾积水大鼠造影剂引起的肾损害的具有一定的保护作用,可能是通过上调Bcl-2 mRNA表达抑制肾小管细胞凋亡来实现的。

白藜芦醇通过减弱线粒体损伤对高同型半胱氨酸血症大鼠所致心脏损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠心肌细胞凋亡的逆转作用及相关分子机制。方法建立HHcy大鼠模型;超声心动图评估大鼠心功能;苏木素-伊红、Masson和TUNEL染色分析心肌细胞凋亡;TUNEL法检测细胞凋亡;Western印迹确定线粒体凋亡相关因子(NOX)4、细胞色素C和半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达;透射电镜观察心肌细胞线粒体形态;荧光显微镜观察细胞凋亡;Mitotracker和JC-1染色检测心肌细胞线粒体膜电位。结果HHcy大鼠心肌细胞线粒体NOX4表达升高,细胞色素C渗漏增多,Caspase-3表达显著升高,细胞凋亡数量增多。HHcy大鼠心肌细胞线粒体膜电位显著下降,线粒体结构和功能破坏。予以白藜芦醇可明显抑制高同型半胱氨酸对心肌细胞的促凋亡和线粒体损伤作用。结论白藜芦醇可通过抑制高同型半胱氨酸对心肌细胞的线粒体相关凋亡和线粒体损伤作用,起到心肌细胞保护作用。

宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体和相关细胞因子表达及临床意义

目的探究宫颈癌患者血清核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和相关细胞因子的表达水平及临床意义。方法选取2021年3月至2024年3月收治的宫颈癌患者78例作为癌变组,选取同期宫颈上皮内瘤变患者78例作为癌前病变组。比较2组血清NLRP3炎症小体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)]、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用Pearson相关性分析血清NLRP3、ASC、Caspase-1与IL-18、IL-1β的关系;分析宫颈癌患者相关细胞因子水平和临床病理特征之间的关系。结果癌变组血清IL-18、IL-1β、NLRP3、ASC、Caspase-1水平均高于癌前病变组(P<0.01);Pearson相关性分析结果显示,患者血清NLRP3、ASC、Caspase-1水平与IL-18和IL-1β水平均呈正相关(P<0.05,P<0.01)。宫颈癌患者肿瘤临床分期越高、分化程度越低,IL-18和IL-1β水平越高(P<0.01);有淋巴结转移和无淋巴结转移的宫颈癌患者IL-18和IL-1β水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清IL-18、IL-1β水平和血清NLRP3炎症小体均异常升高,且其水平变化与肿瘤恶性进展有关。

异土木香内酯对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察异土木香内酯对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法①取对数生长期T24细胞,分为1、2、3、4、5、6组,1~5组(实验组)分别加入5、10、20、40、80μmol/L的异土木香内酯,6组加入正常培养液(对照),分别于培养24、48、72 h时采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力。②T24细胞分成A、B、C、D、E组,A组加入不含异土木香内酯的培养液培养,B、E组先加入5 nmol/L的N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理培养2 h,C、D、E组分别加入10、20、20μmol/L的异土木香内酯,培养24 h时采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,DCFH-DA试剂盒检测细胞内活性氧簇(ROS),JC-1线粒体膜电位试剂盒检测细胞线粒体膜电位。③取T24细胞分为4组,每组6个复孔,其中3组分别加入10、20、40μmol/L异土木香内酯,另外一组加入不含异土木香内酯的培养液处理(对照组),培养24 h时Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞色素C(Cytochrome C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)。结果①与1组比较,2、3、4、5组细胞增殖抑制率升高(P均<0.05);与2组比较,3、4、5组细胞增殖抑制率升高(P均<0.05);与3组比较,4、5组细胞增殖抑制率升高(P均<0.05)。②与A组比较,C、D组细胞凋亡率、ROS含量升高(P均<0.05);与C组比较,D组细胞凋亡率、ROS含量升高(P均<0.05);与D组比较,E组细胞凋亡率、ROS含量降低(P均<0.05)。与A组比较,C组细胞线粒体膜电位降低(P均<0.05);与C组比较,D组细胞线粒体膜电位降低(P均<0.05);与D组比较,E组细胞线粒体膜电位升高(P均<0.05)。③与对照组比较,各浓度药物组中Bax、Cytochrome C及Caspase-3相对表达量升高,Bcl-2相对表达量降低(P均<0.05);随浓度升高,药物组Bax、Cytochrome C及Caspase-3相对表达量升高,Bcl-2相对表达量降低(P均<0.05)。结论异土木香内酯可抑制T24细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与异土木香内酯导致ROS含量升高、线粒体膜电位下降、调节相关凋亡蛋白的表达有关。

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞株CaSki增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响观察

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人宫颈癌细胞株CaSki增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法取对数生长期CaSki细胞分为实验组和对照组,实验组分别加入不同浓度(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L)的EGCG溶液和5%胎牛血清培养液,记为5 mg/L组、10 mg/L组、20 mg/L组、40 mg/L组;对照组加入等体积的5%胎牛血清完全培养液。各组继续培养48 h后,采用MTT法测算各组细胞增殖抑制率,使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用荧光实时定量PCR法检测各组细胞凋亡相关基因半胱天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、P53、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA。结果5 mg/L组、10 mg/L组、20 mg/L组、40 mg/L组、对照组细胞增殖抑制率分别为5.14%±0.54%、15.42%±1.22%、27.16%±2.11%、40.51%±1.57%、0,细胞凋亡率分别为1.95%±0.21%、5.39%±1.54%、15.14%±2.12%、27.46%±3.50%、0.74%±0.21%,组间相比,P均<0.05。实验组Caspase-3、P53、Bax mRNA相对表达量均升高,Bcl-2 mRNA相对表达量均降低,且呈一定的浓度依赖性。结论EGCG可抑制CaSki细胞增殖,促进其凋亡;EGCG促进CaSki细胞凋亡的作用可能与其上调凋亡相关基因Caspase-3、P53、Bax、下调凋亡相关基因Bcl-2表达有关。

凋亡相关蛋白的表达及Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

背景与目的:以顺铂为基础的化疗是卵巢癌治疗的重要组成部分,对顺铂的耐药是卵巢癌治疗失败的原因之一。本研究探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株中凋亡相关蛋白表达及caspase-3活性与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:采用Westernblot法分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中凋亡相关蛋白bcl-2、bcl-xL、bax、bcl-xS的表达,caspase-3活性和其底物多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的变化,并应用流式细胞仪检查不同浓度顺铂作用COC1和COC1/DDP细胞后的细胞凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,bcl-2和bcl-xL的表达明显高于COC1细胞,bax的表达无明显改变,bcl-xS在COC1和COC1/DDP细胞中均无表达。用顺铂处理后,COC1/DDP细胞中caspase-3活性、PARP裂解片段和凋亡率较COC1细胞均明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:人卵巢癌细胞对顺铂产生耐药可能与肿瘤细胞内凋亡抑制蛋白过度表达、caspase-3活性下降有关,而与凋亡诱导蛋白的表达无关。

CIK细胞对A549肺癌细胞株的诱导凋亡作用的研究

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对A549肺癌细胞株诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用末端脱氧核苷酸转移酶﹙TdT﹚介导的脱氧核苷酸缺口末端标志(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫组织化学染色法检测A549细胞中凋亡相关基因p53、Fas、caspase-3,caspase-8,caspase-9、survivin蛋白,细胞增殖相关蛋白Ki-67的阳性表达率。结果 (1)TUNEL法检测结果:效靶细胞混合培养后,起初随时间延长凋亡细胞逐渐增多,5-14小时凋亡率明显上升,14-24小时凋亡率下降;(2)免疫组织化学染色结果表明,CIK实验组p53、Ki-67、survivin蛋白随作用时间延长而均下降,Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达上调,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 (1)CIK细胞对A549肺癌细胞具有抗增殖及诱导凋亡作用;(2)CIK细胞对A549肺癌细胞的抗增殖作用机制可能与下调Ki-67蛋白的表达,使癌细胞处于静止期有关;(3)CIK细胞对A549肺癌细胞的诱导凋亡作用机制可能与下调p53、survivin蛋白的表达,上调Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达有关,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行;(4)CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外肺癌细胞的免疫活性细胞,有可能用于临床上晚期肺癌的过继性免疫治疗。

白头翁皂苷B4体外抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡

目的筛查中药白头翁抗肝癌有效成分,探索其抗癌机制。方法分离白头翁皂苷成分,以人肝癌细胞HepG2为作用靶细胞,MTT法测定其对细胞增殖的抑制,流式细胞术检测细胞周期阻滞,DNA片断化方法检测细胞凋亡情况,检测半胱氨酸蛋白酶3酶活性,从信号通路的角度探寻其诱导凋亡的机制。结果白头翁药材含量较高的成分白头翁皂苷B4对HepG2具有显著的抑制作用,最大抑制率达到71.5%;通过细胞周期分布分析,发现最多有83.2%的细胞被阻滞在G2期;用流式细胞仪研究其凋亡情况发现,在40 mg/mL药物浓度作用下,细胞凋亡与孵育时间呈现依赖关系,随着时间从0到48 h,初期凋亡比例从接近于零最高增长到14.3%,并且发生了DNA片段化;进一步研究发现,白头翁皂苷B4处理后的HepG2细胞半胱氨酸蛋白酶3活性显著升高。结论白头翁皂苷B4调控肝癌细胞周期,阻滞G2/M期更替,诱导细胞凋亡,是肝癌治疗的潜在候选分子,奠定了白头翁药材用于肝癌治疗的理论基础。

莲心碱促进膀胱癌5637细胞凋亡增强Caspase-7表达及活化

目的研究莲心碱(Liensinine)对膀胱癌细胞株5637凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法使用CCK-8法及克隆形成实验检测莲心碱对5637细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法测定莲心碱对5637细胞凋亡的影响;采用Western blot技术分析细胞凋亡相关基因Caspase-7表达状况。结果 CCK-8法及克隆形成实验结果均表明莲心碱对膀胱癌细胞5637增殖有明显的抑制作用,并呈剂量-效应关系。流式细胞术结果提示莲心碱可使膀胱癌5637细胞发生早期凋亡;Western blot检测结果显示莲心碱增强5637细胞Caspase-7表达并促进其活化。结论莲心碱可抑制5637细胞增殖,使其发生早期凋亡,其作用机制可能与促进Caspase-7表达及活化有关。

HIF-1α对脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及凋亡相关基因的研究进展

缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是一种在低氧条件下发挥作用的重要转录调节因子,HIF-1蛋白α亚基受细胞内氧分压的影响,常氧条件下HIF-1α被降解而表达很少,低氧条件下HIF-1α被激活而大量表达,通过调节其下游多种效应分子的转录和表达而发挥作用,HIF-1的生物学功能由HIF-1α决定。脑缺血再灌注时可导致脑组织缺血缺氧,诱导HIF-1α表达上调,有助于机体更好地耐受低氧环境而发挥脑保护作用。本文就HIF-1α对其重要靶基因Bcl-2、Bax及Caspase-3在脑缺血再灌注损伤中的表达和调节作用做一综述,为临床以HIF-1α基因作为靶点治疗脑缺血再灌注损伤提供参考。

补肾活血方对卵巢早衰模型大鼠性激素水平及颗粒细胞凋亡调控相关因子的影响

目的探讨补肾活血方对卵巢早衰大鼠性激素水平及颗粒细胞凋亡调控因子B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法将SD大鼠随机分为6组,包括空白组、模型组、生理盐水对照组(简称对照组)及补肾活血方中药低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组均用雷公藤多苷(终浓度50μg/g)连续灌胃14天建立卵巢早衰大鼠模型。其后各组给予相应干预。观察大鼠动情周期改变及大鼠卵巢组织形态学变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平;采用免疫组化方法检测颗粒细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。结果 1与空白组比较,模型组大鼠血清FSH水平明显升高(P<0.05),LH水平有一定程度升高,且E2水平有所降低,但LH及E2的改变差异不显著(P>0.05);中药各剂量组大鼠FSH水平较模型组显著降低(P<0.01);LH水平除中药高剂量组外,低、中剂量组明显低于模型组(P<0.01);补肾活血方组大鼠E2水平与模型组比较,除中剂量组外均有明显升高(P<0.01)。2免疫组化染色结果显示,模型组大鼠颗粒细胞Bax、Caspase-3蛋白表达较空白组明显上升(P<0.01),Bcl-2蛋白有所下降,但下降幅度不明显(P>0.05);中药各剂量组大鼠卵巢颗粒细胞Bax及caspase-3的表达均显著下降(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达仅略有增强(P>0.05)。结论雷公藤多苷可诱发大鼠卵巢颗粒细胞凋亡致卵巢早衰;补肾活血方能降低Bax及Caspase-3蛋白的表达,减轻颗粒细胞的凋亡,从而对雷公藤多苷所致卵巢早衰起到治疗作用。

糖尿病结肠动力障碍近端结肠平滑肌细胞相关凋亡基因表达的研究

目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍近端结肠平滑肌细胞的凋亡变化。方法:雄性SD大鼠36只随机分为正常对照6周组、正常对照10周组、DM6周组和DM10周组,每组9只。检测空腹血糖(FBG)、胃肠推进率、血清胰岛素(FINS),HE染色观察近端结肠平滑肌的变化,应用荧光实时定量PCR(Realtime-qPCR)检测大鼠近端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2及caspase-3的mRNA表达情况。结果:(1)DM组大鼠较同时间点正常对照组大鼠空腹血糖增高,胃肠推进率及血清胰岛素降低,近端结肠平滑肌变薄,bax及caspase-3的mRNA表达增强,bcl-2的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)DM10周组大鼠较DM6周组大鼠的空腹血糖增高,胃肠推进率及血清胰岛素降低,近端结肠平滑肌变薄,bax及caspase-3的mRNA表达增强,bcl-2的mRNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DM结肠动力障碍与近端结肠平滑肌细胞的凋亡密切相关,且细胞凋亡随病程发展而加重。