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人凋亡相关基因TFAR19缺失突变体的原核表达、产物纯化及鉴定
被引量:
10
1
作者
李现亭
莫晓宁
+4 位作者
夏东岚
刘雅楠
宋泉声
张颖妹
马大龙
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期411-415,共5页
构建TF 1细胞凋亡相关基因 19(TF 1cellapoptosisrelatedgene 19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体 ,获取缺失突变体蛋白 ,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究 .从真核表达载体pcDI TFAR19扩增出野生型TFAR19和 4个缺失突变体 ,重组到...
构建TF 1细胞凋亡相关基因 19(TF 1cellapoptosisrelatedgene 19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体 ,获取缺失突变体蛋白 ,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究 .从真核表达载体pcDI TFAR19扩增出野生型TFAR19和 4个缺失突变体 ,重组到原核表达载体pGEX 4T 2 .经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后 ,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化 .利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定 .用白血病细胞株HL 6 0检测蛋白活性 .成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体 pGEX 4T 2表达载体 ,对融合蛋白的表达条件进行了优化 .SDS PAGE结果显示 ,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达 .免疫学检测证实获得了正确的表达产物 .活性检测证实 ,野生型TFAR19和缺失突变体 4可以明显促进去血清诱导的HL 6 0细胞凋亡 ,第
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关键词
人凋亡相关基因
TFAR19缺失突变体
原核表达
产物纯化
鉴定
GST
下载PDF
职称材料
DESI2基因干扰联合PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响
2
作者
欧希
张光涛
+4 位作者
徐喆
陈景森
谢勇
刘吉奎
刘晓平
《肝胆胰外科杂志》
CAS
2019年第5期283-290,共8页
目的研究人凋亡相关新基因DESI2基因和PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响。方法构建DESI2慢病毒干扰载体,并将细胞分为四组:(1)溶剂对照组;(2)PI3K抑制剂组;(3)DESI2干扰+PI3K抑制剂组;(4)DESI2空载+PI3K抑制剂组。采用MTT检测细胞...
目的研究人凋亡相关新基因DESI2基因和PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响。方法构建DESI2慢病毒干扰载体,并将细胞分为四组:(1)溶剂对照组;(2)PI3K抑制剂组;(3)DESI2干扰+PI3K抑制剂组;(4)DESI2空载+PI3K抑制剂组。采用MTT检测细胞活性,流式检测细胞周期和调亡,Transwell检测细胞侵袭情况,qRT-PCR检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、PI3K和mTOR mRNA的表达,Western blotting检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。结果与溶剂对照组相比,PI3K抑制剂组和DESI2空载+PI3K抑制剂组细胞活性明显下降,G1期比例升高,S期和G2期比例降低,凋亡明显升高,细胞侵袭能力明显下降,DESI2和Caspase3的mRNA和蛋白水平表达明显升高,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显下降。与PI3K抑制剂组相比,DESI2干扰+PI3K抑制剂组细胞活性明显升高,G1期比例降低,S期比例升高,凋亡明显下降,细胞侵袭能力明显升高,DESI2和Caspase3 mRNA和蛋白水平表达明显下降,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显升高,研究数据组间比较均达到统计学显著水平(P<0.05)。结论 PI3K抑制剂通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,可以抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的增殖及侵袭,促进细胞调亡;PI3K/AKT/mTOR信号通路的功能状态能反馈调节上游DESI2基因的表达。
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关键词
人凋
亡
相关
新
基因
DESI2
人胰腺癌细胞
PI3K抑制剂
下载PDF
职称材料
题名
人凋亡相关基因TFAR19缺失突变体的原核表达、产物纯化及鉴定
被引量:
10
1
作者
李现亭
莫晓宁
夏东岚
刘雅楠
宋泉声
张颖妹
马大龙
机构
北京大学基础医学院免疫学系
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期411-415,共5页
基金
国家自然科学基金 (No.3 9870 42 7)资助项目
文摘
构建TF 1细胞凋亡相关基因 19(TF 1cellapoptosisrelatedgene 19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体 ,获取缺失突变体蛋白 ,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究 .从真核表达载体pcDI TFAR19扩增出野生型TFAR19和 4个缺失突变体 ,重组到原核表达载体pGEX 4T 2 .经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后 ,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化 .利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定 .用白血病细胞株HL 6 0检测蛋白活性 .成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体 pGEX 4T 2表达载体 ,对融合蛋白的表达条件进行了优化 .SDS PAGE结果显示 ,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达 .免疫学检测证实获得了正确的表达产物 .活性检测证实 ,野生型TFAR19和缺失突变体 4可以明显促进去血清诱导的HL 6 0细胞凋亡 ,第
关键词
人凋亡相关基因
TFAR19缺失突变体
原核表达
产物纯化
鉴定
GST
Keywords
TF 1 cell apoptosis related gene 19 ( TFAR 19), deletant, GST, purification
分类号
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
Q255 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
DESI2基因干扰联合PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响
2
作者
欧希
张光涛
徐喆
陈景森
谢勇
刘吉奎
刘晓平
机构
北京大学深圳医院肝胆胰外科
深圳市第三人民医院肝病三区
深圳市妇幼保健院乳腺科
出处
《肝胆胰外科杂志》
CAS
2019年第5期283-290,共8页
基金
深圳市科技计划项目(jcyj20160428164539088)
深圳市医疗卫生三名工程项目(szsm201612021)
+1 种基金
广东省科技发展专项基金项目(2017b090904010)
北京大学深圳医院科研基金资助课题(jcyj2018002)
文摘
目的研究人凋亡相关新基因DESI2基因和PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响。方法构建DESI2慢病毒干扰载体,并将细胞分为四组:(1)溶剂对照组;(2)PI3K抑制剂组;(3)DESI2干扰+PI3K抑制剂组;(4)DESI2空载+PI3K抑制剂组。采用MTT检测细胞活性,流式检测细胞周期和调亡,Transwell检测细胞侵袭情况,qRT-PCR检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、PI3K和mTOR mRNA的表达,Western blotting检测细胞DESI2、Caspase3、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白表达情况。结果与溶剂对照组相比,PI3K抑制剂组和DESI2空载+PI3K抑制剂组细胞活性明显下降,G1期比例升高,S期和G2期比例降低,凋亡明显升高,细胞侵袭能力明显下降,DESI2和Caspase3的mRNA和蛋白水平表达明显升高,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显下降。与PI3K抑制剂组相比,DESI2干扰+PI3K抑制剂组细胞活性明显升高,G1期比例降低,S期比例升高,凋亡明显下降,细胞侵袭能力明显升高,DESI2和Caspase3 mRNA和蛋白水平表达明显下降,AKT、PI3K和mTOR及其磷酸化的蛋白表达量明显升高,研究数据组间比较均达到统计学显著水平(P<0.05)。结论 PI3K抑制剂通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,可以抑制人胰腺癌细胞ASPC-1的增殖及侵袭,促进细胞调亡;PI3K/AKT/mTOR信号通路的功能状态能反馈调节上游DESI2基因的表达。
关键词
人凋
亡
相关
新
基因
DESI2
人胰腺癌细胞
PI3K抑制剂
Keywords
desumoylatingisopeptidase2 (DESI2) gene
human pancreatic cancer cells
PI3K inhibitors
分类号
R735.9 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人凋亡相关基因TFAR19缺失突变体的原核表达、产物纯化及鉴定
李现亭
莫晓宁
夏东岚
刘雅楠
宋泉声
张颖妹
马大龙
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
10
下载PDF
职称材料
2
DESI2基因干扰联合PI3K抑制剂对人胰腺癌细胞ASPC-1的影响
欧希
张光涛
徐喆
陈景森
谢勇
刘吉奎
刘晓平
《肝胆胰外科杂志》
CAS
2019
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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