前内皮素原mRNA在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达及作用

目的探讨前内皮素原mRNA(preproendothelin-1 mRNA,ppET-1mRNA)在新生鼠肺出血发生过程中肺组织中的表达。方法生后7～8d的Wister新生鼠,随机分为空气组(C)、低氧组(H)、低温缺氧组(HH)、低温缺氧后常氧复温组(HHR)、低温缺氧后高氧复温组(HHRO2)。C组置常温室内,H组置低氧箱内6h,吸入氧气浓度5%～6%,HH组同H组,并置于(10±1℃)冰箱内6h,HHR组低温缺氧过程同HH组,随后常氧下复温2h,HHRO2组同HHR组但复温时吸入气氧浓度>95%。各组取肺组织,观察肺大体,切片HE染色观察肺组织病理学改变,逆转录——聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中ppET-1mRNA表达。结果H组、HH组、HHR组和HHRO2组肺大体均呈现水肿,HH组、HHR组和HHRO2组可见点状、局灶性至弥漫性出血;光镜下组织学改变包括肺水肿(肺泡及间隔水肿)、肺泡扩大、间隔断裂、肺泡融合及出血,HHRO2组最严重;ppET-1mRNA在H组、HH组、HHRO2组表达量增高(分别为0.706±0.184、0.641±0.172、0.673±0.246),与C组(0.363±0.216)比较P均<0.01。结论在新生鼠肺出血发生过程中,肺组织中ppET-1mRNA呈高表达状态,在肺出血发生过程中起了重要的作用。

内皮细胞特异性表达血管内皮生长因子基因载体的构建及表达特性验证(英文)

目的构建在内皮细胞特异性表达人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的真核表达载体,验证HRE.ppET-1调控元件的内皮细胞表达特异性。方法用聚合酶链反应(PCR)方法直接合成缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE),人前内皮素原-1基因(human preproendothe-lin-1,ppET-1)启动子、VEGF元件,通过PCR、酶切、连接等一系列核酸分子操作,将各元件亚克隆至pcD-NA3.1载体上,最终组合而成真核表达载体pcDNA3.1-VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-ppET-1+VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-HRE+ppET-1+VEGF+Pa;脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性。结果各载体经酶切鉴定和测序证实。GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱。结论成功构建能在内皮细胞特异性表达人VEGF基因的真核表达载体;HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,为进一步利用VEGF进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定良好基础。

偏头痛与CGRP、5-HT、ET-1的研究进展

偏头痛是一种神经系统疾病,主要表现为与感觉改变有关的虚弱性头痛。迄今为止,已有的临床前和临床研究表明偏头痛与降钙素原基因相关肽(CGRP)、五羟色胺(5-HT)、内皮素-1(ET-1)关系密切。CGRP、5-HT、ET-1通过体内不同的受体或者在体内的浓度改变发挥其对中枢血管的调节作用,介导偏头痛的病理生理机制。CGRP通过神经血管途径产生强大的血管收缩作用;5-HT有可能因其在体内浓度的不同,对血管影响也随之改变;ET-1通过不同的受体,发挥其血管收缩作用。本文旨在探讨偏头痛与CGRP、5-HT、ET-1的直接和间接证据,阐述它们之间的相互作用关系。并对CGRP相关药物研究现状,临床治疗效果进行总结,以及曲普坦类药物治疗偏头痛的不足之处。特别是对刚通过美国FDA认证用于治疗偏头痛新药利米地坦进行详细报道,为偏头痛患者用药提供新的选择。

肝肺综合征大鼠肺组织内皮素-1及其受体基因的表达

目的探讨内皮素-1及其受体在大鼠肝肺综合征(HPS)发病机制中的作用。方法分别采用RT-PCR和原位杂交方法检测HPS大鼠肺组织内皮素前体原(ppET-1)mRNA水平及两种亚型内皮素-1(ET-1)受体ETRA和ETRB在HPS大鼠肺组织的分布和表达。结果HPS大鼠肺组织ppET-1mRNA表达显著升高(0.48±0.06),为假手术(Sham)组表达量(0.21±0.04)的2.3倍(t=2.4114,P<0.05)。HPS大鼠肺血管ETRA的分布及染色强度与Sham组比较无明显变化,染色面积和平均积分光密度值与Sham组比较差异无统计学意义(P>0.05),而ETRB在远端肺小动脉和小静脉内膜上表达明显增强,尤以静脉明显。ETRB染色面积和平均积分光密度值明显高于Sham组(P<0.001)。结论HPS大鼠肺组织ET-1基因表达水平升高。ET-1在HPS大鼠肺血管的总体反应可能由于ETRB表达的增高而表现为扩张。

HRE.ppET-1调控血管内皮生长因子基因在内皮细胞的靶向性表达

试图探讨缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)增强人前内皮素原-1基因(human preproendothelin-1,ppET-1)启动子在缺氧条件下靶向调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在内皮细胞中的表达,以提高基因治疗的效果.构建真核表达载体pEGFP-HRE.ppET-1,pcDNA3.1-VEGF+Pa(VA),pcDNA3.1-ppET-1+VEGF+Pa(PVA),pcDNA3.1-HRE.ppET-1+VEGF+Pa(HPVA),脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性.培养基中加入100μmol/L的氯化钴模拟细胞体外缺氧环境.载体转染后,RT-PCR和Western blot半定量分别检测各载体VEGFmRNA和蛋白水平在常氧及缺氧条件下的表达差异.应用Elisa定量检测细胞上清VEGF蛋白的表达量,分析各载体的表达水平.使用MTT实验检测细胞增殖率.GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱.RT-PCR,Western Blot及Elisa的检测结果均表明缺氧条件下HPVA组以及PVA组中,VEGF的表达均较常氧条件下增强(P<0.05).MTT实验检测显示HPVA转染的缺氧条件下的HUVEC增殖率超过其常氧未转染对照组.结果显示,HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,并能在缺氧条件下显著提高VEGF的表达,刺激内皮细胞的增殖,为进一步开展内皮细胞的靶向基因治疗研究奠定良好基础.

四逆散合金铃子散加减联合推拿治疗小儿肠系膜淋巴结炎的疗效研究

目的观察四逆散合金铃子散加减联合推拿治疗小儿肠系膜淋巴结炎的疗效。方法将2022年1月~2023年2月收治的符合要求的80例肠系膜淋巴结炎气滞血瘀证患儿随机分为对照组和观察组(每组40例)。对照组采用常规治疗,观察组在常规组基础上予四逆散合金铃子散加减联合推拿治疗。比较两组临床总有效率,治疗前、治疗后3、5、7和10 d腹痛程度评分,腹痛缓解、消失时间;根据超声检查结果比较两组治疗前后肠系膜淋巴结纵径、横径;比较两组治疗前后的中医证候评分,降钙素原(PCT)、降钙素基因相关肽(CGRP)和内皮素-1(ET-1)水平。结果治疗后,观察组临床疗效总有效率为90.00%,较对照组的72.50%高(P<0.05);治疗后3、5、7和10 d,观察组腹痛程度评分均低于对照组(P<0.05);治疗后,观察组腹痛缓解和消失时间均短于对照组(P<0.05);治疗后,两组肠系膜淋巴结的纵径、横径均较治疗前缩小(P<0.05),且观察组小于对照组(P<0.05);治疗后,两组中医证候评分均明显降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);治疗后两组PCT和ET-1水平明显降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05),治疗后两组CGRP水平明显升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05)。结论四逆散合金铃子散加减联合推拿治疗小儿肠系膜淋巴结炎气滞血瘀证患者,可显著减轻腹痛,缩小肠系膜淋巴结,减轻中医证候,并可改善生化指标水平,临床疗效优于单纯西医治疗。

慢性阻塞性肺疾病患者血浆血浆内皮素-1与炎性标记物的相关性研究

目的 通过观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）急性加重期患者治疗前后血浆内皮素-1（ET-1）等炎性因子的变化,探讨其临床意义及其相互关系.方法 用ELISA法测定30例COPD急性加重期患者治疗前后血浆ET-1、降钙素基因相关肽（CGRP）的水平,半定量免疫色谱法检测血清降钙素原（PCT）水平,免疫散射比浊法检测血浆C反应蛋白（CRP）水平,同时进行血气分析,并与我院同期30例健康体检者组成的对照组进行比较.结果 COPD急性加重期组和缓解期组ET-1、PCT、CRP水平均较对照组明显升高（P＜0.01）,血浆CGRP水平较对照组明显下降（P＜0.01）;COPD缓解期组ET-1、PCT、CRP水平较急性加重期组明显下降（P＜0.01）,CGRP水平较急性加重期组明显升高（P＜0.01）.直线相关分析显示,COPD急性加重期组ET-1、PCT、CRP三者之间呈显著正相关,且均与CGRP呈显著负相关;CGRP与PaO2呈显著正相关,ET-1、CRP、PCT均与PaO2呈显著负相关.结论 联合检测ET-1、CGRP、PCT、CRP有助于COPD患者病情监测和指导治疗.

血栓前状态分子标志物在高血压患者病变中的变化

目的:探讨血栓前状态分子标志物在高血压患者中的变化及意义;方法:选择新疆医科大学第一附属医院高血压科住院已确诊为高血压患者70例。用流式细胞术测定患者血小板表面CD41,CD62p;用放射免疫法检测血清ET-1;用ELISA方法检测血浆t-PA,PA全自动血凝分析仪检测凝血四项即血浆纤维蛋白原(FIB)水平、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT);结果:高血压组血小板表面CD62P的表达、血浆PAl-1、FIB三项指标均较正常组增高(P<0.05),而t-PA水平较正常组降低(P<0.05);高血压APTT、PT时间时间明显缩短(P<0.05);高血压组血小板表面CD41的表达,血清ET-1水平及TT时间与正常组比较无显著性差异(P>0.05);结论:检测血栓前状态分子标志在高血压患者中变化为临床早期发现、早期治疗血栓性疾病提供一种经济、方便、有效的实验室检查方法,指导临床采用合理的预防和治疗措施。

阿托伐他汀联合常规疗法用于糖尿病肾病患者的效果

目的:观察阿托伐他汀联合常规疗法用于糖尿病肾病患者的效果。方法:选取2019年6月至2021年6月114例糖尿病肾病患者进行前瞻性研究,按照随机数字表法分为观察组与对照组各57例。对照组给予常规疗法,观察组在对照组基础上给予阿托伐他汀钙片治疗,比较两组临床疗效、血浆微循环障碍指标[纤维蛋白原(FIB)、内皮素-1(ET-1)、血栓素(TXB2)]水平、血浆肾脏纤维化指标[层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)]水平和治疗期间不良反应发生率。结果:观察组治疗总有效率为78.95%,明显高于对照组的59.65%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组血浆FIB、ET-1、TXB2、LN、PCⅢ和CⅣ水平均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在常规疗法基础上采用阿托伐他汀治疗糖尿病肾病患者可提高治疗总有效率,降低微循环障碍指标和肾脏纤维化指标水平,效果优于单纯常规疗法。

慢性肺部疾病患儿肺灌洗液中生物标记物的研究

目的研究机械通气患儿肺灌洗液中生物标志物的变化,以探讨其在早期诊断早产儿慢性肺部疾病中的意义。方法将1999年12月至2004年8月在NICU行机械通气>5d的71例新生儿按原发疾病分为4组:肺炎组(21例)、肺透明膜病组(RDS组,16例)、慢性肺部疾病组(CLD组,19例)、对照组(15例)。所有患儿对肺灌洗液行细胞学检验;采用比色法检测灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量;采用放免法对灌洗液中TNF-α、IL-8、IL-1和IL-6及内皮素-1(ET-1)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)和羟脯氨酸(Hyp)含量进行检测。数据统计采用K-W检验。结果①生后4d内四组间各检测值比较差异无统计学意义,生后第5天差异有统计学意义。②生后第5天CLD组肺灌洗液中总蛋白(75.4g/L)及MDA(39.39nmol/ml)较非CLD组明显增加(P<0.05),SOD(8.03U/ml)及GSH(795mg/L)显著下降(P<0.05);③CLD组生后第5天肺灌洗液中的TNF-α(7.62fmol/ml)、IL-8(376.9mg/ml)、IL-1(2.09ng/ml)、IL-6(1.02ng/ml)、ET-1(2.66ng/ml)、PCⅢ(110.82μg/ml)、HA(258.65mg/ml)和Hyp(12.03ng/ml)均明显高于其他三组(P<0.05)。结论CLD的发生为一复杂过程,生后第5天肺灌洗液中各生物标志物水平对早期诊断早产儿慢性肺部疾病有重要意义。

生物标志物对心脏再同步治疗反应性的预测价值

目的评估生物标志物预测心脏再同步治疗(CRT)反应性的临床价值。方法前瞻性分析本院32例植入CRT起搏器和/或除颤器(CRTP/CRTD)的患者,采集基线和CRT术后6个月的纽约心功能分级、心脏超声指标以及血清生物标志物水平,后者包括:氨基末端B型脑钠肽前体(NT-ProBNP)、中段心房利钠肽原(MR-proANP)、中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)、内皮素-1(ET-1)以及和肽素(CPP)。以CRT术后半年心功能降低1级同时左室射血分数(LVEF)绝对值增加≥5%定义为有反应。比较CRT有反应组及无反应组各项生物标志物血清水平的变化及差异。结果随访[12±6(6~24)]个月,CRT有反应20例(62.5%),术前MR-proANP水平有反应组显著低于无反应组[(142.7±94.0)pmol/L vs(250.7±150.8)pmol/L,P=0.03],其它生物标志物基线水平在两组之间无明显差异。CRT反应组术后6个月MR-proANP及NT-ProBNP血清水平较术前显著下降,而无反应组无差异。其他指标则在有反应及无反应组均无明显变化。结论基线MR-proANP血清水平可以预测CRT反应,CRT术后6个月MR-proANP与NT-ProBNP的变化有助于预测和判断CRT的反应性。