氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的表达明显下降且随浓度增加而下降,8μmol/L组下降最明显。氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1蛋白表达水平较对照组降低,4μmol/L组降低最为显著(P<0.05)。结论氧化苦参碱抑制前列腺癌PC-3细胞增殖活力,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡并在细胞增殖周期G1期中阻滞,其中的作用机制可能与CDK4/cyclinD1通路密切相关。

前列腺癌“劫持”肿瘤相关成纤维细胞通过外泌体MALAT1调控糖代谢重编程的机制研究

目的:阐明外泌体转移性肺腺癌相关转录因子1(MALAT1)介导的前列腺癌(PCa)细胞与癌相关成纤维细胞(CAFs)间相互作用,探究CAFs来源的外泌体MALAT1在PCa糖代谢重编程中的作用及其机制。方法:分析肿瘤基因组图谱(TCGA)资料,探讨MALAT1在多种肿瘤中的表达模式,尤其是其与PCa的临床关联性。运用单细胞RNA测序(scRNA-seq)及相关技术,研究MALAT1在介导PCa细胞与CAFs之间相互作用的机制。过表达CAFs细胞中的MALAT1,提取上清外泌体,并与PCa细胞共培养,通过RNA纯化的染色质分离—质谱(ChIRP-MS)等方法,研究外泌体MALAT1在PCa进展中的功能及作用机制。结果:利用TCGA数据集进行分析,观察到MALAT1与前列腺腺癌、乳腺浸润癌、胆管癌等多种肿瘤恶性程度相关,且与PCa不良预后相关。scRNA-seq分析显示,PCa肿瘤微环境细胞中的CAFs不仅存在PCa分子标记物KLK3,而且MALAT1在CAFs中的表达显著高于PCa细胞,提示PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs中MALAT1促进PCa进展。进一步地,共培养和ChIRP-MS实验发现外泌体MALAT1通过与PCa糖代谢关键酶的直接结合调控PCa的能量代谢。ChIRP-MS和RNAseq联合分析发现外泌体MALAT1能够与4个糖酵解关键基因(GPI、ALDOC、PGK1、ALDOA)直接结合,从而调控PCa细胞的糖代谢重编程。结论:PCa细胞能够“驯化”CAFs,并通过CAFs释放外泌体MALAT1直接作用于PCa糖酵解关键分子,从而调控糖代谢重编程加速PCa发展。

染料木黄酮对去势抵抗前列腺癌22RV1细胞增殖的影响

目的:探讨大豆异黄酮对去势抵抗前列腺癌细胞增殖的抑制作用及可能机制。方法:以不同浓度[0.0、12.5、25.0、50.0、100.0和(或)200.0μmol/L]的染料木黄酮处理去势抵抗前列腺癌细胞22RV1,在24、48、72 h采用CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,免疫细胞化学法检测Ki-67表达水平,Western blot法检测PSA、P53、CyclinD1、PCNA及AR表达水平。结果:染料木黄酮对22RV1细胞具有抑制作用。流式细胞术结果显示,染料木黄酮阻滞细胞周期于G2/M期(P<0.05)。免疫细胞化学法检测结果显示,染料木黄酮能够抑制细胞中Ki-67的表达(P<0.05)。Western blot结果显示染料木黄酮处理后细胞中CyclinD1、PCNA、PSA、AR的表达下降,P53的表达上调(P<0.05)。结论:染料木黄酮能够抑制22RV1细胞的增殖,其作用机制可能与阻滞细胞G2/M期及下调周期蛋白CyclinD1表达有关。

白藜芦醇对去势抵抗型前列腺癌22RV1细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对去势抵抗型前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)22RV1细胞增殖与凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:用不同浓度Res作用于22RV1细胞24h后,在光学显微镜下观察细胞形态学变化。CCK-8法检测Res对细胞增殖的影响。应用Annexin-V/PI双标记法染色后,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。用活性氧特异性试剂盒检测活性氧含量。Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:与对照组比较,Res可使22RV1细胞形态出现皱缩,变圆,细胞间隙增大,贴壁细胞减少,凋亡细胞增多。CCK-8结果示Res可抑制22RV1细胞增殖作用(P<0.05)。流式检测结果示Res可诱导22RV1细胞凋亡(P<0.01)。活性氧检测结果示Res可增加2 2 RV1细胞内活性氧含量(P<0.01),并呈剂量相关性。Western blot检测发现随Res浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达增加。结论:Res能够抑制22RV1细胞的增殖并诱导其凋亡。Res诱导22RV1细胞凋亡的机制可能与Res增加22RV1细胞内活性氧水平,激活促凋亡因子Bax,并抑制抗凋亡因子Bcl-2的活性,继而引发后续凋亡反应。

锌对前列腺癌22RV1细胞的增殖及ZIP4mRNA表达的影响

目的探讨锌对前列腺癌22RV1细胞的增殖及对ZIP4 mRNA表达的影响。方法采用倒置相差显微镜观察并采用MTT法检测不同浓度锌(0.5、5、50、100μmol/L)对前列腺癌22RV1细胞的形态及增殖活性的影响,实时定量RT-PCR法检测不同浓度锌在不同时间点对ZIP4 mRNA表达的影响。结果在锌浓度为0.5μmol/L时,细胞皱缩,形态发生明显变化,增殖活性下降,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01),其余3组未见明显变化(P>0.05)。随着锌作用时间的延长,ZIP4mRNA表达量下降,36 h达最低值之后保持恒定;当锌浓度为0.5μmol/L时,ZIP4 mRNA的表达量变化与对照组相比无统计学差异(P>0.05),其余各浓度组变化均有统计学差异(P<0.01)。结论锌在一定浓度水平上可以抑制前列腺癌22RV1细胞的增殖活性,且对ZIP4 mRNA的表达具有时间和剂量依赖性。

scytonemin对前列腺癌细胞系22RV1的增殖及PLK1活性的影响

目的探讨scytonemin对前列腺癌细胞系22RV1的增殖及PLK1蛋白活性的影响。方法使用MTT法检测不同浓度scytonemin(终浓度分别为1、2、3、4μmol/L)对前列腺癌细胞系22RV1形态及增殖活性的影响,应用激酶活性测定法检测不同浓度scytonemin对PLK1活性的影响。结果随着scytonemin作用浓度的增加,细胞增殖能力逐渐下降,同时PLK1蛋白活性下降,与对照组相比,scytonemin浓度为3μmol/L和4μmol/L时,差异具有统计学意义(P<0.01),其余各浓度组则差异均无统计学意义。结论 scytonemin达到一定浓度后,可以抑制前列腺癌细胞系22RV1的增殖活性及PLK1活性。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控前列腺癌22RV1细胞雄激素受体及Akt磷酸化

目的:探索哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTORC1和mTORC2在前列腺癌22RV1细胞增殖及凋亡中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞增殖改变;流式细胞术(FCM)检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞凋亡;Western印迹检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞雄激素受体(AR)和Akt磷酸化表达。结果:MTT显示mTORC1沉默后,前列腺癌22RV1细胞的生长率无明显变化(P>0.05),而mTORC2沉默后,细胞的增殖受到了显著抑制(P<0.01);FCM显示mTORC1沉默后,细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),而mTORC2沉默后,细胞的凋亡率无明显变化(P>0.05);Western印迹检测显示mTORC1沉默后,前列腺癌22RV1细胞中AR和Akt磷酸化表达显著增加(P<0.05),而mTORC2沉默后则显著抑制了前列腺癌22RV1细胞中AR和Akt磷酸化表达(P<0.05)。结论:mTORC2对于前列腺癌22RV1细胞的存活是必需的,mTORC2有可能成为治疗前列腺癌的一个有意义的靶点。

lncRNA RPL22P1-201通过调控miR-216b-5p表达影响前列腺癌细胞增殖、细胞周期和多西紫杉醇的敏感性

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)RPL22P1-201通过介导miR-216b-5p表达对前列腺癌细胞增殖、细胞周期以及多西紫杉醇敏感性的作用机制。方法:基于Cancer LncRNA Census数据库分析前列腺癌组织和正常组织中RPL22P1-201的表达差异。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测前列腺癌细胞株(DU-145、C4-2B、PC3、22Rv1、LNCaP)和正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中RPL22P1-201表达水平。将PC3细胞分为si-RPL22P1-201组(转染RPL22P1-201干扰序列)和si-NC组(转染si-NC序列),集落形成实验检测PC3细胞增殖能力,流式细胞术检测PC3细胞周期,CCK-8法检测多西紫杉醇处理后各组PC3细胞的增殖情况,双荧光素酶报告基因实验验证RPL22P1-201与靶基因的结合,qRT-PCR检测miR-216b-5p表达水平,Western印迹检测TrkB、CDK4、cyclin D2、cyclin D3、CDK6蛋白表达水平。结果:前列腺癌组织中RPL22P1-201表达水平高于正常组织(P<0.01),前列腺癌细胞株中RPL22P1-201表达水平高于正常前列腺上皮细胞(P<0.01),si-NC组和si-RPL22P1-201组集落数量分别为(256.1±28.79)个和(78.77±14.52)个,差异有统计学意义(P<0.01)。si-NC组和si-RPL22P1-201组G0/G1细胞率分别为(43.18±4.56)%和(68.85±3.40)%,S细胞率分别为(36.84±2.28)%和(24.27±2.74)%,G2/M细胞率分别为(19.98±2.69)%和(6.88±1.57)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-RPL22P1-201组在多西紫杉醇作用下的细胞存活率均低于si-NC组(均P<0.05),RPL22P1-201能够与miR-216b-5p配对结合(P<0.01)。相比si-NC组,si-RPL22P1-201组PC3细胞中miR-216b-5p表达降低(P<0.01),TrkB、CDK4、cyclin D2、cyclin D3、CDK6蛋白表达均降低。结论:RPL22P1-201在前列腺癌中高表达,沉默RPL22P1-201通过升高miR-216b-5p表达抑制前列腺癌PC3细胞增殖和细胞周期,并增强PC3细胞对多西紫杉醇的敏感性。

沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞疫苗治疗前列腺癌的实验研究

目的研究沉默细胞因子信号抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)基因联合rAAV/PSA基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)对前列腺癌LNCaP细胞的体外杀伤效应。方法应用重组腺相关病毒(rAAV)介导的RNA干扰技术沉默人DC的SOCS1基因的表达,行Western blot检测基因沉默效果。rAAV-shRNA-SOCS1和rAAV/PSA感染DC,将DC细胞分为Control-DC组、rAAV/PSA-DC组、SOCS1(-)+rAAV/PSA-DC组。采用系列细胞因子诱导DC成熟,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。流式细胞术检测分析各组DC细胞表型及CTL细胞的免疫表型;ELISA法检测各组DC细胞培养上清中细胞因子白介素-10(IL-10)及IL-12 p70的分泌水平,各组CTL细胞释放γ-干扰素(IFN-γ)的水平;LDH法检测各组CTL细胞对前列腺癌LNCaP靶细胞的杀伤效率。结果rAAV-shRNA-SOCS1感染DC后,可有效下调DC的SOCS1表达水平。与对照组比较,沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC细胞培养上清中细胞因子IL-12 p70的分泌水平显著增高,IL-10的分泌水平明显下降(P<0.05);该组DC表面分子CD80、CD83和CD86的表达明显上调(P<0.05)。该组DC诱导的CTL中CD8^(+)、CD8^(+)CD69^(+)T细胞的比例明显增高,而CD4^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞的比例显著降低(P<0.05),IFN-γ的释放水平明显增高(P<0.05),对PSA阳性的前列腺癌靶细胞LNCaP具有更强的杀伤活性(P<0.05),且具有抗原特异性。结论沉默SOCS1联合rAAV/PSA基因修饰的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗前列腺癌免疫效应。

比卡鲁胺抑制CWR22Rv1细胞移植裸鼠前列腺癌的机制研究

目的:探讨比卡鲁胺抗CWR22Rv1细胞移植裸鼠前列腺癌的作用机制。方法:采用瘤块接种的方法制作裸小鼠前列腺癌模型,观察比卡鲁胺治疗后的移植瘤重量和体积,并计算抑瘤率,收集移植瘤标本,使用光镜观察法、免疫组化法、基因芯片法和实时定量RT-PCR法比较比卡鲁胺组和阴性对照组肿瘤相关指标的差异。结果:①比卡鲁胺低、中、高剂量组抑瘤率分别为10.77%、37.32%和63.28%(P<0.01)。②光镜观察:对照组肿瘤内癌细胞生长旺盛,移植癌细胞保持原有异型性。而比卡鲁胺低、中和高剂量组呈腺癌典型表现,癌细胞出现不同程度的退变。③免疫组化:低、中、高剂量组增殖细胞核抗原增殖指数同阴性对照组相比明显减小(P<0.01)。对照组每200个细胞中平均有180±8个细胞雄激素受体(androgen receptor,AR)呈阳性表达,而高剂量组中AR阳性细胞数较对照组明显减少(P<0.01)。④基因芯片:高剂量组在前列腺癌相关基因表达丰度上明显低于对照组,主要为AR和关联蛋白、细胞黏附分子和细胞周期相关基因,并且实时定量RT-PCR结果与基因芯片结果基本一致。结论:比卡鲁胺抗22Rv1细胞移植裸鼠前列腺癌效果显著,主要通过降低细胞核AR表达、减少细胞黏附、调控细胞周期和抑制细胞增殖等发挥作用。

雷帕霉素对前列腺癌细胞株22RV1增殖及S6K1活性的影响

目的:探讨雷帕霉素对前列腺癌细胞22RV1增殖及对S6 Kinase 1(S6K1)活性的影响。方法:用不同浓度(0、50、100、200、400 nmol/L)雷帕霉素作用于体外培养的前列腺癌细胞22RV1,MTT法检测细胞生长抑制率;应用液闪激酶活性测定法检测不同浓度雷帕霉素对S6K1活性的影响。结果:雷帕霉素能显著抑制22RV1细胞的生长,呈现明显的量-效关系,随着雷帕霉素剂量的增加,细胞生长抑制率逐渐升高,400 nmol/L的雷帕霉素对22RV1细胞的抑制率最高(P<0.01);同时雷帕霉素还能使S6K1蛋白活性下降,随剂量增高降低越明显,400 nmol/L的雷帕霉素使S6K1蛋白活性下降最明显(P<0.01)。结论:雷帕霉素可通过调控mammal Target ofrapamycin(mTOR)下游蛋白S6K1表达来有效地抑制前列腺癌细胞22RV1的增殖。

IL-22/IL-22RA1通路在口腔鳞状细胞癌恶性进展中的作用及其机制

目的:探讨IL-22/IL-22受体A1(IL-22RA1)通路在口腔鳞状细胞癌(OSCC)恶性进展中的作用及其机制。方法:利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平,采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系,通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达,用q PCR法验证敲减效率。采用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照(si NC)组和IL-22RA1敲减(siIL-22RA1)组OSCC细胞克隆形成及迁移能力的影响,WB法检测IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果:OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)及预后不良(P<0.05)有关联。OSCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联,IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响(均P>0.05)。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力(均P<0.01),并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2信号分子;敲减OSCC细胞的IL-22RA1后,IL-22则无法发挥上述作用。结论:IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移,其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。

植物性功能食品原料在前列腺癌细胞22RV1中的雄激素效应及其机制研究

目的 :研究植物性功能食品原料(当归、甘草、布渣叶)是否具有类雄激素效应,并初步探讨其机制。方法 :采用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt(MTS)法检测植物性功能食品原料提取物对雄激素受体阳性前列腺癌细胞22RV1增殖的影响;采用real-time PCR法检测提取物对雄激素受体转录活性的影响。结果:布渣叶提取物与对照组相比,能够促进22RV1细胞的增殖,并且能够诱导雄激素受体靶基因PSA的表达,当加入雄激素受体抑制剂后,细胞活性和PSA水平均明显下降,当归和甘草提取物与对照相比并没有明显改变;ERK1/2的抑制剂U0126也可抑制布渣叶提取物介导的细胞增殖和PSA的表达。结论:在当归、甘草、布渣叶3种植物提取物中,布渣叶具有雄激素效应,并且这种效应依赖雄激素受体途径;ERK1/2信号通路参与了布渣叶提取物介导的雄激素效应。

莪术醇通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达抑制前列腺癌细胞增殖及转移

目的:探讨莪术醇对前列腺癌细胞增殖及转移的影响及其可能作用机制。方法:不同浓度的莪术醇处理人前列腺癌细胞LNCap,采用脂质体转染法将si-NC、si-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞,将pcDNA、pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1分别转染至LNCap细胞后加入100μg/ml莪术醇处理;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;qRT-PCR检测lncRNA NR2F1-AS1、miR-145-5p表达量;双荧光素酶报告实验验证lncRNA NR2F1-AS1与miR-145-5p的靶向关系。结果:莪术醇可降低细胞存活率,并可降低lncRNA NR2F1-AS1表达量,克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),而miR-145-5p表达量升高(P<0.05);lncRNA NR2F1-AS1可靶向调控miR-145-5p的表达(P<0.05);转染si-lncRNA NR2F1-AS1后细胞存活率降低(P<0.05),miR-145-5p表达量升高(P<0.05),克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);转染pcDNA-lncRNA NR2F1-AS1可降低莪术醇对LNCap细胞增殖及转移的作用。结论:莪术醇可通过调节lncRNA NR2F1-AS1/miR-145-5p表达,抑制前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

tRNA甲基转移酶1在前列腺癌组织中的表达及其与免疫细胞浸润的相关性

目的:利用多种生物信息数据库和免疫组化分析tRNA甲基转移酶1(tRNA methyltransferase 1,TRMT1)在前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中的表达及其与免疫细胞浸润的相关性。方法:利用UALCAN数据库分析TRMT1 mRNA在PCa组织和正常前列腺组织中的表达差异;收集2019年01月至2021年06月在我院泌尿外科行手术治疗的52例PCa患者和20例前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)患者的组织石蜡切片,使用免疫组化的方法分析TRMT1蛋白在PCa和BPH组织中的表达差异;结合免疫组化结果和临床病理资料,分析TRMT1蛋白的表达与PCa患者临床病理特征的相关性;利用LinkedOmics数据库检索与TRMT1相关的共表达基因,并使用Metascape数据库进行富集分析;利用String数据库构建TRMT1蛋白互作网络;利用TIMER2.0数据库分析TRMT1的表达与免疫细胞浸润的相关性;利用GEPIA数据库分析TRMT1的表达与PCa患者预后的相关性。结果:与正常前列腺组织相比,TRMT1 mRNA在PCa组织中的表达显著增加(P<0.05)。免疫组化结果显示,TRMT1蛋白在PCa组织中的表达显著高于BPH组织(P<0.05)。TRMT1的表达与PCa患者的Gleason评分有关(P<0.05),而与年龄、术前PSA水平和TNM分期无关(P>0.05)。富集分析结果显示,TRMT1相关基因主要与RNA代谢和RNA加工修饰等相关。TRMT1的表达与CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、B细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和骨髓树突状细胞的免疫细胞浸润水平呈负相关。在PCa患者中,TRMT1高表达组的总生存期(overall survival,OS)和无病生存期(disease free survival,DFS)要明显低于TRMT1低表达组(P<0.05)。结论:TRMT1在PCa中高表达,参与调节免疫细胞浸润,与PCa患者的不良预后相关,可能成为PCa诊断、治疗及判断预后的新的生物标志物。

lncRNA OSTN-AS1下调miR-4461表达促进前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)OSTN反义RNA1(OSTN antisense RNA1,OSTN-AS1)对前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制.方法以前列腺上皮细胞RWPE-1为对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测LNCaP细胞中OSTN-AS1、miR-4461表达.转染OSTN-AS1小干扰RNA(si-OSTN-AS1)或miR-4461模拟物、或共转染si-OSTN-AS1与miR-4461抑制剂至LNCaP细胞,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白[Ki-67、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9]表达.双荧光素酶报告基因实验验证OSTN-AS1与miR-4461的调控关系.结果LNCaP细胞中OSTN-AS1表达量较RWPE-1细胞升高(3.38±0.26 vs.1.00±0.00,P<0.05),miR-4461表达量较RWPE-1细胞降低(0.46±0.04 vs.1.00±0.00,P<0.05).干扰OSTN-AS1或过表达miR-4461后,LNCaP细胞增殖活性、划痕愈合率、侵袭数降低,同时细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达量也降低(P_(均)<0.05).OSTN-AS1靶向结合miR-4461,且干扰OSTN-AS1表达的LNCaP细胞中miR-4461表达量增加(P<0.05).下调miR-4461逆转了干扰OSTN-AS1对LNCaP细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白表达的影响.结论干扰OSTN-AS1可通过靶向上调miR-4461抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖、迁移和侵袭.

基于AEP/PI3K/AKT信号通路探讨温肾散结方对人前列腺癌细胞的调控作用和分子机制

目的:基于天冬酰胺内肽酶(AEP)/磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT),探讨温肾散结方(WSSJ方)对人前列腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法:制备WSSJ方冻干粉;体外培养人前列腺癌PC3、DU145和22RV1细胞,CCK-8法检测WSSJ方对前列腺癌细胞相对活力的影响并测定最佳给药浓度;集落形成实验检测WSSJ方对单细胞增殖能力的影响;划痕实验检测WSSJ方对前列腺癌细胞迁移能力的影响;RT-qPCR检测细胞内AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达;Western blotting检测细胞内AEP、PI3K及AKT蛋白表达。结果:WSSJ方组前列腺癌细胞增殖活力随给药浓度升高逐渐降低;WSSJ方组细胞计数与细胞融合情况均低于对照组;WSSJ方低、中、高剂量组细胞集落形成数量均少于对照组;WSSJ方组细胞迁移率显著低于对照组(P<0.01);WSSJ方组PC3细胞AKT蛋白相对表达量低于对照组,DU145细胞、22RV1细胞AEP、PI3K蛋白相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);WSSJ方组PC3细胞、DU145细胞、22RV1细胞AEP mRNA、PI3K mRNA及AKT mRNA表达均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:WSSJ方能有效抑制人前列腺癌细胞的增殖和迁移能力,并且其对肿瘤细胞的抑制呈现剂量依赖性,作用机制可能与下调AEP抑制PI3K/AKT信号通路有关。

稳定沉默Rictor表达的前列腺癌CWR22RV1的构建

目的应用RNA沉默技术下调前列腺癌CWR22RV1细胞株的Rictor基因表达,并筛选具有稳定转染Rictor-shRNA的细胞株,为进一步研究Rictor在前列腺癌中的作用打下基础。方法针对Rictor基因设计合成siRNA序列;鉴定、测序并转染293T细胞观察基因表达情况;构建Rictor-shRNA慢病毒载体;进行Rictor-shRNA慢病毒包装及滴度测定;筛选稳定表达Rictor-shRNA的前列腺癌CWR22RV1细胞株;Western blot检测稳定转染前列腺癌CWR22RV1细胞株Rictor的表达水平。结果 Rictor-shRNA慢病毒成功包装后转染前列腺癌CWR22RV1细胞,进行嘌呤霉素筛选,获得沉默Rictor基因的前列腺癌CWR22RV1细胞株,Western blot检测显示该细胞株Rictor水平明显降低(P<0.01)。结论成功构建了稳定沉默Rictor表达的前列腺癌CWR22RV1细胞株,为后续的实验了打下坚实的基础。

PD-1抑制剂通过STAT6介导肿瘤相关巨噬细胞极化抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭

目的探究PD-1抑制剂对肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)极化和前列腺癌细胞增殖和侵袭的作用及其相关机制。方法采集25例前列腺癌患者肿瘤及癌旁组织,实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测程序性死亡因子1(programmed death-1,PD-1)、巨噬细胞甘露糖受体(macrophage mannose receptor,CD206)和信号转导和转录激活因子6(signal transduction and transcription activator 6,STAT6)表达水平并进行斯皮尔曼(Spearman)相关性分析。将人单核细胞白血病细胞(human monocytic leukemia cells,THP-1)细胞诱导为TAM,期间加入PD-1抑制剂Camrelizumab,分组为M0组、M0+Camrelizumab组、TAM组、TAM+Camrelizumab组;THP-1细胞诱导为TAM期间加入STAT6抑制剂AS1517499,分组为M0组、M0+AS1517499组、TAM组、TAM+AS1517499组。通过qRT-PCR和蛋白质印迹法检测STAT6和CD206表达水平,酶联免疫吸附反应检测白介素13(interleukin-13,IL-13)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,iNOS)分泌水平。将各组细胞分别与前列腺癌细胞DU145共孵育,通过CCK8检测DU145细胞增殖水平,Transwell检测DU145细胞侵袭水平。结果与癌旁组织相比,前列腺肿瘤组织中PD-1、CD206和STAT6表达水平升高,并在肿瘤组织中呈正相关(P_(均)<0.05)。与M0组相比,TAM组CD206和STAT6表达水平升高,IL-13、TGF-β分泌水平增加,iNOS分泌水平减少,与其共孵育的DU145细胞增殖水平升高,侵袭能力增强(P_(均)<0.05)。与TAM组相比,TAM+Camrelizumab组CD206和STAT6表达水平降低,IL-13、TGF-β分泌水平减少,iNOS分泌水平增加,与其共孵育的DU145细胞增殖水平降低,侵袭能力减弱(P_(均)<0.05)。与TAM组相比,TAM+AS1517499组CD206表达水平降低,IL-13、TGF-β分泌水平减少,iNOS分泌水平增加,与其共孵育的DU145细胞增殖水平降低,侵袭能力减弱(P_(均)<0.05)。结论PD-1抑制剂通过抑制巨噬细胞向TAM极化从而降低前列腺癌细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能是通过抑制巨噬细胞STAT6通路实现。

血清DCLK1、sTim-3对前列腺癌根治术患者预后的评估价值

目的 探讨血清双皮质素样激酶1(DCLK1)、可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)对前列腺癌根治术患者预后的评估。方法 选取2016年6月至2019年6月在右江民族医学附属医院行前列腺癌根治术的80例患者作为研究组,另选取同期80例健康体检者作为对照组;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清DCLK1、sTim-3水平;分析血清DCLK1、sTim-3与前列腺癌根治术患者病理临床特征及预后的关系。结果 研究组血清DCLK1、sTim-3水平显著高于对照组(P <0.05)。血清DCLK1、sTim-3水平呈正相关(P <0.05)。二者与PSA水平、Gleason评分均呈正相关(P <0.05)。血清DCLK1、sTim-3表达水平与PSA水平、Gleason评分以及TNM分期有关(P <0.05)。预后死亡组血清DCLK1、sTim-3水平显著高于预后生存组(P <0.05)。DCLK1和sTim-3高表达患者生存率低于低表达患者。根据Cox回归分析表明,DCLK1、sTim-3高表达是影响前列腺癌根治术患者预后的危险因素(P <0.05)。根据ROC曲线得知,二者联合预测前列腺癌根治术患者预后的AUC优于DCLK1、sTim-3各自单独预测。结论 DCLK1、sTim-3在前列腺癌患者血清中显著升高,二者联合可以更好对前列腺癌根治术患者预后进行评估。