核受体NURR1在前列腺癌细胞中的表达及其对环状RNA表达谱的影响

目的探讨核受体NURR1过表达对前列腺癌(PCa)细胞中环状RNA(circRNA)表达谱的影响,为揭示NURR1相关circRNA分子在PCa进展过程中的作用提供参考。方法通过UALCAN和TNMplot分析NURR1在PCa中的表达;通过高通量测序分析筛选NURR1过表达的PCa细胞中特征性circRNA分子表达谱;通过GO和KEGG分析差异表达的circRNA分子的功能和参与的信号通路。结果circ_0000915在DU145、LNCaP以及PC3细胞中均发生显著的下调表达。在核受体NURR1上调表达的DU145细胞中,1个circRNA上调表达(circ_0005991),2个circRNA下调表达(circ_0001460、circ_0001315);在核受体NURR1上调表达的LNCaP细胞中有2个circRNA显著上调表达(circ_0040729、circ_0000722);在NURR1上调表达的PC3细胞中有3个circRNA上调表达(circ_0001577、circ_0000854、circ_0018168),4个circRNA下调表达(circ_013035、circ_0003028、circ_0082096、circ_0005320)。KEGG分析发现差异表达的circRNA分子与背侧/腹侧神经管模式、蛋白质折叠伴侣、无序结构域特异性结合、BMP信号通路的正调控以及神经管模式化功能显著相关。结论circRNA在NURR1介导的PCa进展过程中发挥着重要作用,但是在不同的PCa细胞类型中存在着一定的差异。核受体NURR1与circ_0000915分子在PCa进展中的分子机制有待进一步研究。

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的探讨复方中药紫龙金 (简称紫龙金 )对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用机制。方法应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响 ,应用RT PCR方法检测前列腺特异性抗原基因 (PSA)和雄激素受体 (AR) ,凋亡相关基因bcl 2和bax蛋白表达的影响 ;应用Westernblot方法测定对bcl 2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G0 /G1期阻滞和诱导凋亡作用 ,作用 72h时IC50 为 0 .79mg/ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl 2的表达 ,降低bcl 2蛋白表达 ,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0 /G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl 2基因表达 ,降低bcl 2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。

多肽K237与前列腺癌细胞系LNcap的亲和性

目的:研究多肽K237与前列腺癌细胞系LNcap的亲和性。方法:采用免疫组化染色和RT-PCR,检测与K237结合的VEGF受体KDR的表达;用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察多肽K237与前列腺癌细胞系LNcap的结合能力。结果:前列腺癌细胞系LNcap中有KDR的表达;流式结果显示:多肽K237以浓度依赖性与LNcap细胞结合。激光共聚焦显微镜可观察到,多肽K237结合在LNcap细胞的胞浆和胞膜中。结论:多肽K237对前列腺癌细胞系LNcap具有较高的亲和性,为利用多肽K237通过抑制自分泌途径从而抑制前列腺癌细胞的增殖提供了基础,为肿瘤的治疗提供了新的方法。

恩杂鲁胺对前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响及其机制研究

探讨雄激素受体抑制剂恩杂鲁胺对人前列腺癌LNCaP细胞衰老的影响。使用CCK8实验检测LNCaP细胞对恩杂鲁胺的IC50,将加入等体积DMSO的LNCaP细胞定义为对照组,LNCaP细胞以IC50浓度的恩杂鲁胺慢性处理1个月设为实验组。β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老;克隆形成实验检测细胞增殖;蛋白免疫印记实验检测雄激素受体,衰老标志蛋白的表达情况和信号转导机制。结果显示LNCaP细胞在1 μM (IC50)剂量恩杂鲁胺慢性暴露后,雄激素受体被抑制,细胞发生衰老,表现为β-半乳糖苷酶染色增多,衰老标记蛋白p16,p21表达上调。通过对信号转导研究发现,实验组中YAP1磷酸化水平降低,入核增多,YAP1可能是恩杂鲁胺致LNCaP细胞衰老的关键信号。

帕米磷酸二钠及埃本磷酸二钠对前列腺癌细胞系DU145、LNCaP体外生长的抑制作用

目的 观察帕米磷酸二钠 (PAM )及埃本磷酸二钠 (IBN )对体外培养的前列腺癌细胞系DU 14 5、LNCaP生长的抑制作用 ,探讨双磷酸盐类药物抑制前列腺癌细胞生长的机制。方法 采用MTT法检测不同剂量的PAM、IBN对DU 14 5、LNCaP细胞系生长的影响 ,并计算 2种药物的IC50 值 ,应用流式细胞仪检测DNA含量以探讨双磷酸盐类药物的作用机制。结果 PAM、IBN对前列腺癌DU 14 5、LNCaP细胞系的生长均有抑制作用 ,抑制效应与药物剂量、作用时间成正比 ,15 0 μg/mlPAM和 10 0 μg/mlIBN作用 72h后 ,2种细胞的生存率均低于 40 .0 0 % (P <0 .0 5 )。根据IC50 值可知IBN对前列腺癌细胞的抑制作用比PAM强。结论 PAM、IBN对体外生长的前列腺癌细胞系DU 14 5、LNCaP产生剂量、时间依赖性的抑制作用 ,其抑制细胞的作用机制为促进癌细胞凋亡和干扰DNA合成。

应用SRB法测定抗孕激素米非司酮对人类前列腺癌LNCaP细胞系活力的抑制作用

目的：应用一种新的细胞毒性的检测方法SRB（SulforhodamineB)硫基罗丹明B蛋白染料结合测定法，检测抗孕激素米非司酮对人类前列腺癌细胞系雄激素依赖型LNCaPC4及雄激素非依赖型LNCaPC4－2细胞株活力的抑制作用。方法：应用一新型染料SRB蛋白染料结合测定法。结果：抗孕激素米司酮对前列腺细胞系有显著的时间及剂量依赖性的生长抑制剂（P＜0．05），雄激素难中性LNCaPC4细胞株及雄激素素非依赖性LNCaPC4－2细胞株之间抑制作用无显著性差异（P＞0．05），均有显著的抑制作用，结果：SBR染色法是培养细胞蛋白含量的快速，敏感而且廉价的方法，它提供了一非破坏性的稳定的肉眼可见的比色终点，是药物介导的细胞毒性的敏感性的检测方法，本实验得出抗孕激素米非司酮对前列腺细胞有明显抑制作用，因此这种新型的染色法SRB法可应用于抗癌药的筛选，可替代MTT法，应用抗孕激素米司酮为雄素非依赖性前列腺癌提供一种新珠治疗途径。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞系LNCaP-ADR的建立与鉴定

目的建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞系LNCaP-ADR,为进一步研究前列腺癌的去势抵抗治疗机制奠定实验基础。方法将雄激素依赖性的前列腺癌细胞LNCaP作为亲本细胞,用含有10%木炭-右旋糖酐剥离的胎牛血清无酚红的RPMI 1640培养基进行雄激素剥夺培养,建立雄激素非依赖性的前列腺癌细胞系LNCaP-ADR。通过MTS实验和平板克隆形成实验,比较LNCaP亲本细胞和LNCaP-ADR细胞在雄激素剥夺培养条件下的增殖能力及对雄激素受体(AR)拮抗剂比卡鲁胺的敏感性;采用流式细胞术观察两种细胞在雄激素剥夺培养或比卡鲁胺处理下的细胞凋亡率,采用RT-qPCR检测AR信号通路靶基因PSA、TMPRSS2的表达变化。结果MTS实验和平板克隆形成实验结果表明,在雄激素剥夺培养条件下,雄激素非依赖性前列腺癌细胞系LNCaP-ADR的增殖能力和克隆形成能力较LNCaP亲本细胞增高(P均<0.01);细胞凋亡结果显示,LNCaP亲本细胞在雄激素剥夺培养条件下的细胞凋亡率高于LNCaP-ADR细胞(P<0.05);细胞毒性实验及凋亡检测结果表明,与LNCaP亲本细胞相比,LNCaP-ADR细胞对比卡鲁胺的敏感性降低(LNCaP IC_(50)=49.18μmol·L^(-1)、LNCaP-ADR IC_(50)=94.21μmol·L^(-1)),相同浓度比卡鲁胺诱导LNCaP-ADR细胞发生的凋亡率较LNCaP亲本细胞减少;RT-qPCR结果显示,在雄激素剥夺培养条件下,LNCaP-ADR中AR下游靶基因PSA、TMPRSS2的表达水平较亲本细胞增高(P<0.01)。结论本实验成功构建了雄激素非依赖性前列腺癌细胞系LNCaP-ADR,该细胞系对雄激素剥夺及雄激素受体拮抗剂比卡鲁胺具有较强的抵抗特性。

靶向TRPV6的siRNA对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的体外研究

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术阻断前列腺癌LNCaP细胞中瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚家族6(TRPV6)基因的表达,探讨TRPV6基因沉默对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:针对TR-PV6基因,构建2条小干扰RNA(siRNA)序列;在脂质体介导下转染前列腺癌LNCaP细胞,用RT-PCR测定TRPV6mRNA的表达;MTT法和流式细胞技术测定siRNA对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:两条siRNA序列均能有效地阻断LNCaP细胞中TRPV6基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),且mRNA表达随着转染时间的延长而减少,转染72h后TRPV6mRNA的表达减少至对照组的27%和23%;siRNA转染能显著抑制LNCaP细胞增殖,转染48h细胞增殖抑制率最高,分别为34.53%和29.32%,与转染24h和72h比较有统计学意义(P<0.05);转染48h后,siRNA转染组G0～G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少,与空白对照组及阴性对照组相比有统计学差异(P<0.01);siRNA转染组细胞的凋亡率分别为14.45%和12.73%,显著高于空白对照组及阴性对照组3.78%和5.22%(P<0.05)。结论:针对TRPV6的siRNA在体外能有效地抑制LNCaP细胞TRPV6mRNA的转录,同时能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立

目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI。方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适应无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系。MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平。结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系。LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%。结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程。

下调基因PTTG1表达对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨下调垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)表达对雄激素非依赖性前列腺癌LNCa P-AI细胞增殖、侵袭、凋亡,以及对雄激素拮抗剂敏感性的影响。方法:LNCa P-AI细胞转染靶向PTTG1基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测PTTG1、p-Akt、p-ERK等蛋白表达水平,琼脂糖凝胶电泳法检测PTTG1 mRNA表达水平。结果:siRNA有效抑制了PTTG1的表达;下调PTTG1表达有效抑制了LNCa P-AI细胞在去雄激素培养液中的增殖,24、48、72 h抑制率分别为(19.47±2.12)%、(24.01±2.13)%、(48.02±2.22)%,组间比较有显著性差异(P<0.05);降低其侵袭力,Transwell试验显示,对照组、转染24、48、72 h后穿过聚碳酸酯膜细胞个数分别为111.11±13.47、74.67±9.85、56.44±8.66、37.33±6.14,组间比较有显著性差异(P<0.01);siRNA-PTTG1转染LNCa P-AI细胞后,空白对照组、转染24、48、72 h后凋亡率分别为(2.17±0.49)%、(18.32±0.94)%、(19.94±1.30)%、(21.73±1.88)%,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。siRNA联合氟他胺组对LNCa P-AI增殖的抑制作用和促凋亡作用显著强于siRNA或者氟他胺组,并呈氟他胺浓度相关性;50 nmol/L氟他胺、siRNA联合50 nmol/L氟他胺对LNCa P-AI的抑制率分别为(27.13±3.52)%、(67.51±5.13)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05);凋亡率分别为(3.94±0.48)%、(19.93±1.72)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05);100 nmol/L氟他胺、siRNA联合100 nmol/L氟他胺的抑制率分别为(43.72±3.90)%、(73.19±4.78)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05);凋亡率分别为(5.33±0.66)%、(23.43±1.76)%,两组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论:siRNA下调PTTG1表达能够抑制LNCa P-AI的增殖和侵袭,促进凋亡,提高了LNCa P-AI细胞对雄激素拮抗剂氟他胺的敏感性,抑制PTTG1表达可能会强化雄激素剥夺治疗晚期前列腺癌的作用。

高压氧对人前列腺癌LNCaP细胞株小鼠荷瘤模型作用的研究

目的:评估应用高压氧治疗前列腺癌放疗后出血性膀胱炎的安全性,探讨高压氧对体内前列腺癌细胞生长的影响。方法:采用人前列腺癌LNCaP细胞株皮下接种构建小鼠荷瘤模型(n=30),随机分为对照组(n=15)和实验组(n=15)。对照组常压常氧条件下饲养,实验组每周进行5次0.2MPa高压氧暴露,共计20次。连续观察4周两组移植瘤生长体积的变化,应用免疫组化法比较两组瘤体组织相关病理学特征指标:瘤体微血管密度(CD34)、瘤细胞增殖(Ki-67蛋白)以及瘤细胞凋亡(p53、p27蛋白)。结果:肿瘤接种后第28天,对照组移植瘤体积为(122.0±8.2)mm3,实验组为(120.0±7.9)mm3,两组差异无显著性(P>0.05);对照组移植瘤CD34及Ki-67、p53、p27蛋白表达的阳性细胞率分别为(36.2±4.9)%、(75.3±8.4)%、(44.2±5.7)%、(61.5±5.5)%,实验组分别为(39.3±5.2)%、(78.1±7.6)%、(40.4±6.2)%、(63.7±5.1)%,病理学特征均无显著性差异(P>0.05)。结论:高压氧对小鼠荷瘤模型前列腺癌细胞生长无促进作用,对前列腺癌中新生血管也无明显影响。

黄精凝集素PCL-2诱导人前列腺癌LNCap细胞凋亡及机制研究

研究黄精凝集素PCL-2对人前列腺癌LNCap细胞生物活性和可能的抗肿瘤机制。从黄精药材中提取分离得到黄精凝集素PCL-2,体外培养LNCap细胞,采用WST-1和集落形成实验评价PCL-2对LNCap细胞的增殖作用;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法检测LNCap细胞内ROS含量;qRT-PCR和Western blot法检测PCL-2对LNCap细胞中相关基因和蛋白表达的影响。研究结果显示PCL-2能显著抑制LNCap细胞的增殖,促进细胞中ROS生成;PCL-2通过上调LNCap细胞中Bax、Caspase-3及Caspase-9基因mRNA和蛋白表达并下调Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平诱导LNCap细胞凋亡。本研究结果表明PCL-2诱导LNCap细胞凋亡活性作用显著,可作为抑制前列腺癌的潜在药物。

比卡鲁胺联合环王巴明对人前列腺癌细胞LNCaP增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨比卡鲁胺联合环王巴明治疗前列腺癌的可行性及机制。方法用不同浓度比卡鲁胺、环王巴明及二者联合处理前列腺癌细胞LNCaP,MTT法测定细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹技术检测有活性Caspase-3的表达。结果比卡鲁胺、环王巴明随各自浓度增加,LNCaP细胞抑制率均逐渐增加,且呈时间和剂量依赖性,分别于50、5μmol/L浓度达到IC50。50μmol/L比卡鲁胺、5μmol/L环王巴明及二者联合处理48 h后细胞凋亡率分别为21.65%±3.05%、40.42%±5.43%、57.49%±5.95%,两两比较,P均<0.01。比卡鲁胺联合环王巴明后有活性Caspase-3蛋白表达明显增多。结论比卡鲁胺与环王巴明联合存在协同作用,可抑制LNCaP细胞增殖,诱导凋亡;其作用可能通过Caspase-3介导。

环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡作用及对PCA3基因表达的影响

目的:探讨环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的作用及对PCA3基因表达的影响。方法:不同浓度环巴胺(1、5、10、15μmol/L)干预LNCaP细胞,以只加入RPMI 1640培养液为空白对照组,分别在不同作用时间(24、48、72h),用MTT法检测其对细胞增殖的抑制、流式细胞术观察细胞凋亡率变化、Hoechst染色观察凋亡细胞形态变化、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)观察对PCA3基因表达的影响。结果:5、10、15μmol/L环巴胺对LNCaP细胞增殖均有显著抑制作用,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01),10μmol/L组于48h达到半数抑制量(IC50);10、15μmol/L组24、48、72hLNCaP细胞的凋亡率分别为37.21%、57.38%、57.98%和21.16%、71.31%、72.90%,与空白对照组相比差异均有显著性(P<0.01)。随着环巴胺浓度增大和作用时间的延长,LNCaP细胞凋亡显著增加。PCA3基因的表达随着环巴胺浓度的上升呈现明显的递减趋势,较空白对照组显著降低(P<0.01)。浓度为10μmol/L时,不同作用时间PCA3基因的表达均极低。结论:环巴胺浓度为10、15μmol/L作用48、72h时能够明显抑制LNCaP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并显著下调LNCaP细胞PCA3基因的表达。

Clusterin在前列腺癌LNCaP细胞中的抗凋亡作用

目的 :探讨Clusterin及其不同功能区域在前列腺癌细胞中的抗凋亡作用。方法 :以 pIRES2 EGFP质粒为载体 ,构建含有全长及缺失前导序列 (leadersequence)的Clusterin重组质粒 ,分别命名为 pIRES2 EGFP/cluac、pIRES2 EGFP/clubc。重组质粒转染前列腺癌细胞LNCaP后 ,以Westernblot检测LNCaP细胞及其培养上清液中Clusterin的表达 ,免疫细胞化学法检测不同功能区域Clusterin在细胞中的分布情况。应用Na2 SeO3 诱导LNCaP细胞凋亡 ,用流式细胞术 (FCM )及荧光显微镜检测Clusterin的抗凋亡作用。结果 :在转染 pIRES2 EGFP/cluac的LNCaP细胞培养上清及细胞裂解液中均检测到Clusterin的表达 ,转染 pIRES2 EGFP/clubc的LNCaP细胞 ,仅细胞裂解液中有Clusterin的表达 ,而培养上清液中未检测到。pIRES2 EGFP/cluac转染细胞中Clusterin在胞浆中呈聚集状态 ,而 pIRES2 EGFP/clubc转染细胞中Clusterin呈弥散分布。FCM及荧光显微镜检测证实 ,cluac转染对Na2 SeO3 诱导的LNCaP细胞凋亡有明显的抑制作用。结论 :Clusterin有明显的抗前列腺癌细胞凋亡作用 。

人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2和线粒体转录因子A在前列腺癌中的表达及意义

目的检测前列腺癌组织标本中人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)、人类线粒体转录因子A(TFAM)的表达,并分析其表达与Gleason评分的关系。方法用免疫组织化学S-P法检测40例前列腺癌组织标本中Nrf2与TFAM的表达,应用Spearman相关分析Gleason评分与Nrf2、TFAM表达强度的关系。结果 Nrf2和TFAM的表达与Gleason评分正相关(P值为0.0052,0.0003);Nrf2与TFAM的表达也有相关性(P=0.006)。结论 Nrf2与TFAM是前列腺癌恶性程度的相关因素之一,Nrf2与TFAM很可能通过同一机制参与前列腺癌的发生发展过程。

SATB1在人不同前列腺癌细胞系中表达的实验研究

目的:探讨SATB1与前列腺癌增殖及侵袭发生的关系。方法:体外培养前列腺癌细胞系(LNCa P、PC3、DU145),MMT法检测其增殖能力;Tanswell细胞侵袭实验检测其侵袭能力;RT-PCR检测其SATB1 mRNA的表达情况;Western blot检测其SATB1蛋白质的表达。结果:前列腺癌细胞PC3和DU145的增值能力及侵袭能力比LNCaP强(P<0.01),PC3和DU145细胞中SATB1 mRNA及蛋白质表达水平均显著高于LNCaP细胞(P<0.01)。结论:SATB1在前列腺癌表达水平可能与前列腺癌的增殖和侵袭正相关。

藤茶提取物通过PI3K/Akt/Bcl-2途径抑制人前列腺癌LNCaP细胞增殖的机制研究

目的探讨藤茶提取物对人前列腺癌细胞LNCaP细胞增殖抑制的作用机制。方法 LNCaP细胞分为对照组、藤茶提取物不同浓度组,MTT法检测细胞的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50),流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,Western-blot法检测PI3K/Akt通路PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达。结果藤茶提取物在10~50μg/mL浓度范围内对LNCaP细胞增殖抑制作用随剂量的升高而升高,IC50为28.45μg/mL;与对照组比,藤茶提取物25、50μg/mL处理组LNCaP细胞凋亡率明显升高(P<0.05,P<0.01),p-Akt、Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论藤茶提取物对LNCaP细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt细胞信号通路下调Bcl-2蛋白表达从而促进凋亡。

藤茶提取物对人前列腺癌LNcap细胞凋亡作用研究

目的:研究藤茶提取物对人前列腺癌LNcap细胞凋亡的作用。方法:用流式Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:藤茶提取物对LNcap细胞作用24h后,细胞凋亡率显著增加,且有量效关系。结论:藤茶提取物可显著诱导LNcap细胞凋亡。

雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞亚系模型的建立

目的利用雄激素递减法建立雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞亚系模型LNCaP-AI。方法利用活性炭/葡聚糖处理的血清模拟去雄激素环境培养LNCaP细胞,逐渐递减培养基中雄激素10 d,然后在无雄激素环境中继续培养6个月,培养出能够在无雄激素环境中生长的LNCaP-AI细胞亚系。采用MTT和ELISA法检测LNCaP-AI细胞在去雄激素环境下的增殖能力和前列腺特异性抗原(PSA)的水平。结果 LNCaP细胞在去雄激素环境培养初期生长缓慢,细胞形态呈神经内分泌样改变,经过6个月的连续无雄激素培养,细胞恢复以前的形态和生长。MTT检测表明LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中生长,通过ELISA检测PSA的分泌提示LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中恢复分泌PSA的功能。结论激素递减法成功的建立了AIPC细胞亚系模型LNCaP-AI,利用该模型能够模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程。