DZNep通过下调EZH2蛋白表达抑制人前列腺癌PC3细胞增殖

目的研究EZH2蛋白抑制剂DZNep对前列腺癌PC3细胞增殖的影响及其用于人前列腺癌治疗的潜在价值。方法 MTT分析DZNep处理、siRNA敲低EZH2和EZH2过表达对PC3细胞增殖的影响,Western blot检测EZH2和Bax/Bcl-2的表达。结果 DZNep抑制PC-3细胞增殖、诱导细胞凋亡,上调Bax基因表达并下调Bcl-2基因表达。敲低EZH2抑制PC3细胞增殖,过表达EZH2则拮抗DZNep对PC3细胞的增殖抑制。结论 DZNep通过下调EZH2表达、诱导细胞凋亡发生从而抑制PC3细胞增殖。DZNep具有抗人前列腺癌治疗的潜在应用前景。

黄腐酚抑制人前列腺癌PC3细胞增殖机制初探

目的:初步探讨黄腐酚抑制人前列腺癌PC3细胞增殖机制。方法:检测细胞周期和凋亡分析黄腐酚对PC3细胞增殖的影响;Western blot分析黄腐酚对Notch信号通路关键蛋白的作用。结果:黄腐酚可以抑制PC3细胞增殖,同时降低Notch信号通路活性。在黄腐酚对Notch信号通路的作用机制研究中发现,黄腐酚能够降低GSK-3β活性,引起Notch信号通路活性降低。结论:黄腐酚可能是通过抑制GSK-3β活性从而降低Notch信号通路活性,最终抑制PC3细胞的增殖。

右美托咪定对人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭及成瘤能力的影响及机制研究

目的:分析右美托咪(Dex)对人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭及成瘤能力的影响与机制。方法:人前列腺癌PC3细胞分为对照组、Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组,分别采用0、1、2、5μmol/L Dex处理。CCK8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Transwell检测各组细胞侵袭能力,裸鼠移植瘤检测成瘤能力,Western印迹检测各组细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白的表达。结果:对照组、Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组PC3细胞A值随时间延长而升高(P<0.05),与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组PC3细胞A值随Dex剂量的增加而降低,凋亡率随Dex剂量的增加而升高(P<0.05);与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组细胞凋亡率与细胞穿膜数量随Dex剂量的升高而降低(P<0.05);对照组、Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组裸鼠移植瘤体积随时间延长而增大(P<0.05),与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组移植瘤体积随Dex剂量的增加而缩小(P<0.05)。与对照组比较,Dex 1组、Dex 2组、Dex 3组磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)/细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)随剂量增加而降低(P<0.05)。结论:Dex能抑制人前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭,促进凋亡,降低其成瘤能力,其机制与MAPK信号通路中ERK、JNK磷酸化活性下降有关。

辛伐他汀对人前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及Ras/Rho通路的影响

目的探讨辛伐他汀对人前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及Ras/Rho信号通路的影响。方法体外培养PC3细胞,阴性对照组(A组)加入无血清RPMI-1640培养基,阳性对照组(B组)加入含有终浓度为4μmol/L的多西紫杉醇,辛伐他汀低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组)分别加入终浓度为1.25,2.50,5.00μmol/L的辛伐他汀,继续培养48 h后采用细胞增殖成像分析(EDU)法测定PC3细胞的增殖水平,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法测定PC3细胞凋亡水平,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定培养基中睾酮和二氢睾酮(DHT)的浓度,采用实时荧光定量PCR检测PC3细胞中let-7、神经母细胞瘤Ras病毒癌基因同源物(NRAS)、Ras和Rho mRNA水平。结果与A组相比,B组和C1组、C2组、C3组的5-乙基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)掺入率、睾酮、DHT、NRAS、Ras和Rho显著降低,细胞凋亡率和let-7显著增加(P<0.05);与B组相比,C1组、C2组、C3组的EDU掺入率、睾酮、DHT、NRAS、Ras和Rho增加,细胞凋亡率和let-7降低,随着辛伐他汀剂量的增加,EDU掺入率、睾酮、DHT、NRAS、Ras和Rho逐渐降低,细胞凋亡率和let-7逐渐增加(P<0.05)。结论辛伐他汀可能通过激活Ras/Rho信号通路,抑制PC3细胞增殖,并促进其凋亡。

灯盏花乙素抑制人前列腺癌细胞系PC-3的增殖和迁移

目的探讨灯盏花乙素(STR)对人前列腺癌细胞系(PC-3)增殖、迁移的影响及其作用机制。方法PC-3细胞分为STR低、中和高剂量组、colivelin(STAT3激活剂)组、STR高剂量+colivelin组、对照组。CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;透射电镜观察细胞线粒体超微结构;比色法检测细胞内游离Fe 2+、丙二醛(MDA)含量及活性氧(ROS)水平;RT-qPCR检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA表达;Western blot检测p-STAT3、GPX4蛋白。结果与对照组对比,STR低、中和高剂量组细胞线粒体结构破坏明显,A 450值、集落形成率、划痕愈合率、PCNA、SLC7A11、MMP-9 mRNA表达及p-STAT3、GPX4蛋白降低(P<0.05),Fe 2+、MDA含量及ROS水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,colivelin组细胞中线粒体结构破坏有所改善,A 450值、集落形成率、划痕愈合率、PCNA、SLC7A11、MMP-9 mRNA表达及p-STAT3、GPX4蛋白升高,Fe 2+、MDA含量及ROS水平降低(P<0.05);与STR高剂量组相比,STR高剂量+colivelin组细胞中线粒体结构破坏有所减轻,A 450值、集落形成率、划痕愈合率、PCNA、SLC7A11、MMP-9 mRNA表达及p-STAT3、GPX4蛋白升高,Fe 2+、MDA含量及ROS水平降低(P<0.05)。结论STR降低和减弱前列腺癌细胞增殖和迁移能力,其机制可能与抑制STAT3/GPX4通路有关。

氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的表达明显下降且随浓度增加而下降,8μmol/L组下降最明显。氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1蛋白表达水平较对照组降低,4μmol/L组降低最为显著(P<0.05)。结论氧化苦参碱抑制前列腺癌PC-3细胞增殖活力,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡并在细胞增殖周期G1期中阻滞,其中的作用机制可能与CDK4/cyclinD1通路密切相关。

蛇葡萄素对人前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究蛇葡萄素对人前列腺癌PC3细胞的细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:利用MTT比色法检测蛇葡萄素对PC3细胞的抑制作用,并计算IC50;流式PI单染法检测细胞周期;流式Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果:蛇葡萄素能明显抑制PC3细胞增殖,并呈剂量依赖关系;使细胞增殖阻滞于S期,G0/G1期细胞数减少;蛇葡萄素对PC3细胞作用72小时后的凋亡率随剂量增加而加大。结论:蛇葡萄素显著抑制PC3细胞的增殖,引起细胞S期阻滞,诱导细胞凋亡。

lncRNA SNHG12靶向抑制miR-495-3p进而调控PI3K/Akt信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因12(SNHG12)靶向抑制miR-495-3p/磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12、miR-495-3p相对表达水平(将其中的DU145细胞分为si-NC组、si-SNHG12组、si-SNHG12+anti-miR-NC组、si-SNHG12+anti-miR-495-3p组,4组检测);双荧光素酶报告实验检测SNHG12与miR-495-3p靶向关系;MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白相对表达水平。结果 在前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12相对表达水平明显升高,miR-495-3p相对表达水平明显降低(P<0.05);敲低SNHG12可降低DU145细胞活性、PCNA、N-cadherin蛋白相对表达水平,减少迁移及侵袭细胞数,增加E-cadherin蛋白相对表达水平(P<0.05);SNHG12可靶向负调控miR-495-3p,下调miR-495-3p可逆转敲低SNHG12对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。与si-NC组相比,si-SNHG12组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05);与si-SNHG12+anti-miR-NC组相比,si-SNHG12+anti-miR-495-3p组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05)。结论 lncRNA SNHG12可能通过靶向抑制miR-495-3p/PI3K/Akt信号通路促进前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

靶向ADAM17基因siRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响

目的:探讨靶向抑制ADAM17基因对雄激素非信赖性前列腺癌PC-3细胞增殖的影响。方法:应用ADAM17 siRNA转染PC-3细胞后,通过RT-PCR、Western印迹方法分别检测ADAM17 mRNA和蛋白表达变化;MTT、BrdU掺入法检测下调ADAM17对PC-3细胞的增殖和DNA合成能力的影响;流式细胞术检测ADAM17 siR-NA对PC-3细胞细胞周期的影响;Western印迹检测下调ADAM17对PC-3细胞增殖相关基因表达的影响。结果:两对ADAM17 siRNAs均可有效地降低PC-3细胞ADAM17 mRNA和蛋白的表达;MTT结果显示与对照组(0.80±0.51)相比,两对ADAM17 siRNAs均可显著抑制细胞的生长(0.43±0.57、0.44±0.64,P均<0.05);Br-dU掺入实验显示与对照组(0.79±0.72)相比,ADAM17 siRNAs均能显著下调DNA的合成能力(0.48±0.43、0.54±0.59,P<0.05);流式细胞术结果显示,与对照组(41.38±1.53)%相比,ADAM17 siRNAs可显著增加G1期细胞数量[(61.83±2.41)%、(59.78±1.92)%,P均<0.05]、降低S期细胞数量[从(33.51±1.47)%减少到(23.64±2.56)%、(25.24±1.86)%,P均<0.05],同时伴随着cyclin D1蛋白的表达下降而p21蛋白的表达升高。结论:ADAM17 siRNA可以通过下调cyclin D1、上调p21的表达而抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,ADAM17可能成为前列腺癌基因治疗的靶点。

miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖

目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P<0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P<0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P>0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P<0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P<0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。

汉防己甲素对前列腺癌PC3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的研究汉防己甲素(Tetrandrine,TET)对人前列腺癌细胞PC3增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法用不同浓度TET(0、1、2、4、6、8、10μg/ml)处理PC3细胞,锥虫蓝拒染法和MTT法检测TET对PC3细胞生长的影响,流式细胞仪检测TET对PC3细胞凋亡的诱导作用,Western blot法检测TET对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP表达的影响。结果 2μg/ml TET作用24 h对PC3细胞生长的抑制率为(20.96±1.72)%,随着药物浓度的增加,抑制作用加强,10μg/ml TET作用24 h对PC3细胞生长的抑制率达(89.23±4.12)%。TET能诱导PC3细胞凋亡,并能明显诱导凋亡相关基因Caspase-3的剪切活化及其底物PARP的剪切失活。结论 TET能明显抑制PC3细胞生长,诱导细胞凋亡,该作用与TET诱导细胞Caspase-3剪切激活及PARP剪切失活有关。

腺病毒介导的PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclinD1、p21表达的影响

目的:构建携带抑癌基因PTEN的腺病毒载体,探讨PTEN基因对前列腺癌细胞株PC-3增殖及cyclin D1、p21表达的影响。方法:采用RT-PCR方法从大鼠海马神经元扩增目的基因PTEN,连接入pENTR2A载体,在293A细胞中进行重组腺病毒的包装及扩增。以携带PTEN基因的腺病毒载体感染体外培养的前列腺癌细胞株PC-3。采用间接免疫荧光法检测细胞中PTEN的过表达情况。Western印迹检测PTEN、cyclin D1和p21表达的变化,通过细胞生长实验、平板克隆实验检测PTEN对PC-3细胞增殖能力的影响。结果:成功构建重组腺病毒载体Ad-PTEN;PC-3细胞经Ad-PTEN感染后PTEN蛋白表达水平明显增加。Western印迹实验所得条带进行灰度值分析后与β-actin求比值,PTEN蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.215±0.065)明显高于对照组[(0.052±0.009),t=4.30,P<0.05]和Ad-LacZ组[(0.056±0.008),t=4.21,P<0.05]。cyclin D1蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.256±0.072)明显低于对照组[(0.502±0.087,t=3.77,P<0.05)]和Ad-LacZ组[(0.498±0.081,t=3.87,P<0.05)]。p21蛋白在Ad-PTEN感染组细胞中表达(0.589±0.076)明显高于对照组[(0.146±0.026,t=9.55,P<0.01)]和Ad-LacZ组[(0.163±0.024,t=9.26,P<0.01)]。MTT实验显示Ad-PTEN对PC-3细胞的抑制作用自48h后(21.98%)有显著性(t=6.80,P<0.01)。平板克隆实验显示Ad-PTEN组克隆形成率[(37.4±4.18)%]明显低于对照组[(54.9±4.81)%,t=4.76,P<0.01]及Ad-LacZ组[(56.5±5.42)%,t=4.83,P<0.01]。结论:通过腺病毒载体Ad-PTEN使PC-3细胞表达PTEN基因,可以明显抑制细胞的增殖,并可降低cyclin D1表达,同时增加p21的表达。

烟管头草水提物对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的:研究烟管头草水提物(AECC)对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法:将细胞分为对照组和AECC不同质量浓度组(5、10、20、40、80μg/L),加入相应药物或培养基培养不同时间(24、48、72 h)后,检测细胞存活率。将细胞分为对照组和AECC低、中、高质量浓度组(20、40、80μg/L),同法培养24 h后,采用Hoechst 33258染色法和流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;采用Transwell实验检测细胞迁移数和侵袭数;采用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot法检测AECC低、中质量浓度组细胞中β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关迁移与凋亡蛋白[β-catenin、基质金属蛋白酶7(MMP-7)、髓细胞瘤病毒致癌基因(c-Myc)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的mRNA和蛋白表达水平。结果:随着给药浓度的增加和作用时间的延长,AECC不同质量浓度组细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),且呈不断降低趋势。与对照组比较,AECC各质量浓度组细胞的早期凋亡率(中质量浓度组除外),细胞迁移数和侵袭数,以及AECC低、中质量浓度组细胞中MMP-7、c-Myc(低质量浓度组除外)、Bcl-2(低质量浓度组mRNA除外)的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);AECC各质量浓度组细胞的晚期凋亡率,AECC低、中质量浓度组细胞中β-catenin、caspases-3(低质量浓度组除外)、Bax(低质量浓度组mRNA除外)的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:AECC可抑制PC3细胞的增殖、迁移与侵袭,其作用机制可能与调控β-catenin信号通路相关的迁移与凋亡因子的表达有关。

靛玉红对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用

目的:研究中药成分靛玉红对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的杀伤作用及可能的机制。方法:采用MTT方法研究靛玉红对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用,采用Western印迹检测细胞周期蛋白cyclin D1及c-myc表达,采用流式细胞术检测细胞周期。结果:靛玉红降低前列腺癌细胞的存活率呈浓度依赖性,当浓度为5μmol/L时,可降低存活率至52.2%,当浓度为10μmol/L时,PC-3细胞存活率降至13.6%。靛玉红浓度为5μmol/L时可明显抑制PC-3细胞的细胞周期,结果显示G0/G1期PC-3细胞增多,而与此同时S期和G2/M期细胞减少。此外,靛玉红可以抑制细胞周期进展关键调控蛋白cyclin D1,以及与之相关Wnt信号通路的下游基因c-myc的表达。结论:靛玉红可以抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能与其抑制细胞周期以及抑制Wnt信号通路有关。

小檗碱对人前列腺癌细胞株PC3增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察小檗碱对人前列腺癌细胞株PC3增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法取对数生长期PC3细胞分为A、B、C、D、E组,分别加入终浓度为10、25、50、75、100μmol/L小檗碱培养,对照组只加dd H2O。观察培养24、48 h时各组细胞增殖情况。另取培养48 h时PC3细胞(观察组),加入终浓度为75μmol/L小檗碱培养,对照组只加细胞培养液,观察细胞凋亡情况,检测剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-Caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)。结果随浓度升高,A、B、C、D、E组细胞增殖抑制率增加,P均<0.05;随培养时间增加,A、B、C、D、E组细胞增殖抑制率增加,P均<0.05。培养48 h时观察组及对照组细胞凋亡率分别为74.43%±5.69%、2.51%±0.86%,观察组细胞凋亡率与对照组比较明显升高(P<0.05)。培养48 h时观察组细胞Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3蛋白的相对表达量分别为0.30±0.02、0.56±0.03、0.37±0.03、0.10±0.01,对照组分别为0.15±0.04、0.41±0.03、0.58±0.04、0.11±0.02。与对照组相比,观察组细胞Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白的相对表达量均升高,Bcl-2蛋白的相对表达量降低(P均<0.05),而LC3蛋白的相对表达量无明显变化。结论小檗碱可抑制PC3细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与小檗碱可上调Cleaved-Caspase-3、Bax表达,抑制Bcl-2表达有关。

番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨番茄汁对人前列腺癌PC-3细胞生长抑制作用及其机理研究。方法:番茄红素及不同浓度番茄汁作用于人前列腺癌PC-3细胞48h;采用生长曲线及噻唑蓝(MTT)法检测番茄汁、番茄红素对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用,通过原位(缺口)末端标记法(TUNEL)法观察凋亡细胞的形态结构变化,流式细胞仪检测细胞凋亡峰。结果:番茄汁、番茄红素能显著抑制人前列腺癌PC-3细胞生长;TUNEL方法检测呈阳性;流式细胞仪分析图上出现典型的凋亡细胞峰。以上各指标中,番茄汁随着浓度增大其作用加强;低剂量组的作用虽比番茄红素组差,中剂量组的作用与番茄红素组相比无差别,高剂量组的作用比番茄红素组强。结论:番茄汁对抗人前列腺癌PC-3细胞的作用,除番茄红素外,可能还存在其他抗癌成分的交互作用。番茄汁、番茄红素对PC-3细胞生长抑制作用的机理可能与其诱导人前列腺癌PC-3细胞细胞凋亡有关。

土贝母苷甲对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖和形态学的影响

目的:从细胞水平探讨土贝母苷甲(TBMS1)对PC3细胞的抗肿瘤作用,为临床前列腺癌的有效治疗提供相应的理论依据。方法:利用MTT比色法检测TBMS1对PC3细胞的抑制作用,并计算抑制率。瑞氏染色法观察TBMS1作用细胞后,细胞内部形态学变化。结果:土贝母苷甲能明显抑制PC3细胞的增殖,并呈剂量依赖性。细胞形态呈典型的凋亡形态学改变。结论:土贝母苷甲显著抑制PC3细胞的增殖,具有一定的抗前列腺癌作用。

lncRNA LINC00308作为ceRNA通过调控miR-361-5p/TRIP13轴促进前列腺癌PC3细胞的增殖和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00308对前列腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的影响及其相关作用机制。方法:利用基因芯片在前列腺癌组织与癌旁对照组织中筛选差异表达的lncRNA及mRNA,并确定LINC00308及甲状腺激素受体因子13(thyroid hormone receptor interactor13,TRIP13)为研究对象。MTT实验、平板克隆及Transwell和划痕实验检测LINC00308对前列腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,应用裸鼠移植瘤在体内验证上述影响,应用Western blotting及免疫组化实验在瘤组织和癌细胞中探究LINC00308对TRIP13表达的影响。生物信息学分析技术与RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)及qPCR和双荧光素酶基因报告实验预测并探究miR-361-5p与LINC00308及TRIP13之间的相互作用机制,并利用平板克隆、Transwell侵袭实验对癌细胞恶性生物行为进行验证。结果:芯片结果及qPCR共同证实LINC00308(P<0.01)与TRIP13(P<0.05)在前列腺癌组织及4种细胞系中均异常高表达;细胞功能实验结果表明过表达LINC00308可以促进前列腺癌细胞PC3的增殖、侵袭及迁移能力(均P<0.05),而下调前列腺癌细胞中LINC00308表达起相反作用。裸鼠移植瘤实验证实,LINC00308能够在体内促进前列腺癌PC3细胞的成瘤(P<0.05或P<0.01),且能够在体内体外促进TRIP13表达(P<0.05)。生物信息学分析与RIP及qPCR和双荧光素酶基因报告实验结果证实miR-361-5p能够分别与LINC00308与TRIP13的3'-UTR靶向结合,且LINC00308能够通过吸附miR-361-5p而作为内源性竞争RNA(competing endoge-nous RNA,ceRNA)调控TRIP13的表达,MTT、平板克隆及Transwell实验检测癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力变化证实了三者之间的调控作用。结论:在前列腺癌组织和细胞中异常高表达的LINC00308通过发挥ceRNA的功能抑制miR-361-5p表达而增强TRIP13表达,从而促进前列腺癌的增殖、侵袭及迁移能力。

Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响

目的研究cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法体外培养的PC-3细胞应用cyclopamine处理后,通过MTT测定细胞增殖抑制情况;电镜下观察肿瘤组织形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率;Western印迹技术检测Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白的表达变化。结果MTT法结果显示4μmol/L,8μmol/L及12μmol/L浓度的cyclopamine对PC-3细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01),抑制效果都随着浓度的增大及时间的增加而增强。电镜下可观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果表明cyclopamine诱导PC-3细胞发生凋亡;Western印迹技术的结果:经培养72h后,随着药物浓度增大,Bcl-2蛋白表达呈逐渐减少,而Bax,有活性的caspase-9蛋白表达逐渐增多。结论Cyclopamine抑制PC-3细胞增殖,在一定剂量和时间范围内呈时间、浓度依赖关系,并可诱导其凋亡。Cyclopamine诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bcl-2,Bax,caspase-9介导。

内皮素A受体拮抗剂BQ123对前列腺癌PC-3M细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察内皮素A受体拮抗剂BQ123对转移性前列腺癌(PCa)PC-3M细胞株增殖与凋亡的影响,初步探讨内皮素A受体拮抗剂对转移性PCa细胞的体外抗肿瘤效应。方法:实验分为两组,对照组为PC-3M细胞及含灭活小牛血清的F12/RMPI1640培养液;实验组为PC-3M细胞加入等量的1μmol/LBQ123。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验观察BQ123对人PCaPC-3M细胞株增殖的抑制效应,利用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测BQ123诱导PC-3M细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系。结果:MTT比色法结果显示BQ123随着作用时间的增加,对PC-3M的抑制率分别为24h22.32%、48h44.88%和72h64.47%,表现出良好的时效关系(P<0.05),划痕损伤实验结果提示:实验组PC-3M细胞的迁移距离分别为12h(103.42±75.63)μm、24h(243.75±121.53)μm和48h(422.07±36.01)μm,均低于对照组的12h(162.93±19.87)μm、24h(317.19±43.19)μm和48h(692.74±40.84)μm(P<0.05)。细胞迁移实验中实验组穿入下室的PC-3M细胞为(79.2±9.58)个,亦明显少于对照组的(92.6±5.94)个(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染色法的结果显示对照组PC-3M细胞凋亡率为(9.38±1.37)%,实验组PC-3M细胞凋亡率为(15.03±0.93)%,差异有统计学意义(P<0.05),细胞周期实验的结果显示实验组各期细胞比例与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结论:BQ123对PCaPC-3M细胞株的生长、迁移和侵袭能力均有明显的抑制作用,且可以诱导PC-3M细胞凋亡,可为PCa治疗的研究提供一种新的思路。